ВКР Аскорбиновая кислота (Коновалов)

женщинам рекомендуется употреблять на 10 мг больше, кормящим — на 30

мг). Физиологическая потребность для детей — от 30 до 90 мг/ сутки в зависимости от возраста. Верхний допустимый уровень потребления в России — 2000 мг/сутки. Для курящих людей и тех, кто страдает от пассивного курения, необходимо увеличить суточную норму потребления витамина C на 35 мг/сутки.

6.10. Фармакодинамика

Витаминное средство, оказывает метаболическое действие, не образуется в организме человека, а поступает только с пищей. Участвует в регулировании окислительно-восстановительных процессов, углеводного обмена, свёртываемости крови, регенерации тканей; повышает устойчивость организма к инфекциям, уменьшает сосудистую проницаемость, снижает потребность в витаминах B1, B2, а, Е, фолиевой кислоте, пантотеновой кислоте.

Участвует в метаболизме фенилаланина, тирозина, фолиевой кислоты,

норэпинефрина, гистамина, железа, усвоении углеводов, синтезе липидов,

белков, карнитина, иммунных реакциях, гидроксилировании серотонина,

усиливает абсорбцию негемового железа.

Обладает антиагрегантными и выраженными антиоксидантными свойствами.

Регулирует транспорт H+ во многих биохимических реакциях,

улучшает использование глюкозы в цикле трикарбоновых кислот, участвует в образовании тетрагидрофолиевой кислоты и регенерации тканей, синтезе стероидных гормонов, коллагена, проколлагена.

Поддерживает коллоидное состояние межклеточного вещества и нормальную проницаемость капилляров (угнетает гиалуронидазу).

Активирует протеолитические ферменты, участвует в обмене ароматических аминокислот, пигментов и холестерина, способствует накоплению в печени гликогена. За счёт активации дыхательных ферментов в печени усиливает её дезинтоксикационную и белковообразовательную функции, повышает синтез протромбина.

21

Улучшает желчеотделение, восстанавливает внешнесекреторную функцию поджелудочной железы и инкреторную — щитовидной.

Регулирует иммунологические реакции (активирует синтез антител,

С3-компонента комплемента, интерферона), способствует фагоцитозу,

повышает сопротивляемость организма инфекциям.

Тормозит высвобождение и ускоряет деградацию гистамина, угнетает образование Pg и других медиаторов воспаления, и аллергических реакций.

В низких дозах (150—250 мг/сут. внутрь) улучшает комплексообразующую функцию дефероксамина при хронической интоксикации препаратами Fe,

что ведёт к усилению экскреции последнего.

6.11. Фармакокинетика

Абсорбируется в ЖКТ (преимущественно в тонкой кишке). С

увеличением дозы до 200 мг всасывается до 140 мг (70 %); при дальнейшем повышении дозы всасывание уменьшается (50—20 %). Связь с белками плазмы — 25 %. Заболевания ЖКТ (язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки, запоры или диарея, глистная инвазия, лямблиоз), употребление свежих фруктовых и овощных соков, щелочного питья уменьшают всасывание аскорбата в кишечнике.

Концентрация аскорбиновой кислоты в плазме в норме составляет приблизительно 10—20 мкг/мл, запасы в организме — около 1,5 г при приёме ежедневных рекомендуемых доз и 2,5 г при приёме 200 мг/сут. TCmax после приема внутрь — 4 ч.

Легко проникает в лейкоциты, тромбоциты, а затем — во все ткани;

наибольшая концентрация достигается в железистых органах, лейкоцитах,

печени и хрусталике глаза; депонируется в задней доле гипофиза, коре надпочечников, глазном эпителии, межуточных клетках семенных желёз,

яичниках, печени, селезёнке, поджелудочной железе, лёгких, почках, стенке кишечника, сердце, мышцах, щитовидной железе; проникает через плаценту.Концентрация аскорбиновой кислоты в лейкоцитах и тромбоцитах выше, чем в эритроцитах и в плазме. При дефицитных состояниях

22

концентрация в лейкоцитах снижается позднее и более медленно и рассматривается как лучший критерий оценки дефицита, чем концентрация в плазме.

Метаболизируется преимущественно в печени в дезоксиаскорбиновую и далее в щавелевоуксусную и дикетогулоновую кислоты.Выводится почками, через кишечник, с потом, грудным молоком в виде неизменённогоаскорбата и метаболитов.

6.12. Лекарственные формы

Лиофилизат 50 мг для приготовления раствора для внутривенного и внутримышечного введения;

раствор 50 мг/мл, 100 мг/мл для внутривенного и внутримышечного введения;

раствор 150 мг/мл для внутривенного введения («Витамин С-

инъектопас»);

драже 50 мг;

порошок 1 г, 2,5 г для приготовления раствора для приёма внутрь;

таблетки 25 мг, 50 мг, 75 мг, 100 мг, 500 мг, 2,5 г;

таблетки жевательные 200 мг («Асвитол»), 500 мг («Витамин С 500»)

таблетки шипучие 250 мг, 1000 мг;

таблетки шипучие (в ассорт.) 500 мг («Асковит», «Целаскон Витамин С»), 1000 мг («Аддитива Витамин С», «Асковит»).

Выводы по обзору литературы

1.Изучение литературных данных свидетельствует о большом разнообразии методов анализа кислоты аскорбиновой.

2.Наиболее часто используемыми, для количественного определения кислоты аскорбиновой остаются различные титриметрические,

спектрофотометрические, фотометрические и хроматографические методы.

23

Глава 2. Методы анализа кислоты аскорбиновой в растворе для

инъекций и их валидация (экспериментальная часть).

Любая аналитическая методика должна быть утверждена в установленном порядке, что подтверждает ее метрологическая аттестация.

Для этой цели в фармацевтической практике используют метод валидации, то есть экспериментальное доказательство того, что методика пригодна для выполнения поставленных задач.

Валидации подлежат методики количественного определения, в том числе методики определения примесей. Методики проверки подлинности подвергаются валидации при необходимости подтвердить их специфичность.

При валидации проводится оценка аналитической методики по перечисленным ниже характеристикам, выбираемым с учетом рекомендаций табл. :

–специфичности (specificity);

–пределу обнаружения или чувствительности (detectionlimit);

–пределу количественного определения (quantitationlimit);

–аналитической области (range);

–линейности (linearity);

–правильности (trueness);

–прецизионности (precision);

–устойчивости (robustness).

1.Валидационная оценка методик качественного и количественного анализа кислоты аскорбиновой в растворе для инъекций по

показателю «Специфичность»

Под специфичностью методики следует понимать способность достоверно определять анализируемое соединение в присутствии других компонентов образца – лекарственных веществ, вспомогательных веществ и посторонних примесей (включая потенциально возможные).

Приготовили согласно прописи три модельных смеси (табл. 1)

24

Таблица 1. Приготовление модельных растворов кислоты аскорбиновой

1.1.Установление специфичности в тестах «Испытание на

подлинность»

Для установления специфичности в идентификационных тестах,

основанных на качественных реакциях, следует убедиться как в отсутствии положительного эффекта реакции на сопутствующие вещества, так и в возможности ингибирования данной реакции компонентами образца.

Провели установление специфичности следующих реакций:

К 1 мл каждой модельной смеси прибавляли 0,5 мл раствора серебра нитрата (для 5 % раствора);

Смодельными смесями 1 и 2 выпадал темно-серый осадок (кислота аскорбиновая), с модельной смесью 3 осадок не образовывался.

0,2 мл каждой модельной смеси разбавили 10 мл воды и прибавили по каплям раствор натрия 2, 6-дихлор-фенолиндофенолята;

Смодельными смесями 1 и 2 синяя окраска последнего исчезала (кислота аскорбиновая), с модельными смесями окраска сохранялась.

Вывод: Реакции идентификации соответствуют валидационной оценке по показателю «Специфичность»

25

2.2.Установление специфичности в тестах «Количественное

определение»

Методики, используемые для количественного определения также должны подвергаться валидационной оценке по данному критерию. При этом для всех типов методик существуют свои особенности.

Титриметрические методы. Главным является то, что растворители и сопутствующие компоненты не должны вступать в реакцию с титрантом,

кроме того необходимо убедиться в специфичности индикатора. При анализе конкретных объектов следует приготовить модельную смесь и провести её титрование. Поскольку, в ряде случаев, затрачивается часть титранта на взаимодействие с растворителем, проводится контрольный опыт. На основании полученных данных принимается решение о специфичности методики.

Провели установление специфичности иодатометрической методики: к 1 мл каждой модельной смеси прибавили 5 мл воды, 0,15 мл 1% раствора формальдегида, 2 мл 2% раствора кислоты хлороводородной, 0,5 мл 1%

раствора калия йодида, 2 мл крахмала и тировали 0,0167 моль/л раствором йодата калия до появления светло-синего окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.

При этом установлено, что на титрование модельной смеси 1 и 2

затрачены равные количества титранта, модельная смесь 3 в данных условиях не титруется.

Провели установление специфичности иодатометрической методики: к 1

К 1,0 мл каждой модельной смеси прибавляют 5 мл воды и титруют

0,05 М раствором йода до слабо-желтого окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.

При этом установлено, что на титрование модельной смеси 1 и 2

затрачены равные количества титранта, модельная смесь 3 в данных условиях не титруется.

26

3. Валидационная оценка методики анализа кислоты

аскорбиновой йодатометрическим методом

МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

К 1 мл препарата прибавляют 5 мл воды, 0,15 мл 1% раствора формальдегида, 2 мл 2% раствора кислоты хлороводородной, 0,5 мл 1%

раствора калия йодида, 2 мл крахмала и тируют 0,0167 моль/л раствором йодата калия до появления светло-синего окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.

1 мл 0,0167 М раствора калия йодата соответствует 0,008824 г кислоты аскорбиновой.

Расчет теоретического объема титранта проводят по формуле:

(1);

Где V – теоретический объем титранта а – навеска

K – поправочный коэффициент титранта

в – содержание кислоты аскорбиновой в лекарственной форме

P – 1 мл раствора

Расчет содержания кислоты аскорбиновой в 1 мл раствора проводили по формуле:

(2);

Где V – практический объем титранта а – навеска

K – поправочный коэффициент титранта

b – содержание кислоты аскорбиновой в лекарственной форме

P – 1 мл лекарственной формы

27

аскорбиновой в растворе йодатометрическим методом по

показателю «Линейность».

Линейность методики – это наличие прямой пропорциональной зависимости аналитического сигнала от концентрации или количества определяемого вещества в анализируемой пробе.

Линейность выражается уравнением у = ax + b. Это уравнение называют линейной регрессией. Параметр b градуировочной функции характеризует отрезок, отсекаемый на оси ординат и соответствующий значению холостого опыта, а коэффициент a характеризует наклон градуировочной кривой и является отражением чувствительности методики.

Расчет коэффициентов градуировочного графика проводили по формулам и данным таблицы 1:

Построение градуировочного графика

Точную навеску кислоты аскорбиновой (5 г) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в воде, доводил водой до метки и перемешивали (раствор А).

На титрование отмерили последовательно 0,50 мл; 1,0 мл; 1,5 мл; 2,0

мл; 2,5 мл раствора А (0,075 г; 0,010 г; 0,125 г; 0,150 г; 0,175 г.) и проводили определение по методике описанной для количественного определения кислоты аскорбиновой. Данные занесли в таблицу 2.

28

Таблица 2. Результаты титриметрического определения кислоты

аскорбиновой йодатометрическим методом

Основной характеристикой линейности является коэффициент корреляции — мера взаимосвязи измеренных явлений. Коэффициент корреляции (обозначается «r») рассчитывается по специальной формуле:

29

При математической обработке рассчитали величину коэффициента корреляции r. Коэффициент корреляции составил: r= 0,992039.

Полученные результаты показали, что существует линейная

зависимость между навеской кислоты аскорбиновой и объемом титранта –

0,05 М раствором йода.

Как известно, для аналитических целей можно использовать только ту

методику, для которой зависимость функции от аргумента коррелируется с

коэффициентом r, который должен быть ≥0,99.

2.2. Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой

в растворе йодатометрическим методом по показателю «Правильность».

Правильностью аналитической методики называется степень близости экспериментальных результатов к истинному значению во всей области измерений. Главным фактором, определяющим правильность, является значение систематической погрешности.

Согласно рекомендациям ICH необходимо проанализировать не менее 9

образцов на 3 уровнях концентраций. Правильность методики устанавливается в указанном диапазоне ее применения. Для оценки полученных результатов наиболее простым и наглядным критерием служит

открываемость (R), которая вычисляется по формуле:

При проведении анализа будут получены 9 значений открываемости.

Для более детальной оценки следует статистически обработать полученные значения R, рассчитав стандартное (SD), относительное стандартное отклонение (RSD) и коэффициент Стьюдента по формуле:

где - истинное значение определяемой величины; x - среднее значение определяемой величины;

30