Генетическая инженерия 16.09.14
.pdf
Оценка стабильной экспрессии гена gfp
Стабильная экспрессия gfp гена в трансгенных тканях пшеницы
а |
б |
в |
а |
||
(а) Эмбриогенный каллус. |
б) Побег трансгенной |
в) Корешок трансгенной |
Экспрессия GFP, наблюдаемая на |
пшеницы. 35 дней |
пшеницы. 35 дней после |
21 день после трансформации. |
после трансформации. |
трансформации |
Экспрессия маркерного гена gfp, обнаруживаемая на 17 день после биобаллистической трансформации, определяется как стабильная
(Фадеев, Гапоненко, 2006)
Проф. А.К.Гапоненко |
61 |
Типы селекции (отбора) трансформированных клеток растений
Позитивная Негативная
придает преимущество в росте трансформированных клеток
ПРИ ПОЗИТИВНОЙ СЕЛЕКЦИИ,
трансформированные клетки получают возможность расти с использованием специального источника сахаров, азота или регуляторов роста, как агента селекции.
селекция препятствуют росту трансформированных клеток
ПРИ НЕГАТИВНОЙ СЕЛЕКЦИИ, более
традиционной, в среду для культивирования клеток добавляют токсичные или тормозящие развитие соединения - антибиотики или гербициды которые используются для уничтожения или предотвращения роста нетрансформированных клеток.
При позитивной селекции селективные гены способствуют росту
трансформированных тканей, а при негативной селекции селективные гены ведут к смерти или торможение роста нетрансформированных клеток и тканей.
Проф. А.К.Гапоненко |
62 |
Гены кодирующие токсичные антибиотики для негативной
селекции
Проф. А.К.Гапоненко |
63 |
|
Вещества и ферменты для углеводород зависимой позитивной селекции
Проф. А.К.Гапоненко |
64 |
Токсичные гербициды, гены их кодирующие для условно-позитивной селекции
Проф. А.К.Гапоненко |
65 |
|
Генетическая трансформация злаков via Agrobacterium tumefaciens
ИСТОЧНИК:
Plant Biotechnology Journal
(2006), 4, pp. 575–603 Ashok Kumar Shrawat and Horst Lцrz
Agrobacterium-mediated transformation of cereals: a promising approach crossing barriers
Проф. А.К.Гапоненко |
66 66 |
Трансформация пшеницы via Agrobacterium с селекцией на глифосате
Agrobacterium-mediated large-scale transformation of wheat (Triticum aestivum L.) using glyphosate selection,
Plant Cell Rep (2003) 21:1010–1019, T. Hu, S. Metz, C. Chay, H. P. Zhou, N. Biest ·G, Chen, M. Cheng, X. Feng, M. Radionenko, F. Lu,·J. Fry
a Four-day precultured immature embryo
b Agrobacterium infection, c embryogenic callus after 1 week mM glyphosate selection medium,
d shoot differentiation C+0.1 mM glyphosate e plantlet regeneration +0.02 mM glyphosate
f T0 transgenic plant (left) and non-transgenic control (right) 7 days after being sprayed with Roundup Ultra; this kind of transgenic event (left) with some vegetative damage will not be advanced to the next generation
Проф
Что еще необходимо нам рассмотреть по теме:
1.Компетентные к регенерации в растения клетки или ткани
2.Другие способы доставки генов в клетки, компетентные к регенерации в растения
3.Векторные конструкции для доставки генов, представляющих интерес
4.Селективные и маркерные гены
5.Способы регуляции экспрессии целевого гена в нужном месте и в нужное время.
6.Возможность «выключать» собственные гены растения и/или патогенного организма, насекомого вредителя.
7.Стабильность интеграции и наследования введенных генов
Проф. А.К.Гапоненко |
68 68 |
ДЛЯ УСПЕШНОГО ПРОИЗВОДСТВА ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ НЕОБХОДИМА ТРЕХКОМПОНЕНТАЯ СИСТЕМА:
ИНТЕГРАЦИЯ СИСТЕМЫ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК, СИСТЕМА ДОСТАВКИ ДНК, И ВЕКТОРА, НЕСУЩЕГО ГЕН ИНТЕРЕСА
69
69
Схематическое
представление физических и биологических методов, используемых для переноса генов в растения
Проф. А.К.Гапоненко |
70 |
70