Микроб билеты / Билет 10

Билет 10

1. споры и методы их изучения:

- Споры бактерий можно рассматривать как форму существования бактериальной клетки в неблагоприятных условиях для сохранения наследственной информации. Спора бактерии представляет собой уплотненный участок цитоплазмы, включающей нуклеоид окруженный несколькими плотными слоями. Спора не способна размножаться, но может сохраняться годами и при попадании в благоприятные условия может превратиться в вегетативную форму бактерии. Способностью к спорообразованию обладает сравнительно небольшое число как патогенных, так и непатогенных бактерий. В основном, это представители семейства Bacillaceae, родов Clostridium, Bacillus.

Изучают спороносные бактерии с помощью специальных методов приготовления мазков (с протравливанием кислотными красителями при нагревании) например по методу Ожешки.

з)жгутики и методы изучения подвижности бактерий:

- На поверхности ряда бактериальных клеток располагаются жгутики.

В их состав входит белок флагелин, который по своей структуре относится к сократимым белкам типа миозина, поэтому жгутики обеспечивают подвижность бактерий. Количество и расположение жгутиков у разных бактерий неодинаково. Монотрихи имеют на одном из полюсов клетки только один жгутик, лофотрихи - пучок жгутиков, у амфитрихов жгутики расположены на обоих полюсах клетки, а у перетрихов - по всей поверхности.

Изучать подвижность бактерий можно с помощью микроскопических методов (фазовоконтрастная микроскопия препаратов "висячая" или "раздавленная" капля или иммерсионная микроскопия специально окрашенных протравленных препаратов, позволяющих выявить сами жгутики), а также с помощью специальных методов посева (посев по методу Шукевича в каплю конденсата на мясо-пептонный агар или посев уколом в среду Пешкова).

2.Антигенами называются вещества или тела, несущие на себе отпечаток чужеродной генетической информации, те самые вещества, то «чужое», против которого «работает» иммунная система. Любые клетки (ткани, органы) не собственного организма (не свои) являются для иммунной системы комплексом антигенов, даже некоторые собственные ткани (хрусталик глаза) — так называемые забарьерные ткани: в норме они не контактируют с внутренней средой организма. Антигены обладают 2 свойствами: • антигенностью, или антигенным действием, — они способны индуцировать развитие иммунного ответа; • специфичностью, или антигенной функцией, — взаимодействовать с продуктами иммунного ответа, индуцированного аналогичным антигеном. Химическая природа антигенов различна. Это могут быть белки: • полипептиды; • нуклеопротеиды; • липопротеиды; • гликопротеиды; • полисахариды; • липиды высокой плотности; • нуклеиновые кислоты. 2. Антигены делят на следующие: • сильные, которые вызывают выраженный иммунный ответ; • слабые, при введении которых интенсивность иммунного ответа невелика. Сильные антигены, как правило, имеют белковую структуру. Некоторые (обычно небелковые) антигены не способны индуцировать развитие иммунного ответа (не обладают антигенностью), но могут вступать во взаимодействие с продуктами иммунного ответа. Их называют неполноценными антигенами, или гаптенами. Многие простые вещества и лекарственные средства являются гаптенами, при попадании в организм они могут конъюгировать с белками организма хозяина или другими носителями и приобретать свойства полноценных антигенов. Для того чтобы какое-либо вещество проявляло свойства антигена, кроме главного — чужеродное™, оно должно обладать еше иелым рядом признаков: • макромолекулярностью (молекулярная масса более 10 тыс. дальтон); • сложностью строения; • жесткостью структуры; • растворимостью; • способностью переходить в коллоидное состояние. Молекула любого антигена состоит из 2 функиионально различных частей: • 1-я часть — детерминантная группа, на долю которой приходится 2—3% поверхности молекулы антигена. Она определяет чужеродность антигена, делая его именно этим антигеном, отличающимся от других; • 2-я часть молекулы антигена называется проводниковой, при ее отделении от детерминантной группы она не проявляет антигенного действия, но сохраняет способность реагировать с гомологичными антителами, т. е. превращается в гаптен. проводниковой частью связаны все остальные признаки ангенности, кроме чужеродноти. Любой микроорганизм (бактерии, грибы, вирусы) представляет собой комплекс антигенов. По специфичности микробные антигены делятся: • на перекрестно-реагирующие (гетероантигены) — это антигены, общие с антигенами тканей и органов человека. Они имеются у многих микроорганизмов и рассматриваются как важный фактор вирулентности и пусковой механизм развития аутоиммунных процессов; • группоспецифические — общие у микроорганизмов одного рода или семейства; • видоспецифические — общие у разных штаммов одного вида микроорганизмов; • вариантспецифические (типоспецифические) — встречаются у отдельных штаммов внутри вида микроорганизмов. По наличию тех или иных вариантспецифических антигенов микроорганизмы внутри вида делят на варианты по антигенному строению — серовары. По локализации антигены бактерий делятся: • на целлюлярные (связанные с клеткой); • экстрацеллюлярные (не связанные с клеткой). Основные иеллюлярные антигены: • соматический — О-антиген (глюцидо-липоидо-полипепдидный комплекс); • жгутиковый — Н-антиген (белок); • поверхностные — капсульные — К-антиген, fi-антиген, Vi-антиген. Экстрацеллюлярные антигены — это продукты, секретируемые бактериями во внешнюю среду, в том числе антигены экзотоксинов, ферментов агрессии и защиты и др. 3. Антителами называются сывороточные белки, образующиеся в ответ на действие антигена. Они относятся к сывороточным глобулинам, поэтому называются иммуноглобулинами (Ig). Через них реализуется гуморальный тип иммунного ответа. Антитела обладают 2 свойствами: • специфичностью, т. е. способностью вступать во взаимодействие с антигеном, аналогичным тому, который индуцировал (вызвал) их образование; • гетерогенностью по физико-химическому строению, специфичности, генетической детерминированности образования (по происхождению). Все иммуноглобулины являются иммунными, т. е. образуются в результате иммунизации, контакта с антигенами. Тем не менее по происхождению они делятся: • на нормальные (анамнестические) антитела, которые обнаруживаются в любом организме как результат бытовой иммунизации; • инфекционные антитела, которые накапливаются в организме в период инфекционной болезни; • постинфекционные антитела, которые обнаруживаются в организме после перенесенного инфекционного заболевания; • поствакцинальные антитела, которые возникают после искусственной иммунизации. Антитела (иммуноглобулины) всегда специфичны антигену, индуцировавшему их образование. Тем не менее противомик-робные иммуноглобулины по специфичности делятся на те же группы, что и соответствующие микробные антигены: • группоспецифические; • видоспецифические; • вариантспецифические; • перекрестнореагирующие. В настоящее время довольно часто методами биотехнологии и/или генной инженерии получают иммуноглобулины, продуцируемые одним клоном кЛеток. Они называются моноклональными антителами. Их продуценты — клетки-гибридомы, являющиеся потомками, полученными при скрещивании В-лимфоцита (плазматической клетки) с опухолевой клеткой. От плазматической клетки-гибридома наследуется способность к синтезу антител, а от опухолевой клетки — способность длительно культивироваться вне организма. Помимо специфичности одним из основных свойств иммуноглобулинов является их гетерогенность, т. е. неоднородность популяции иммуноглобулинов по генетической детерминированности их образования и по физико-химическому строению.

3. Холера - типичная кишечная инфекция, и многое в её эпидемиологиианалогично поражениям, вызываемым энтеропатогенными бактериями

Выделяют 2 типа эпидемий холеры - эпидемии-вспышки с едиными источником инфекции и путями распространения, характеризующиеся одномоментным появлением большого количества больных, и вялотекущие эпидемии с перманентной заболеваемостью небольшого контингента и трудно выявляемыми путями передачи возбудителя

Единственный природный резервуар - больные и бактерионосители; основной механизм передачи - фекально-оральный, реже - контактный. Факторы передачи - пищевые продукты, вода, объекты окружающей среды. Определённую роль играют мухи, способные переносить возбудитель с испражнений на пищевые продукты. Несмотря на то, что выделение возбудителя в окружающую среду происходит в течение короткого времени, большое количество скрытых форм поддерживает циркуляцию возбудителя.

Индивидуальная восприимчивость к холере чрезвычайно вариабельна. Достаточно вспомнить неудачные опыты с самозаражениями И.И. Мечникова, З.В. Ермольевой и Петтенкофера. Наиболее предрасположены к холере лица, проживающие в неблагоприятных условиях и не соблюдающие правил личной гигиены. При эпидемических вспышках большую часть больных составляют взрослые, чаще мужчины; при вялотекущих эпидемиях в эндемичных районах основную группу заболевших составляют дети.

В большинстве случаев подъём заболеваемости наблюдают в тёплый сезон, но в эндемичном регионе сезонные колебания имеют серьёзные различия. В Дакке (Бангладеш) холера появляется после муссонных дождей и исчезает в сухой период; в Калькутте (Индия), по другую сторону дельты Ганга и Брамапутры, болезнь распространяется в сухой периоди исчезает во время дождей.

Холерный вибрион плохо переносит неблагоприятные воздействия внешней среды - солнечное облучение, высушивание и конкуренцию со стороны другой микрофлоры. Циркуляция возбудителя в воде прямо связана с наличием больных и бактерионосителей; после их изоляции он спонтанно исчезает через несколько суток (в стоячих водоёмах может сохраняться до 2-3 нед.). В выгребных ямах может существовать до 3-4 мес. Он может длительно сохраняться в продуктах с щелочным рН и высокой влажностью, а также одежде и постельном белье, испачканных испражнениями больных. Вибрионы биотипа Эль-Тор более устойчивы во внешней среде, что позволяет легко выделять их изводы и испражнений; все описанные в литературе бактерионосители холеры были инфицированы этим биотипом. Все вибрионы высоко чувствительны к действию дезинфектантов, особенно с кислым рН.

ПАТОГЕНЕЗ ПОРАЖЕНИЙ. Попав в организм человека, большая часть вибрионов погибает под действием кислой среды желудка. Лишь их небольшая часть достигает тонкой кишки. Факторы патогенности, обеспечивающие колонизацию, - жгутики (обеспечивают подвижность), муциназа (разжижает слизь и облегчает достижение поверхности эпителия) инейраминидаза (обеспечивает взаимодействие с микроворсинками). В ответ на проникновение бактерий эпителиальные клетки выделяют щелочной секрет, насыщенный жёлчью, идеальная среда для размножения возбудителя. Клинические проявления холеры обусловливает способность к токсинообразованию; холерные вибрионы образуют эндо- и экзотоксины. Эндотоксин - термостабильный ЛПС, сходный по структуре и активности с эндотоксинами прочих грамотрицательных бактерий. Проявляет иммуногенные свойства, индуцируя синтез вибриоцидных AT. Не играет существенной роли в развитии характерных проявлений.). Экзотоксин (холероген) - термолабильный белок; разрушается фенолом и формалином, но резистентен к действию протеолитических ферментов. Молекула токсина включает 2 компонента: компонент Б (образован пятью кольцевидно соединёнными субъединицами) взаимодействует с моносиаловым ганглиозидным рецептором что обусловливает проникновение в клетку компонента А. Компонент А составляют А1 субъединица (активный центр) и субъединица А2 связывающая оба компонента. Субъединица А1 катализирует рибозилирование гуанилзависимого компонента аденилатциклазы, приводит к повышению внутриклеточного содержания цАМФ и выходу жидкости и электролитов из клеток либеркюновых желёз в просвет кишечника.Токсин не способен реализовать своё действие на любых других клетках. Бактерии серовара 0139 также продуцируют экзотоксин с аналогичными свойствами, но в меньших количествах; токсинообразование кодируют как хромосомные, так и плазмидные гены. Возможно, что определённую роль в поражениях, вызываемых биотипом Эль-Тор, играют гемолизины.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ. У большинства инфицированных лиц заболевание протекает бессимптомно либо возможна лёгкая диарея. По имеющимся данным, соотношение тяжёлых поражений к количеству стёртых проявлений для классической холеры составляет 1:5-10, для холеры Эль-Тор - 1:25-100.

Для клинически выраженных случаев инкубационный период варьирует от нескольких часов до 5 сут. (в среднем 2-3 дня); заболевание характеризуется общим недомоганием, болями в животе, рвотой и развитием выраженного диарейного синдрома. Для последнего характерно выделение значительного количества (до 10 л/сут) водянистых бесцветных испражнений («рисовый отвар»). Другая характерная черта - сладковатый «рыбный» (но не фекальный) запах у испражнений. В зависимости от степени интоксикации,симптоматика может иметь характер гастроэнтерита или энтерита.

В тяжёлых случаях у больных резко снижается объём мочи с развитием почечной недостаточности. Характерна охриплость голоса или афония. Ведущие патогенетические факторы - гиповолемия и выраженные нарушения электролитного баланса, вследствие чего развиваются артериальная гипотензия, сердечная недостаточность, нарушение сознания и гипотермия. Подобное состояние определяют как холерный алгид. Отмечают характерное проявление fades hippocrafica (запавшие глаза, заострённые черты лицас резко выступающими скулами). Продолжительность проявлений зависит от своевременного, адекватно проводимого лечения и варьирует от нескольких часов до нескольких дней. При отсутствии лечения летальность больных в алгидной стадии достигает 60%.в. Выздоровление сопровождается выработкой непродолжительной невосприимчивости, нередко отмечают случаи повторного заражения.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА. Основу составляют выделение и идентификация возбудителя. Цели исследований: выявление больных и бактерионосителей; установление окончательного диагноза при исследовании погибших; контроль за эффективностью лечения больных и санации носителей; контроль над объектами внешней среды и эффективностью дезинфекционных мероприятий. Материалы для исследований - испражнения, рвотные массы, жёлчь, секционный материал (фрагменты тонкой кишки и жёлчного пузыря), постельное и нательное бельё, вода, ил, сточные воды, гидробионты, смывы с объектов окружающей среды, пищевые продукты, мухи и др.

Наилучшие результаты даёт исследование проб, взятых до начала антибактериальной терапии. Испражнения лучше всего отбирать резиновыми катетерами. Можно использовать стеклянные трубочки с оплавленными краями (также вводят в анальное отверстие) или ректальные тампоны. При исследовании жёлчи отбирают порции В и С (доставляют нативный материал). Секционный материал помещают в стерильную тару раздельно. Все образцы помещают в герметически закрываемую транспортную тару. Материал следует доставлять в лабораторию не позже 2 ч после забора. При невозможности образцы помещают в транспортные среды.

Основным в лабораторной диагностике холеры является:

1) обнаружение в мазках из испражнений изогнутых тонких грамотрицательных палочек, располагающихся в виде «стайки рыб»;

2) активная подвижность вибрионов в раздавленной капле;

3) мгновенная их иммобилизация при добавлении 0–холерной сыворотки;

4) образование голубоватой пленки–паутинки на пептонной воде через 5–6 ч и характерных колоний–росинок на щелочном МПА (12 ч);

5) агглютинабельность вибрионов в противохолерных сыворотках и их лизабельность типовыми холерными фагами С и Эль–Тор.

Схема бактериологического исследования. Так как окончательные результаты должны быть выданы через 30–36 ч, то исследование проводится круглосуточно.

I этап. Из испражнений и рвотных масс готовят мазки, высушивают на воздухе, фиксируют смесью Никифорова и окрашивают водным фуксином или по Граму. Параллельно с этим изучается подвижность вибриона в раздавленной капле. Одновременно испражнения высевают на 1% щелочную пептонную воду, щелочной мясопептонный агар и TCBS. Все посевы помещают в термостат при температуре 37°С. Дают первое заключение о наличии в материале вибрионов.

II этап. Через 5–6 ч инкубации в термостате на пептонной воде вырастает едва видимая пленка, из которой делают мазки, препараты раздавленной капли. Пленку агглютинируют в капле О–холерной сыворотки и выдают второе заключение о природе выделенного вибриона. Пленки пересевают на вторую пептонную воду и щелочной МПА.

III этап. Спустя 12–16 ч от момента посева на среды испражнений больного представляется возможность повторно изучить морфологию, подвижность и агглютинабельность вибрионов пленки, выросшей на второй пептонной воде, а также провести те же исследования, отобрав с плотных сред подозрительные колонии.

Определив, что колонии состоят из вибрионов, агглютинирующихся в О–холерной сыворотке, разведенной 1:100, и в одной из типовых сывороток Инаба и Огава, разведенных 1:50, дают третье заключение о результатах исследования. Подозрительные колонии пересевают на скошенный агар для накопления культуры и определения ферментативных свойств.

IV этап. Установив, какие ферменты продуцирует культура вибриона на ряде Гисса, определяют ее чувствительность к холерным фагам и дают окончательное заключение.

4. Пикорнавирусы:полеовирус, вирусы Коксаки, ECHO, риновирусы, строение вириона, антигены, методы культивирования, роль в патологии человека. Методы диагностики вызываемых заболеваний ( назовите их, материал для исследования.Специфическая профи-

лактика полимиелита.

- Семейство пикорнавирусов-это РНК-содержащие вирусы. РНК однонитевая, одлинейная, у большинства этих вирусов РНК+нить(и-РНК). РНК покрыта капсидной оболочкой, суперкапсидной оболочки нет и они устойчивы к эфиру. Тип симметрии нуклеокапсида кубический, вирионы имеют вид многогранника. Размеры 20-30 нм ( у вируса полимиелита 8-12 нм). Хорошо размножаются в КТ, могут давать ЦПД (цитопатическое действие) или вирусные включения, не размножаются в КЭ. К этим вирусам чувствительны лабораторные животные.Не размножаются в КТ вирус гепатита А и вирус Коксаки А из этого семейства, вирус гепатита А не удается выделить и при заражение лабораторных животных (только, если инфицировать вирусом трансплант печеночных клеток человека, вживленный в печень обезьяны с подавленной иммунной системой). К семейству относятся род риновирусов (вызывают ОРВИ, поражение носоглотки) и род энтеровирусов (вирус Коксаки, вирус полимиелита-полиовирус, ECHO, вирус гепатита А). Энтеровирусы - это кишечные вирусы, то есть проникают фекально-оральным путем , первичная локализация в глотке, кишечнике, но могут проникать в кровь(вирусемия) и попадать в другие органы, давая экстракишечные формы инфекции. Вирус полимиелита может поражать мотонейроны передних рогов спинного мозга, вызывая вялые параличи. Но паралитические формы встречаются 1:100 среди непаралитических форм. Материалом для вирусологического исследования и ииммуноиндикации могут служить фекалии, кровь спинно-мозговая жидкость. Вирус полимиелита, Коксаки и ЕСНО отличаются между собой размерами вириона, количеством капсомеров, АГ-свойствами. У вируса полимиелита нет гемагглютина, у ЕСНО есть, а у Коксаки возможна только холодовая гемагглютинация. Клинические формы похожи для этих вирусов, но вирус Коксаки может давать и спастические параличи, вызывая энцефаломиелиты. Специфическим для него является поражение сердца с развитием некроза и аневризмы. У вирусов полимиелита, Коксаки и ЕСНО различают серовары по АГ. По клинической картине инфекции у лабораторных животных вирусы Коксаки делят на А (вялые параличи) и В (спастические параличи). Коксаки А не размножаются в КТ, при вирусологическом исследовании необходимо заражение лабораторных животных. Методы микробиологической диагностики:1.вирусологический 2.иммуноиндикация (РСК, р. вирусонейтрализации с у четом в КТ и в организме лабораторных животных, РТГА для ЕСНО) 3.серологический (РСК, р. вирусонейтрализации с вирусными диагностикумами). Риновирусы не обладают гемагглютинином, хорошо размножаются в КТ, могут давать ЦПД. Различают два типа вируса М (размножаются в КТ клеток обезьян) и Н (размножаются в КТ клеток человека). Методы микробиологической диагностики:1. вирусологический

(материал - носоглоточный смыв) 2. иммуноиндикация 3.серологический Специфическая профилактика: только против полимиелита - советская вакцина -живая для перорального приема. Механизм защиты- вирусная интерференция,стимуляция выработки интерферона и АТ.