3.2.1. Определение группы крови системы аво
с помощью цоликлонов
Цоликлон – реагент, действующим началом которого являются моноклональные человеческие антитела. Моноклональные человеческие антитела продуцируются гетерогибридомой, полученной в результате слияния человеческой лимфобластоидной линии с миеломной клеточной линией мыши. Цоликлоны изготовляются из асцитической жидкости таких мышей.
Для определения групп крови системы АВО используются цоликлоны анти-А, анти-В и цоликлон анти-АВ, содержащий смесь анти-А и анти-В антител.
Анти-А и анти-В антитела цоликлона при смешивании с нативной кровью вызывают прямую агглютинацию эритроцитов, содержащих соответствующие А и В антигены. Заключение о присутствии антигена в исследуемых эритроцитах делают по наличию положительной реакции агглютинации.
Для работы необходимы: донорская кровь, цоликлоны (анти-А, анти-В, анти-АВ), предметные стекла (чашка Петри), пипетки, стеклянные палочки.
Проведение работы. Принцип определения групп крови человека системы АВО с помощью цоликлонов такой же, как и со стандартными гемагглютинирующими сыворотками.
Наносят на чашку Петри индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.
Рядом с каплями антител помещают по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл).
Смешивают кровь с реагентом.
Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании чашки Петри в течение 3 минут.
Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов.
Отсутствие агглютинации во всех трех каплях говорит об отсутствии агглютиногенов А и В в эритроцитах исследуемой крови, такая кровь принадлежит O(I) группе.
Если агглютинация произошла с цоликлонами анти-А и анти- АВ (I, II капли реагента), то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит А(II) группе.
Если агглютинация произошла с цоликлонами анти-В и анти-АВ, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и эта кровь принадлежит В(III) группе.
Наличие агглютинации с цоликлонами анти-А, анти-В и анти-АВ свидетельствует о присутствии в эритроцитах исследуемой крови агглютиногенов А и В, следовательно, она принадлежит АВ(IV) группе.
Оформление протокола. Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученные результаты, обозначив содержание анти-А, анти-В и анти-АВ антител в чашках Петри и отсутствие или наличие агглютинации, например:
Вывод. Назвать и правильно записать группу крови. Обосновать полученный результат. Указать в каких случаях исследуемая кровь может быть использована в качестве донорской. Нарисовать схему совместимости групп крови системы АВО, и схему оценки результатов определения группы крови по цоликлонам.
3.3. Определение группы крови системы резус
3.3.1. Определение группы крови человека системы резус
с применением стандартной сыворотки
Для работы необходимы: донорская кровь, универсальная сыворотка, содержащая анти-Д-антирезус-антитела, 2 пробирки, пипетки, физиологический раствор, микроскоп.
Проведение работы
В обе пробирки внести по одной капле исследуемых эритроцитов (донорской крови). Затем добавить по 2 капли универсального реагента (сыворотки, содержащей антирезус-Д-агглютинины).
Содержимое пробирок перемешать, положив их сначала на один бок (в течение 1,5 мин), затем – на другой на 1,5 мин. Такие манипуляции усиливают растекание смеси по стенкам пробирок и ускоряют агглютинацию. Как правило, агглютинация наступает в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса «антиген-антитело», а также ввиду возможности замедленной реакции при слабовыраженной агглютинабельности эритроцитов, наблюдение проводят 3 мин. Через 3 мин, оценивают результаты.
Перед чтением результатов, для исключения неспецифической агрегации эритроцитов, добавляют 5-8 мл физиологического раствора хлористого натрия. Смесь перемешивают, не взбалтывая, путем одно-двухкратного перевертывания пробирок.
Оценку результатов проводят визуально. Появление хлопьев из эритроцитов (агглютинатов) на фоне прозрачной жидкости указывает на наличие резус-фактора в исследуемой крови (положительная реакция). При отрицательной реакции в пробирке видна равномерно окрашенная в розовый цвет, слегка опалесцирующая жидкость.
Оформление протокола. Записать принцип метода, ход работы. Зарисовать результаты реакции при микроскопическом исследовании, например,
Вывод. Назвать и правильно записать группу крови, например, кровь резус положительная (Rh+) или резус отрицательная (Rh-). Обосновать это заключение. Дать определение резус-иммунизации. Зарисовать схему резус-иммунизации крови.