Лекции Швиденко / Лекция №3 вирусы

Лекция №3 (Вирусология)

Было выяснено, что не все вирусы человека размножаются в организме экспериментальных животных. У животных есть иммунная система и они будут противостоять. Не малое значение имеет экономический вопрос. Очень удобной экспериментальной моделью является обезьяна или человекообразная обезьяна. Это очень дорогое удовольствие.

В начале 30-х г. ХХ века был внедрен метод культивирования – развивающиеся куриные эмбрионы. Куриный эмбрион покрыт хориоаллантоистной оболочкой. Наружная поверхность из эктодермального происхождения. Внутренний листок из энтодермального происхождения. Желточный мешок построен из мезодермального происхождения.

Куриный эмбрион не обладает иммунной системой – препятствий нет. Экономически – достаточно доступный метод. Но не все вирусы развиваются на курином эмбрионе.

В конце 30-х г. ХХ века в практику был внедрен метод – культивирования – в культуре ткани. Культура ткани – это клетки ткани, которые поддерживаются, размножаются вне организма. Техника начала развиваться с развитием трансплантологии. Клетки культуры ткани – поддерживаются в питательных специальных средах. Это сложные среды, богатые белком, витаминами, аминокислотами, индикатором.

Слабощелочная реакция. Содержат антибиотики для подавления бактериального роста.

1. Перевиваемые ткани культуры.

Клетки опухоли (Культура Хеля, терр. – детроид 6).

Опухолевые клетки – обладают высокой метаболической активностью. В короткий срок – многочисленное потомство. Они стандартные.

2. Первично – трепсинизированныет тканевые культуры.

Каждый раз готовится заново. Для его приготовления используется эмбриональные ткани. Ткань кожи, соединительная ткань, печень, фибробласты. Высокая метаболическая активность.

Перед употреблением обрабатывают трипсином, разрушается межклеточное связи, и выходят как клетки кул. ткани. Имеется недостаток. Связан с их не стандартностью. В каждой лаборатории они разные.

Как судить размножились или нет?

В жидкой среде – помутнение. На плотной образуются колонии.

1. Заболевание, гибель животного. Исследование органов патологоанатомическими методами.

Если размножились вирусы – видно иммунный ответ (антитела, сенсабилизированные лимфоциты).

2. Гибель эмбриона от вируса. На оболочки появляются очаги помутнения – бляшки, скопления вириона, можно зафиксировать увеличение вириона. Ввели одно количество, а после инкубации возрастает на 3-4 порядка.

При использование культуры ткани – проявляется цитопатический эффект – изменение клеток культуры ткани (другая морфология). При размножение вирусов в культуре ткани – могут появляться включения, они не характерны для нормальной клетки (появляется только при размножение вирусов). Расположение цитоплазмы ядерное, смешанное. Выявляются при окраске методом Романновского-Гимзы., они эузиновильные – розовые, базофильные – голубые. По характеру включений можно говорить о видовой принадлежности. Если размножающиеся вирусы обладают гемоагглютинирующим действием, то вирусные белки выходят на поверхности клеток. Потом клетки культуры ткани могут взаимодействовать с Er. Er на них адсорбируют. Процесс гемоадсорбция. Самая простой – цветная проба. Суть: клетки культуры ткани размножаются в питательной среде, она содержит индикатор при размножение образуются кислые продукты метаболизма. Слабощелочная среда подкисляется, и индикатор изменяет свой цвет.

При заражение вирусом с клеточным метаболизмом происходит подавление. Тогда цвет индикатора не изменяется. Недостаток: отсутствие клеточного метаболизма может быть связано с отсутствием вируса.

В питательной среде при культивирования в ней вирусов – количество вирусов будет возрастать.

Методы лабораторной диагностики вирусной инфекции:

Вирусология родилась в недрах бактериологии и методы лабораторной диагностики она взяла у бактериологии:

• Вирусологическое исследование: выделение чистой культуры и ее идентификация

• Серологическая идентификация (реакцию агглютинации использовать нельзя, т.к. размеры маленькие). Реакция вирус – нейтрализация, в которой под действием ат вируса утрачивается биологическая активность.

• Вирусоскопическое исследование: обнаружение вируса в исс. материале. Другая цель: обнаружение в исс. материале включений в клетках пораженных вирусом. Для диагностики оспы.

• Молекулярно – генетический метод (ПЦР): обнаружение нуклеиновой кислоты вирусов или их последовательности.

• Иммуноиндикация: обнаружение аг.

• Серологический метод: обнаружения ат.

• Реакция гема – агглютинирующая и реакция торможения гемоагглютинаций. Вмести, они позволяют не только производить диагностику, но с определение видовой принадлежности (в бактериологии не используется).

Особенности противовирусного иммунитета:

За счет иммунной системы, иммунитет обладает своеобразными особенностями:

• внеклеточный

• внутриклеточный

• клеточный

• гуморальный

При бактериальной инфекции: 1. Ареактивность тканей (многие вир. жив не патогенные для челов)

2.Активность естественных киллиров

Гуморальный: 1. антитела препятствуют их адсорбции на клетках

2. пропердиновая система

3. белки, обладающие ингибирующим действием на вирус.

Фагоцитарный механизм.

Фагоцитоз своеобразный. Внеклеточные вирионы захватываются клетками и фагоцитируют. Подвергается действию лизосомальных ферментов. Будут переваривать белки вируса, а нуклеиновая кислота высвобождаться. Наблюдается лейкопения, асептическое серозное воспаление. Фагоцитоз за счет макрофагов, они захватываются клетками пораженные вирусом.

Интерференция вируса, когда один вирус подавляет репродукцию другого. Его интерферон – индуцибельный белок.

Антитела появляются на 5-7 день введения антигена. Интерферон появляется через 12 часов. Интерферон подавляет размножение любых вирусов. Интерферон – гликопротеиды, устойчивые в широком диапазоне рН.

Важная функция – иммунорегуляторная, стимулирующая функцию Т-киллеров, …

Повышается антитоксическая функция печени. Все вместе взятое позволило использовать интерферон в лечебной практике.

Экзогенный интерферон не устойчив при хранение, транспортировки и при введение в организм быстро разрушаются.

Химиотерапия вирусных инфекций:

Современные антибиотики не обладают противовирусной активностью, за исключением противоопухолевых антибиотиков с ДНК тропным механизмом действия.

1 группа. Подавляет адсорбцию на клетках (взаимодействие с вирусной инфекцией: ремантадина, активный против группы вирусов А и Б)

2 группа. Производные метизазона, этот препарат используется при лечение ветряной и натуральной оспы.

3 группа. Производные гуанидина – нарушающий синтез ДНК (подавляет синтез вирусной ДНК – зовиракс, ацикловир).

Основное значение – структурные аналоги пуриновые и пиримидиновые основания. Встречаются в нуклеиновой кислоте вируса.

Специфическая профилактика:

Используется вакцина – живые, убитые, химические, генно-инженерные.

Классификация вирусов: Подцарство

Семейство

Рода

Виды

Серологические варианты

Принципы:

1. тип нуклеиновой кислоты (РНК и ДНК)

2. наличие суперкапсидной оболочки

3. тип симметрии нуклеокапсида

4. размеры вириона

5. антигенное строение

6. особенности репликации.