Анализ полового хроматина X в мазках периферической крови

Хроматин X можно также выявить в ядрах полиморфноядерных нейтрофилов на препарах окрашенных по MAY-GRUNWALD-GIEMSA, в виде ядерных придатков. Ядерные придатки типа А имеют форму барабанных палочек (“drum stick”), соединенных нитевидным образованием с одной из долей ядра полиморфноядерного нейтрофила; ядерные придатки типа В, или "сидячие узелки" ("sessile nodules") имеют сходные с барабанными палочками размеры и форму, но связаны непосредственно с ядром. Величина ядерных придатков в обоих случаях составляет около 1,5 микрона.

В норме частота ядерных структур варьирует (1/6 - 1/98 ПМН) и, в среднем, составляет 38%. На практике на одном препарате должно быть выявлено не менее 6 типичных ядерных придатков для заключения о наличии хроматина X (положительный результат). Вывод об отрицательном тесте на хроматин X делается, если просмотрено не менее 500 нейтрофилов и не выявлено ни одного ядерного придатка.

Интерпретация результатов основана на тех же правилах, что и тест Барра:

Число ядерных придатков = числу хромосом Х – 1

Хроматин Y представляет 2/3 дистального плеча q хромосомы Y и в норме выявляется в интерфазных клетках мужчин. Для окрашивания используется флуоресцентный краситель куинакрин. Микроскопический анализ проводят в ультрафиолетовом свете, используя люминесцентный микроскоп. Хроматин Y выявляется в виде светящегося (флюоресцирующего) образования, в связи, с чем и был назван тельцем F. Тельце может быть расположено свободно или прикреплено к ядерной мембране; размеры его составляют около 0,25 микрона, а частота варьирует в различных клетках мужского организма:

■ 70-80% в фибробластах;

■ 45% в сперматозоидах.

Интерпретация результатов теста F:

Число телец F = числу хромосом Y

Тельце F представлено исключительно только у мужчин: в норме - в одном экземпляре, у лиц с кариотипом 47,XYY - в двух.

Практическое значение теста полового хроматина (показания и ограничения)

Тест хроматина X относится к экспресс тестам, т.к. является быстрым и недорогим методом, доступным даже для скромно оснащенной лаборатории, что обусловило его широкое применение.

1. Показания:

a) в пренатальном периоде: для установления генетического пола плода в случае, когда женщина является носителем Х-сцепленного патологического гена (например, гена гемофилии или мышечной дистрофии Дюшенна); проводится с использованием клеток амниотической жидкости;

b) у новорожденных: в случае интерсексуальности новорожденных (у новорожденного не выражены признаки пола и не пальпируется яичко) - для уточнения генетического пола и приведения его в соответствие с гражданским полом, последний имеет особое значение для формирования в дальнейшем соответствующего полового самосознания и поведения;

c) в постнатальный период: при различных нарушениях половой дифференцировки и уточнения генетического пола, для диагностики дисгенезии гонад, как следствия аномалий по числу и структуре половых хромосом;

d) в судебной медицине и криминалистике: для установления половой принадлежности фрагментов тканей, пятен крови, волос и т.д.