3 День исследования:
1. Описание характера роста на скошенном агаре:
- однородный, неоднородный; по штриху, сплошной, сливной.
2. Проверка чистоты накопленной культуры.
Готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Если накоплена чистая культура, то она подвергается дальнейшей идентификации. Идентификация бактерий до рода и вида основана на изучении особенностей метаболизма - биохимическая идентификация и антигенного строения -серологическая идентификация.
3. Изучение биохимических свойств.
Биохимические свойства - это способность бактерий расщеплять те или иные субстраты за счет продукции соответствующих ферментов. Для изучения биохимических свойств используют дифференциально-диагностические среды, содержащие различные субстраты (пестрый ряд). В их состав входят среды Гисса с углеводами, лакмусовое молоко, желатин, среды с аминокислотами, МПБ с индикаторами на сероводород и индол.
Сахаролитические свойства изучают на средах Гисса. В их состав входит пептонная вода, субстрат - углевод (различные моно- и полисахариды), многоатомные спирты и индикатор.
Если у бактерий есть ферменты расщепляющие субстрат-углевод, то они выделяют продукты метаболизма (кислоту или кислоту и газ) и индикатор меняет цвет среды. При образовании газа, регистрируются разрывы среды.
Протеолитические свойства - изучаются при посеве на желатин и лакмусовое молоко. Если у бактерий есть протеазы, то желатин разжижается. В молоке появляется сгусток кремового цвета, а над ним жидкость - пептонизация молока (за счет того, что протеазы бактерий расщепляют казеин молока до пептона).
Пептолитические свойства. Чаще бактерии способны расщеплять промежуточные продукты распада белков пептоны. Продукты этого процесса - амины (скатол, индол), аминокислоты, газы (сероводород, аммиак, углекислый газ).
Их можно обнаружить с помощью индикаторной бумаги:
- лакмусовая - для выявления аммиака;
- смоченная щавелевоуксусной кислотой - для выявления индола;-
- смоченная ацетатом свинца - для выявления сероводорода.
Продукты дезаминирования и декарбоксилирования аминокислот, обнаруживают с помощью тест - полос, изменяющих свой цвет при изменении РН среды.
4 День исследования:
1. Учет результатов биохимических тестов.
После того как культура идентифицирована до вида у нее изучают ряд дополнительных признаков, таких как чувствительность к антибиотикам, токсигенность, наличие факторов вирулентности, плазмидный профиль, а также проводят внутривидовую дифференцировку.
2. Результаты биохимической идентификации являются основанием для проведения серологической идентификации. Серологическая идентификация выделенной культуры проводится в реакции агглютинации на стекле с помощью соответствующих иммунных адсорбированных сывороток, выбор которых определяется результатами биохимической идентификации.
Внутривидовая дифференциация это определение принадлежности штамма к тому или иному фаговару, бактериоциногеновару, бактериоциновару, биовару, резистовару и т.д. Она позволяет выявить эпидемиологичяеские связи между штаммами одного вида.
Идентификация выделенной культуры позволяет сделать заключение о том, какой микроорганизм является этиологическим фактором заболевания. При выделении условно-патогенных бактерий необходимо соблюдать критерии этиологической значимости:
- присутствие бактерий в материале из патологического очага в количестве не менее 105КОЕ мл /г;
- повторное выделение из материала той же культуры;
- нарастания титра антител в сыворотке крови больного к аутоштамму в 4 и более раза.
ВИРУСОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ