Тема 6. Серологическая диагностика кишечных инфекций

Серологическая метод диагностики (обнаружение инфекционных антител в сыворотке обследуемого) широко применяется при лабораторном подтверждении диагноза у больных кишечными ин­фекциями. С этой целью чаще всего используется реакция агглютинации с бактериальными (РА) или эритроцитарными (РПГА) диагностикумами.

Инфекционные антитела в сыворотках больных кишечными инфекциями появляются со 2-ч дня болезни. По мере развития заболевания количество их нарастает и может достигать титров 1/800-1/1600 и выше. В зависимости от характера используе­мого диагностикума (бактериальный или эритроцитарный) и его природы (дизентерийный, холерный, сальмонеллезный О-,Н или Ви) исследуемая сыворотка разводятся от 1/20-1/40 до 1/800 -1/1600.

Характерным признаком инфекционных антител/позволяющим отличить их от анамнестических и поствакцинальных, является увеличение их количества по мере развития заболевания.. Чтобы проследить за динамикой изменения количества антител в ходе развития заболевания исследуют парные сыворотки, т.е. сыворотки, полученные от больного в разные сроки болезни.

Реакция Видаля

Реакция Видаля используется как метод серологической диагностики брюшного тифа и паратифов. Компоненты реакции: 1. Сыворотка обследуемого 2. Физиологический раствор

3. Диагностикумы: брюшнотифозный - О брюшнотифозный - ОН паратифозный А - ОН паратифозный В - ОН

Задание 1. Поставить реакцию Видаля с сыворотками

больного, взятыми на 8-й и 16-й день болезни.

Выполнение задания

Сыворотку разводят физиологическим раствором в отношениях 1/50-1/I600 (объем 1 мл). Готовят 4 таких ряда, В пробирки каждого ряда вносят по 2-3 капли одного из диагностикумов (брюшнотифозный О, брюшнотифозный ОН, паратифозный А и В), встряхивают и помешают в термостат на 18-20 часов. Опыт сопровождается контролем диагаостикума. На следующий день учитывают результаты реакции и оформляют в виде протокола.

РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ С САЛЬМОНЕЛЛЕЗНЫМИ ДИАГНОСТИКУМАМИ

Используется как метод серологической диагностики сальмонеллезов. Наиболее частым возбудителем сальмонеллезной инфекции (до 80%) является сальмонелла мышиного тифа (тифимуриум) Компонента реакции: I; Сыворотка обследуемого

2, Физиологический раствор

3. Сальмонеллезный диагностикум тифимуриум

Задание 2. Поставить реакцию агглютинации с сывороткой больного с подозрением на сальмонеллезную инфекцию.

Выполнение задания

Сыворотку крови разводят физиологическим раствором в отношениях 1/50-1/800 (объем 1 мл). В каждую пробирку вносят по две-три капли диагностинума (тифимуриум). Встряхивают, помещают в термостат на 18-20 часов. Опыт сопровождается контролем диагностикума. На следующий день учитывают резуль­тат реакции и оформляют в виде протокола.

ДИЗЕНТЕРИЙНЫЙ ВИДАЛЯ

Используется как метод серологической диагностики дизентерии. Чаще всего дизентерию вызывают шигеллы Флекснера и Зонне. Компоненты реакции: I. Сыворотка обследуемого

2. Физиологический раствор

2. Дизентерийные диагностикумы Флекснера и Зонне.

Задание 3. Поставить реакцию агглютинации о сывороткой больного с подозрением на дизентерию

ВЫПОЛНЕНИЕ ЗАДАНИЯ

Сыворотку больного разводят физиологическим раствором в отношении 1/50 - 1/800 (объем I мл). Готовят 2 таких ряда. Во все пробирки каждого ряда вносят по 2-3 капли одного из дизентерийных диагностикумов (Зонне, Флекснера), встряхивают я помещают в термостат. Контроль тот же что и в реакции Видаля. Результат учитывают на следующие сутки и оформляют в виде протокола.

.

Создание эритроцитарных диагностикумов (Брюшнотифозных, дизентерийных, холерных, сальмонеллезных) позволило широко использовать для серологической диагностики кишечных инфек­ций реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА). Эта реакция отличается высокой чувствительностью, четкостью и демонстративностью результатов, простотой выполнения. Для ее постановки необходимы: сыворотка обследуемого, физиологический раствор и соответствующий поставленной задаче эритроцитарный диагностикум.

Задание 4. Поставить РПГА с целью серологической диаг­ностики тифозного бактерионосительства

Выполнение задания

Сыворотку крови бодьного разводят физиологическим раст­вором 1/20-1/640 (объем 0,5 мл). В каждое разведение вносят по две капли эритроцитарного брюшнотифозного Ви-диагностикума, Встряхивают и помещает в термостат на 2-4 часа или оставляют на.сутки при комнатной температуре. Учитывают результат и оформляют протокол.

Задание 5. Поставить РПГА с целью серологической диагностики дизентерии.

Выполнение задания

Сыворотку крови больного разводят физиологическим раствором 1/20-1/320 (объем 0,5 мл). Готовят несколько таких

рядов. В разведении каждого ряда вносят по 2-3 капли эритроцитарного диагностикума (Зонне, Флекснера, Бойда). Встряхи­вают и помещают на 2-4 часа в термостат или оставляют на сутки при комнатной температуре. Учитывают результаты и оформляют их в виде протокола.

Ситуационные задачи

1. Больной К. , 42 лет поступал в клинику инфекционных болезней с подозрением на тифо-паратифозное заболевание. Считает себя больным 10 дней. Бактериологическое исследование крови дало отрицательный результат. Какие еще методы лаборатор­ной диагностики можно применись для обследования данного больного?

2. У больной А., 18 лет, поступившей в клинику инфекционных болезней о подозрением на тифо-паратифозное заболевание зарегистрируем следующие результаты Видаля:

Диагностикумы	День болезни
	6	11
Брюшнотифозный О	1/150	1/100
Брюшнотифозный ОН	1/100	1/400
Паратифозный А	1/50	1/50
Паратифозный В	1/50	1/50

Ваше мнение относительно диагноза у данной больной? Обоснуйте его.

3. Больной Р. , 47 лет поступил в клинику инфекционных болезней с жалобами на сильные головные боли, высокую температуру, общее недомогание. Больным себя считает 6 дней. Результаты реакции Видаля следующие:

Диагностикумы	Разведения сыворотки
Брюшнотифозный О	1/100
Брюшнотифозный ОН	1/200
Паратифозный А	1/50
Паратифозный В	1/50

Ваше мнение относительно диагноза заболевания у данного больного? Обоснуйте его.

4. Больной Д_. , 22 лет обратился к врачу поликлиники с жалобами на общее недомогание, высокую температуру, головные боли. Был поставлен диагноз ОРЗ (острое респираторное заболева­ние) и выдан больничный лист. Черёз 10 дней несмотря на проводимое лечение состояние больного не улучшилось, врач направил сыворотку больного на серологическое исследование для исключения тифо-паратифозного заболевания. Результаты реакции Видаля следующие:

Диагностикумы	Разведения сыворотки
Брюшнотифозный О	1/50
Брюшнотифозный ОН	1/50
Паратифозный А	1/50
Паратифозный В	1/100

Ваше мнение по результату реакции?

5. В детском саду № 196 зарегистрирована вспышка брюшного тифа среди детей. Бактериологическое обследование здоровых, а также персонала не выявило брюшнотифозных бактерионосителей. Какие еще методы лабораторного исследования следует применить для выявления носительства в данном коллективе?

6. Больная З., 16 лет поступила в клинику инфекционных болезней на 7 день с начала заболевания с жалобами на частый жидкий стул с примесью слизи и крови, общую слабость, повышенную температуру. До поступлений в клинику в течение 5 дней принимала левомицетин и фталазол. В клинике постав­лен диагноз - острая дизентерия. Какие методы лабораторной диагностики, помимо бактериологического, Вы порекомендуе­те применить для подтверждения диагноза у данной больной?

7. Три месяца назад в одном из районов города была зарегист­рирована вспышка пищевой токсикоинфекции, в ходе которой заболело 13 человек. При бактериологическом исследовании материала от больных выделить возбудителя не удалось. При бактериологическом исследовании в этот же период времени различных образцов мяса из столовой (все заболевшие связы­вают свое заболевание с употреблением пищи в этой столовой) выделена культура сальмонелл мышиного тифа. Можно ли доказать этиологическую роль этого возбудителя при указанной вспышке?

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ ПО БИОХИМИЧЕСКИМ ТЕСТАМ

Ситематичес-кие группы

Escherichia

Salmonella

Klebsiella

Proteus

Pseudomanas aeruginosa

Escherichiae

Shigella

Salmonella

Citrobacter

Klebsiella

Serratiae

Vulgaris

Mirabilis

Тест или субстрат

Индол

+

+-

-

-

+-

-

+

-

-

Метилрот

+

+

+

+

-

+-

+

+

-

Фогес-проскауэр

-

-

-

-

+

+-

-

-

-

Цитрат Симонса

-

-

+-

+

+

+

+-

+

+

H2S

-

-

+

+-

-

-

+

+

-

Уреаза

-

-

-

+-

+

+-

+

+

+-

Подвижность

+-

-

+

+

-

+

+

+

+

Желатин

-

-

-

-

-

+

+

+

+

Газ на глюкозе

+

-

+

+

+

+-

+-

+

-

Лактоза

+

-

-

+-

+

-

-

-

-

Маннит

+

+-

+

+

+

+

-

-

-

Сахароза

+-

-

-

+-

+

+

+

+-

-

Фенилаланиндезаминаза

-

-

-

-

-

-

+

+

-

Лизиндекарбоксилаза

+-

-

+

-

+

+

-

-

-

Оксидаза

-

-

-

-

-

-

-

-

+

Ксилоза

+-

-

+

+-

+

+-

+-

+

+(89%)

Пигмент

-

-

-

-

+-

+-

-

-

+(89%)

Условные обозначения: + наличие признака

- отсутствие признака

+ - непостоянно