Получение эргостерина.

Эргостерин является исходным продуктом при производстве витамина D2 и кормовых препаратов дрожжей, обогащенных этим витамином. Витамин D2 (эргокальциферол) образуется при облучении ультрафиолетом эргостерина, который в начительных количествах синтезируют бурые водоросли, дрожжи, плесневые грибы. Наиболее активные продуценты эргостерина — Saccharomyces, Rhodotoryla, Candida.

В промышленных масштабах эргостерин образуется при культивировании дрожжей и мицелиальных грибов на средах, содержащих избыток сахаров и недостаток азота, при высокой температуре и хорошей аэрации. Более интенсивно эргостерин образуют дрожжи рода Candida на средах с углеводородами. Кристаллический препарат витамина D2 получают при культивировании плесневых грибов (Penicillium, pergillus) Для получения кормовых препаратов проводят облучение суспензии или сухих дрожжей (Candida). Так, тонкий слои суспензии дрожжей облучают ультрафиолетовыми лампами с длиной волны 280-300 нм.

Для получения кристаллического препарата витамина дрожжи или грибной мицелии подвергают кислотному гидролизу. Витамин D2 экстрагируют спиртом, фильтруют, фильтрат упаривают и несколько раз промывают. Спиртовой экстракт сгущают до 50%-й концентрации сухих веществ, омыляют щелочью. Образовавшиеся кристаллы витамина очищают перекристаллизацией, сушат а эфире, отгоняя последний. Кристаллический осадок растворяют в масле. Препарат используют в медицинских Целях. Эргостерин служит также исходным продуктом для получения ряда стероидных гормонов, пищевых и лекарственных препаратов.

Получение интерферонов.

Интерфероны служат одним из самых эффективных средств лечения вирусных инфекций, но они видоспецифичны и могут быть получены только из клеток человека. Технология выделения и очистки интерферонов малоэффективна, прежде всего из-за крайне малого выхода конечного продукта. Поэтому получение генно-инженерного продукта является перспективной альтернативой традиционным методам выделения интерферонов.

Ген а-интерферона получили химико-ферментативным методом. Одной из трудностей, которую пришлось преодолеть, было то, что интерферон синтезируется в виде предшественника с дополнительной (сигнальной) последовательностью аминокислотных остатков. Бактериальные клетки не имеют протеиназ, превращающих предшественники в зрелые белки, поэтому надо было синтезировать ген, кодирующий только зрелый интерферон. Такой ген был получен и введен в клетку Е. coli. Физико-химические свойства а- интерферона, выделенного из бактерий, оказались близки к свойствам интерферона, выделенного из крови доноров.

Значительным событием явилась удачная попытка введения генов интерферонов в дрожжевые клетки. Замена бактериальной клетки в качестве реципиента на дрожжевую сыграла огромную роль для всей генно-инженерной техники вообще и для получения интерферонов в частности. Дело в том, что Р-интерферон и у-интерферон представляют собой гликозилированные белки, а процесс гликозилирования невозможен в Е. coli, но вполне осуществим в дрожжевой клетке для точного воспроизведения структуры Р-интерферона и у-интерферона. Рекомбинантные штаммы дрожжей синтезировали в больших количествах интерфероны, обладающие выраженной биологической активностью.

Применение интерферонов. Разработка методов получения лейкоцитарного и рекомбинантного интерферонов в препаративных количествах, а также высокоэффективных методов их очистки открыла возможность применения этих препаратов для лечения вирусных и онкологических заболеваний.

Интерфероны представляют высокую ценность при лечении целого ряда заболеваний: вирусного и хронического гепатитов, герпетической инфекции, острых респираторныхзаболеваний, рассеянного склероза, миеломы, остеосаркомы. Есть данные о положительном эффекте применения интерферонов для лечения рака легких, мочевого пузыря, , мозга и гортани.

Интерфероны выпускают в качестве лекарственных препаратов в виде каплей в нос, мазей или растворов для инъекций. Существуют натуральные интерфероны, полученные лимфоцитов донорской крови, и искусственно синтезиванные с применением генно-инженерных технологий, рекомбинантные. В настоящее время как у нас в стране, и за рубежом выпускают коммерческие препараты — челоовеческий лейкоцитарный, лимфобластный (Велферон, llferon) и фибробластный (Ферон), а также интерфероны, полученные генно-инженерными методами: рекомбинантные а-интерферон (Роферон, Реальдерон и др.), Р-интерферон и у-интерферон (Гаммаферон).

32