- •Занятие №1.
- •2. Основные вопросы темы.
- •2.1. Что такое кровь и каковы ее функции?
- •2.2. Физико-химические свойства и химический состав крови.
- •2.3. Белки крови и их роль в организме.
- •2.4. Гипопротеинемия, гиперпротеинемия, диспротеинемия, парапротеинемия, причины возникновения.
- •2.5. Небелковые азотсодержащие вещества крови. Клиническое значение определения мочевины, креатинина в крови.
- •2.6. Клиническое значение биохимического анализа крови.
- •3. Лабораторно-практические работы.
- •3.1. Методика определения общего белка и белковых фракций в сыворотке крови рефрактометрическим методом.
- •3.2. Методика определения белковых фракций методом электрофореза на бумаге.
- •Тема: Биохимия крови. Метаболизм гемоглобина. Занятие №2.
- •2. Основные вопросы темы:
- •2.5.Распад гемоглобина. Прямой (конъюгированный) и непрямой (неконъюгированный) билирубин.
- •3. Лабораторно-практические работы.
- •3.1. Методика определения кальция в сыворотке крови.
- •3.2. Методика определения концентрации гемоглобина в крови.
3. Лабораторно-практические работы.
3.1. Методика определения кальция в сыворотке крови.
ПРИНЦИП МЕТОДА: органические соединения-комплексоны взаимодействуют с кальцием. В качестве комплексона используется трилон Б (ЭДТА-этилендиаминтетраацетат). Трилоном Б титруют ионы кальция, предварительно связанные с мурексидом (индикатор). Комплекс кальций-мурексид имеет красно-оранжевый цвет.
ХОД РАБОТЫ: свободный от кальция мурексид окрашивается в сине-фиолетовый цвет.
Готовится раствор мурексида для всей группы: в колбу вносят 100мл воды и 0,8мл 36% р-ра NaOH, перемешивают, затем добавляют смесь мурексида до появления ярко-фиолетовой окраски.
В широкую пробирку наливают 5мл р-ра мурексида и вносят 0,2мл исследуемой сыворотки (раствор розовеет), титруют (без промедления) р-ром трилона Б до фиолетовой окраски.
РАСЧЕТ:
1мл 0,1 моль/л р-ра трилона Б эквивалентен 0,12 мг кальция
Х= х 0,12 х 100 мг%
- количество мл трилона Б, пошедшего на титрование опытной пробы.
Коэффициент перерасчета: 0,2495 на ммоль/л
N = 2,25 – 2,64 ммоль/л
3.2. Методика определения концентрации гемоглобина в крови.
ПРИНЦИП МЕТОДА: Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин, образующий с ацетонциангидридом окрашенный гемиглобинцианид, поглощающий свет при длине волны 540 (520-560) нм. Концентрация образовавшегося гемиглобинцианида пропорциональна концентрации гемоглобина.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:
В пробирку вносят 5 мл трансформирующего раствора, затем добавляют 1 каплю крови и тщательно перемешивают. Инкубируют при комнатной температуре (+18-+20) в течение 20 минут и затем фотометрируют при длине волны 540 (520-560) нм.
Концентрация гемоглобина в пробе крови вычисляют по формуле:
Е________
С= Ек*Ск*251, где:
С – концентрация гемоглобина, г/л.
Е – оптическая плотность пробы;
Ек – оптическая плотность в калибровочном растворе гемиглобинцианида;
Ск –концентрация гемиглобинцианид в калибровочном растворе, г/л.
251 –коэффициент разведения пробы крови
Оптическая плотность калибровочного раствора гемиглобинцианида Ек=0,54
Ск = 0,602 г/л
Норма гемоглобина у мужчин равна 130-160 г/л , у женщин – 120-145 г/л