Shpargalka_po_biohimii(ceccuu.net) / T4

БИЛЕТ 4

1.Физико-химические свойства белков. Молекулярная масса, размеры и форма, растворимость,

гидратация и электрический заряд белка. Методы выделения индивидуальных белков. Критерии чистоты белков.

Класс-ия на осн-ии р-римости: 1.Альбумины (Растворимы в воде и солевых р-рах); 2.Глобулины (Слаборастворимы в воде, но хорошо растворимы в солевых р-рах); 3.Проламины (Растворимы в 70—80%-ном этаноле, но нер-римы в воде и в абсолютном этаноле, много Arg); 4.Гистоны (Растворимы в солевых растворах); 5.Склеропротеины (Нер-римы в воде и солевых растворах, много Gly, Ala, Pro). Размеры и масса (примеры): Min= инсулин (бык, 21 и 30 АК-остатков, M_r=5733), Max= Миозин (кролик, ~2300 АК-остатков, M_r=470000). Функция не коррелир. с размерами (глатаминсинтетаза E.coli M_r=600000, мозг человека –380000).

Послед-ть АК определяет строение и функцию, i.e.: Коллаген (много Pro & Gly почти полн.состоит из послед-тей Gly-др.АК-Pro), Рибонуклеаза и гистоны H3 (не содерж.Trp). Форма: Фибриллярные (i.e.коллаген – пр.не р-римы в воде); Глобулярн. (гидрофоб.АК «спрятаны» втутри молекулы, наиб.р-римы); Мембранн. (хорошо р-римы в детергентах, мало гидрофил.АК).

Методы разделения белков. Основа: белки наименее р-римы в изоэлектрич.точке (сумм.заряд =0) подбир.рН, при кот.они выпад.в осадок. +Р-римость белков ~ионной силе р-ра (для глобул.белков  при с росто ион.силы). 1.Хроматография по размеру (в колонке – декстран.полимеры, агароза или полиакриламид; 2.Диализ и ультрафильтрация (мешочек с полупрониц.мембраной выходят только мелкие молек.); 3.Электрофорез (подвижность молек.в эл.поле ~ее заряду и напряжению поля и ~(1/вязкость среды и расст-ию м/у электродами); Разновид-ть: SDS-гель-электрофорез (SDS =sodium dodecylsulfate: 1 молек.несет 2 «-» заряда, связ-ся с белком пропорцион.его всегда длине); 4.Изоэлектрическое фокусирование (р-р амфолитов – в гель +эл.поле двиг-ся создается градиент рН добавл.белк.смесь распределение в зав-ти от изоэлектр.точки); 5.2х-осевой гель-электрофорез (сначала изэлектр.фокус. SDS-гель-электрофорез, т.е. сначала разделение по изоэл.т., а затем – по размеру); 6.Хроматография по сродству (use вз-ие «фермент-субстрат» или «белок-антитело к этому белку», затем – вымываем или высаливаем нужн.белок); 7.Хроматография на гидрофоб.вз-иях (на полимере в колонке расп.гидрофоб. группы, i.e.Фенил-сефароза высок.конц. солей гидрофоб.связ-ие изм-ем конц.соли фракции разл.белков); 8.Высоко-эффект (?) жидк.хроматография (через колонку прогоняют полярн.р-р частицы р-ряются в нем и вымываются в зав-ти от из способн-ти разствор-ся в полярн.жид-ти); 9.Ультрафентрифугирование (Коэфф.седиментации =(ρ_р-ρ_m)V/f, где ρ_р – плотность самой частицы, ρ_m – плотность среды, V – размер частицы, f – тем больше, чем более форма отлична от сферической мелкие част.непр.формы оседают медленее).

2. Катаболизм глюкозы. Аэробный распад - основной путь катаболизма глюкозы у человека и

других аэробных организмов. Последовательность реакций от глюкозы до образования

пирувата как специфический для глюкозы путь катаболизма.

Не оч.понятно, что писать: путь от глюкозы до пирувата –это глюколиз, а надо говорить про «аэробный» распад. В общем, вот схема гликолиза и направлений метаболизма глюкозы.

3.Полуконсервативная репликация ДНК. Основные проблемы репликации.

Репликац ДНК полуконсер-на.Уотсон и Крик предпол,что 1из цепей кажд дочерн молДНК синтез-ся заново,а др происх от родител-ой молДНК.Такое распред-е ат-ов родит-ой мол назыв полуконсер-ым.Экспер для провер этой гипот.РодителДНК пометили тяж изотоп азота 15N,чтобы сдел ее бол тяж,чем обычДНК.Для этого выращив Е. coli в теч мн покол в среде,содерж-ей в качес единствен источ-ка азота 15NH4Cl.Затем бактер быстро перенос в среду,содержав 14N-стабильн изотоп азота.Этот эксперим долж был пок-ть,как распред-ся изотопы 14N и I5N в мол-ахДНК в ходе послед-их циклов репликац.Распред-е 14N и 15N в потомстве изучал с пом только что разработан мет равнов-ой седимен-ции в градиенте плотн-ти.Небол кол-во ДНК раств-ют в конц-ном раст-ре хлористого цезия с плотн,близкой к плот-ти ДНК( ~ 1 , 7 г/см3).Этот р-р центрифугируют до равновесн сост-я.Под действ противодейств-их процес седиментации и диффузии в центрифужн ячейке возник град конц-ции хлористого цезия.В резул создает устойчивый град плотн-ти.Под действ центробеж силы мол-лыДНКперех-ят в ту обл град-та,в кот плот-ть р-ра равна их собствен плавучей плот-ти.Высокомолекул-аяДНК обр четко выраж-ую полосу,обнаруж-ую по поглощ-ю ультрафиолет-го света.Мол-лы 14N-ДНК и 15N-ДНКхорошо раздел-ся в таком град-те,поскол их плот-ть различ на 1%.ДНК выделяли из бакт ч/з различ промежутки вр после переноса со среды,содержащ 15N, на 14N.Анализ этих образцов центрифугир-ем в град-те плот-ти показал,что после 1цикла репликацДНК дает 1полосу.Плот-ть этой полосы была равна в точн-ти среднеарифметич-му знач-ию м/ду плот-ью 14N- и 15N-ДНК.Отсутствие 15N-ДНК свидетельствовало о том,что целостность родителДНК в ходе репликац наруш-ся.Отсут-е 14N-ДНК показ-ло,что час ат всех дочерн молДНК происход от родителДНК.Соотнош 14N и 15N в дочерн мол-ах долж сост-ть 1:1,т.к плот-ть гибридн молДНК была ср м/ду 14N- и 15N-ДНК.После 2-х циклов репликацДНК распред-сь поровну в 2-х полосах. 1 из них-гибриднаяДНК,др -14N-ДНК.Меселсон и Сталь сделали выв,«что азот мол ДНК распредел-ся поровну м/ду двумя физич раздельными стр-ми,что после удвоения кажд дочерн мол получает 1из этих стр-р и что эти стр-ры сохран-ся интактными в тече мн удвоений».Полученные резул-ты прекрасно согласов-лись с моделью репликацДНК Уотсона—Крика.