ВКР Аскорбиновая кислота (Коновалов)
.pdfm – объем выборки;
SD – стандартное отклонение
Для тестирования методики на правильность готовили три модельные смеси из разных навесок с точным содержанием каждого из компонентов,
включая и вспомогательные вещества (таблица 3).
Таблица 3. Приготовление модельных растворов кислоты аскорбиновой
Модельная смесь |
1 |
2 |
3 |
|
|
|
|
Навеска кислоты аскорбиновой (г) |
4,0 |
5,0 |
6,0 |
|
|
|
|
Трилона Б (г) |
0,02 |
0,025 |
0,03 |
|
|
|
|
Натрия гидрокарбоната (г) |
1,908 |
2,385 |
2,862 |
|
|
|
|
Натрия сульфита безводного (г) |
0,16 |
0,200 |
0,24 |
|
|
|
|
Воды для инъекций |
До 100 мл |
До 100 мл |
До 100 мл |
|
|
|
|
Раствор А1 (модельная смесь 1) Точные навески кислоты аскорбиновой (4,0
г), трилона Б (0,02г), натрия гидрокарбоната (1,908г) и натрия сульфита
(0,16 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.
Раствор А2 (модельная смесь 2) Точные навески кислоты аскорбиновой (5,0
г), трилона Б (0,025 г), натрия гидрокарбоната (2,385 г) и натрия сульфита
(0,200 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.
Раствор А3 (модельная смесь 3) Точные навески кислоты аскорбиновой (6,0
г), трилона Б (0,03 г), натрия гидрокарбоната (2,862г) и натрия сульфита
(0,24г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.
Проводят 3 параллельных титрования на трех уровнях концентраций (9
определений) по следующей методике количественного определения:
К 1 мл каждой из модельных смесей (А1, А2, А3) прибавляют 5 мл воды, 0,15 мл 1% раствора формальдегида, 2 мл 2% раствора кислоты
хлороводородной, 0,5 мл 1% раствора калия йодида, 2 мл крахмала и тируют
31
0,0167 моль/л раствором йодата калия до появления светло-синего окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.
1 мл 0,0167 М раствора калия йодата соответствует 0,008824 г кислоты аскорбиновой.
Расчет содержания кислоты аскорбиновой (г/мл) проводят по формуле:
где: V– объем титранта, мл;
К– поправочный коэффициент; Т– титр калия йодата по определяемому веществу, г/мл;
а – навеска модельной смеси, взятая на анализ, мл.
Результаты занесли в таблицу №4 и рассчитали открываемость,
стандартное отклонение, относительное стандартное отклонение и коэффициент Стьюдента.
Таблица 4 – Результаты определения правильности методом йодатометрии
№ |
Урове |
Взято |
Взято |
Объем |
Найдено |
Откры |
Метрологи- |
п/п |
нь |
модельно |
лекарственного |
титранта, |
лекарств |
ваемос |
ческие |
|
|
й смеси, |
вещества, г |
мл |
енного |
ть |
характерис- |
|
|
(г или мл) |
|
|
веществ |
|
тики |
|
|
|
|
|
а, г |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
1 |
1,0 мл |
0,04 |
4,9 |
0,0406 |
101,4 |
̅=100,4 |
2 |
1 |
1,0 мл |
0,04 |
5,8 |
0,0474 |
102,3 |
SD=1,913 |
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
1 |
1,0 мл |
0,04 |
5,0 |
0,0412 |
103,5 |
RSD=1,27 |
|
|
|
|
|
|
|
t=0.94 |
4 |
2 |
1,0 мл |
0,05 |
5,7 |
0,0498 |
99,6 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
5 |
2 |
1,0 мл |
0,05 |
5,9 |
0,0488 |
97,7 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
6 |
2 |
1,0 мл |
0,05 |
6,1 |
0,0502 |
100,4 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
7 |
3 |
1,0 мл |
0,06 |
7,4 |
0,0607 |
101,6 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
8 |
3 |
1,0 мл |
0,06 |
7,2 |
0,0590 |
98,4 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
9 |
3 |
1,0 мл |
0,06 |
7,2 |
0,0595 |
99,1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
32 |
Т.о. R должно находиться в пределах от 98 до 102, следовательно, данная методика соответствует валидационной характеристике «правильность».
Поскольку t =0,94 << (95%, f) =2,31, что позволяет считать результаты выборки результатов свободными от систематической ошибки.
3.2.Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой
врастворе йодатометрическим методом по показателю
«Прецизионность»
Приготовили модельный раствор кислоты аскорбиновой №2.
Определение №1.
Провели 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 0,5 мл ЛП.
Определение №2.
Провели 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 1,0 мл ЛП.
Определение №3.
Провели 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 1,5 мл ЛП. Расчет содержания кислоты аскорбиновой (г) провели по формуле приведенной при определении правильности.
Результаты занесли в таблицу №5 и рассчитали стандартное отклонение (SD)
и относительное стандартное отклонение (RSD).
33
Таблица 5. Результаты определения прецизионности кислоты
аскорбиновой методом йодатометрии.
Навеска |
Объем |
Найдено, |
( X i X ) |
|
( X i |
|
2 |
Метрологические |
|
X ) |
|||||||||
для |
титранта, |
г/мл |
|
|
|
|
|
|
характеристики |
анализа,г |
мл |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
0,025 |
3,1 |
0,0509 |
0,0001 |
|
0,0000001 |
̅=0.051 |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0,025 |
3,2 |
0,051 |
0 |
|
|
0 |
|
|
SD=0.01 |
|
|
|
|
|
|
RSD=1.68 |
|||
0,025 |
3,0 |
0,049 |
0,002 |
|
0,00004 |
||||
|
|
|
|
|
|
|
|||
0,05 |
6,0 |
0,0486 |
0,0024 |
|
0,000057 |
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0,05 |
6,3 |
0,051 |
0 |
|
|
0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
0,05 |
6,0 |
0,048 |
0,003 |
|
0,00009 |
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|||
0,075 |
9,1 |
0,049 |
0,002 |
|
0,00004 |
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|||
0,075 |
9.3 |
0,0504 |
0,0006 |
|
0,0000003 |
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|||
0,075 |
9.7 |
0,0511 |
0,0001 |
|
0,0000001 |
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Врезультате проведенных исследований установлено, что RSD
соответствует по показателю прецизионность.
34
3.Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой
йодиметрическим методом
МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
К 1,0 мл препарата прибавляют 5 мл воды и титруют 0,05 М раствором йода до слабо-желтого окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.
1 мл 0,05 М раствора йода соответствует 0,008824 г кислоты аскорбиновой.
3.1. Валидационная оценка методики анализа кислоты
аскорбиновой в растворе иодиметрическим методом по показателю «Линейность».
Построение градуировочного графика
Точную навеску кислоты аскорбиновой (5 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и перемешивают (раствор А).
На титрование отмеривают последовательно 0,50 мл; 1,0 мл; 1,5 мл; 2,0
мл; 2,5 мл раствора А (0,075 г; 0,010 г; 0,125 г; 0,150 г; 0,175 г.) и проводят определение по методике описанной для количественного определения кислоты аскорбиновой.
Данные занесли в таблицу 6.
Таблица 6. Результаты титриметрического определения кислоты аскорбиновой йодиметрическим методом
Объем 5% раствора А (мл) |
|
0,5 |
1,0 |
1,5 |
|
2,0 |
2,5 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Содержание |
кислоты |
|
0,025 |
0,05 |
0,075 |
|
0,1 |
0,125 |
аскорбиновой г/ в навеске |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Объем 0,05 М йода (мл) |
|
2,5 |
5,1 |
8,9 |
|
11,0 |
13,1 |
|
|
|
|
|
|
|
|||
Построили градуировочный график зависимости концентраций от |
||||||||
объема титранта, |
рассчитали |
уравнение градуировочного |
графика и |
|||||
коэффициент корреляции. |
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
35 |
vk |
14 |
|
|
y = 113,61x - 5,7118 |
|
|
|
|
|
||
V, |
|
|
|
|
|
12 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
10 |
|
|
|
|
|
8 |
|
|
|
|
|
6 |
|
|
|
|
|
4 |
|
|
|
|
|
2 |
|
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
|
0 |
0,05 |
0,1 |
0,15 |
0,2 |
|
|
|
|
|
а,г |
Рисунок 2 - Градуировочный график зависимости объема титранта |
|||||
от концентрации кислоты аскорбиновой.
При математической обработке рассчитали величину коэффициента корреляции r. Коэффициент корреляции составил: r= 0,9966
Полученные результаты показали, что существует линейная зависимость между навеской кислоты аскорбиновой и объемом титранта –
0,05 М раствором йода.
3.2. Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой
в растворе йодиметрическим методом по показателю «Правильность».
Приготовили три модельных раствора кислоты аскорбиновой (табл. 7).
Таблица 7. Приготовление модельных растворов кислоты аскорбиновой
Модельная смесь |
1 |
2 |
3 |
|
|
|
|
|
|
Навеска |
кислоты |
4,0 |
5,0 |
6,0 |
аскорбиновой (г) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Трилона Б (г) |
0,02 |
0,025 |
0,03 |
|
|
|
|
|
|
Натрия |
|
1,908 |
2,385 |
2,862 |
гидрокарбоната (г) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Натрия |
сульфита |
0,16 |
0,200 |
0,24 |
безводного (г) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Воды для инъекций |
До 100 мл |
До 100 мл |
До 100 мл |
|
|
|
|
|
|
36
Раствор А1 (модельная смесь 1) Точные навески кислоты аскорбиновой (4,0
г), трилона Б (0,02г), натрия гидрокарбоната (1,908г) и натрия сульфита
(0,16 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.
Раствор А2 (модельная смесь 2) Точные навески кислоты аскорбиновой (5,0
г), трилона Б (0,025 г), натрия гидрокарбоната (2,385 г) и натрия сульфита
(0,200 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.
Раствор А3 (модельная смесь 3) Точные навески кислоты аскорбиновой (6,0
г), трилона Б (0,03 г), натрия гидрокарбоната (2,862г) и натрия сульфита
(0,24 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.
Проводили 3 параллельных титрования на трех уровнях концентраций
(9 определений).
К 1,0 мл каждой из модельных смесей (А1, А2, А3) прибавляют 5 мл воды и титруют 0,05 М раствором йода до слабо-желтого окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.
1 мл 0,05 М раствора йода соответствует 0,008824 г кислоты аскорбиновой. 1 мл 0,0167 М раствора калия йодата соответствует 0,008824 г кислоты
аскорбиновой.
Расчет содержания кислоты аскорбиновой (г/мл) проводят по формуле:
где: V– объем титранта, мл;
К– поправочный коэффициент;
Т– титр йода по определяемому веществу, г/мл;
а – навеска модельной смеси, взятая на анализ, мл.
Р- 1 мл
37
Результаты занесли в таблицу №8 и рассчитали открываемость,
стандартное отклонение, относительное стандартное отклонение и
коэффициент Стьюдента.
Таблица 8 – Результаты определения правильности методом
йодиметрии
№ |
Урове |
Взято |
Взято |
Объем |
Найдено |
Откры |
Метрологические |
п/п |
нь |
модельно |
лекарственного |
титранта, |
лекарств |
ваемос |
характеристики |
|
|
й смеси, |
вещества, г |
мл |
енного |
ть |
|
|
|
(г или мл) |
|
|
веществ |
|
|
|
|
|
|
|
а, г |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
1 |
1,0 мл |
0,04 |
4,86 |
0,0395 |
98,75 |
̅=100,24 |
2 |
1 |
1,0 мл |
0,04 |
4,50 |
0,0398 |
99,7 |
SD=1,94 |
|
|
|
|
|
|
|
RSD=1,20 |
3 |
1 |
1,0 мл |
0,04 |
4,53 |
0,0408 |
100,25 |
|
|
|
|
|
|
|
|
t=0.6 |
4 |
2 |
1,0 мл |
0,05 |
5,70 |
0,0503 |
100,6 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
5 |
2 |
1,0 мл |
0,05 |
5,65 |
0,0500 |
102,1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
6 |
2 |
1,0 мл |
0,05 |
5,65 |
0,0500 |
103,9 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
7 |
3 |
1,0 мл |
0,06 |
6,80 |
0,0602 |
100,33 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
8 |
3 |
1,0 мл |
0,06 |
6,70 |
0,0592 |
97,07 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
9 |
3 |
1,0 мл |
0,06 |
6,75 |
0,0597 |
99,5 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Т.о. R должно находиться в пределах от 98 до 102, следовательно, данная методика соответствует валидационной характеристике «правильность».
Поскольку t =0,6 << (95%, f) =2,31, что позволяет считать результаты выборки результатов свободными от систематической ошибки.
38
3.3. Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой
в растворе йодиметрическим методом по показателю «Прецизионность».
Приготовили модельный раствор кислоты аскорбиновой №2.
Определение №1.
Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 0,5 мл ЛП.
Определение №2.
Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 1,0 мл ЛП.
Определение №3.
Провели 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 1,5 мл ЛП. Рассчитали содержание кислоты аскорбиновой (г/мл), стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD).
Таблица 5. Результаты определения прецизионности кислоты
аскорбиновой методом йодиметрии.
Навеска |
Объем |
Найдено, |
( X i X ) |
|
( X i |
|
2 |
Метрологические |
X ) |
||||||||
для |
титранта, |
г/мл |
|
|
|
|
|
характеристики |
анализа,г |
мл |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
0,025 |
3,1 |
0,0499 |
0,0001 |
|
0,0000001 |
̅=0.0496 |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0,025 |
3,2 |
0,0501 |
0 |
|
0 |
|
|
SD=0.0007 |
|
|
|
|
|
|
RSD=1,41 |
||
0,025 |
3,0 |
0,0493 |
0,002 |
|
0,00004 |
|||
|
|
|
|
|
|
|
||
0,05 |
6,0 |
0,0486 |
0,0024 |
|
0,000057 |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0,05 |
6,3 |
0,0491 |
0 |
|
0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
0,05 |
6,0 |
0,0508 |
0,003 |
|
0,00009 |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
||
0,075 |
9,1 |
0,0496 |
0,002 |
|
0,00004 |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
||
0,075 |
9.3 |
0,0501 |
0,0006 |
|
0,0000003 |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
||
0,075 |
9.7 |
0,0491 |
0,0001 |
|
0,0000001 |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Врезультате проведенных исследований установлено, что RSD
соответствует по показателю прецизионность.
39
Общие выводы.
1.Проведена валидационная оценка методик качественного и количественного анализа кислоты аскорбиновой 5% в растворе для инъекций.
2.Реакции идентификации соответствуют по показателю специфичность.
3.Полученные результаты показали что методика йодатометрического метода: соответствует по показателям специфичность, линейность,
прецизионность, правильность.
4.Полученные результаты показали что методика йодиметрического метода: соответствует по показателям специфичность, линейность,
прецизионность, правильность.
40