Shpargalka_po_biohimii(ceccuu.net) / T5

БИЛЕТ 5

•Определение концентрации и молекулярной массы белков. Изменения белкового состава органов. Изменения белкового состава при онтогенезе и болезнях.

1:1метод:спектор белка(спектрофотометрия)Сам бол.амплит у триптофана.2мет:210-206нм-поглощает все, втом числе и воду.Сам выс требован к р-телю и приборам.И 1 и 2 метод хороши тем,что они быстр,прост и белок-образец не портится.3мет:Биоретовый:из2мол мочев греем получ аналог того, что есть в белке.Берем CuSO4 в щелочн усл.(чтобы в этих усл не осадился)добавл цитрат или тортон.Cu переход зи кислород.лигандов в др компл,координирующ еще и ат.N.Меняется цвет с синего на фиолетов.Чем бол пептидн св,тип более фиолет.560нм.Биоретовый реактив соед с белком, получ комплекс(чем больше пик, тем бол в сост белка).Метод не оч.чувствителен.4метод:м.Лоури:3мет+учитыв ОВ свойтства белка,мог давать молибденовую синь.Оч.чувствит мет.(много шумов).Завис от буфера.5мет:м.Бретфорд:испол текстил красит(кумаси)-гидрофобный анион.Некот образ коллоид в р-ре.Анион содит на белок-комплекс с белком(синего цвета)Чем бол конц белка,тем бол оптич пло-ть.6мет:сжигается белок до аммиака-опр-ся аммиак.N в белке 16%(мало диаминкарбон к-т).Синдром Бернара-семейн форма энзимопенической гемолитич анемии,хар-ся приступооразн течен при отсутс морфологич измен ЭЦ и наруш белков сост плазмы крови.Болезнь Альцгеймера(накопление амилоида).Онтогенез:разная стр-ра гемоглоб.Во взросл орг увелич сродство кислорода.

•Анаэробный распад глюкозы (анаэробный гликолиз). Гликолитическая оксидоредукция, пируват как акцептор водорода; субстратное фосфорилирование. Распределение и физиологическое значение анаэробного распада глюкозы.

Внедрение других сахаров в гликолитический путь. •Галактоза Галактозо-1-Ф UDP-галактоза UDP-глюкоза Глюкозо-1-Ф Глюкозо-6-Ф. •Манноза Маннозо-6-фосфат Фруктозо-6-фосфат. •Фруктоза (за счет альдолазы) дигидроксиацетонфосфат.

•ДНК-зависимые ДНК полимеразы прокариот, их строение и активности.

3.Артур Корнберг в 1956г.Инкубировал экстракт из клетокE.coli со смесью dATP,dTTP,dGTP,dCTP и ά-фосфатная группа, кот была помеч изотоп ³²Р.При этом синтезир небол кол-во новойДНК, содерж в своих фосфатн гр-ах изот ³²Р.Катализир-ей фермент-ДНКполимераза I.Был очищен и изучен.Он kat-ет последовательное присоед дезоксирибонуклеотидных остатков к концу цепиДНК, с одновр высвобожд неорганич пирофосфата, содерж β- и γ-фосфатн гр-ы каждого встраив-ся дизоксирибонуклеозид-5’-трифосфат.ур-е р-ции: (dNMP)n + dNTP↔(dNMP)n+1 + PPi. Где dNMP и dNTP

означ дизоксирибонуклеозид-5’-монофосфат и дизоксирибонуклеозид-5’-трифосфат.Если один из предшеств отсутст, то нов ДНК не образ.Для работы ДНКполимеразе необход Mg2+, а в его акт центре содер просн связан с фермен ион Zn2+. ДНКполимер катализ.ковалентн вяз-е новых дезоксирибонуклеотидов, кот происх благод присоед их ά-фосфатн групп к свободному 3’-гидроксил концу предсуществующей цепи ДНК, синт цепи ДНК происх от 5’-3’. Е затрачив на образ кажд фосфодиэфир св в остове ДНК, обеспечив расщепл пирофосфатн связи м/ду ά- и β-фосфатн групп предшест-ов-дезоксирибонуклеозид-5’-трифосфатов.Образ-ся пирофосфат разруш до фосфата,кот мож сдвиг р-цию в сторону ее заверш-я.ДНК полимерзная р.протек только,если в сист уже наход некот кол-во предшес-ей двуцепочечн ДНК.