Цитогенетические методы

Цитогенетические методы включают различные техники микроскопического анализа хромосом на уровне клетки:

- анализ метафазных и прометафазных хромосом (кариотипирование);

- молекулярно-цитогенетические тесты на интерфазных хромосомах (FISH, mFISH, SKY).

- тест Барра для анализа Х-полового хроматина;

- тест F для анализа Y-полового хроматина.

Кариотипирование представляет анализ набора хромосом соматической клетки в процессе деления для определения количества, формы и величины хромосом, используя разные методы окраски/визуализации. Т.о., анализ метафазных или прометафазных пластинок позволяет выявить различные аномалии количества или структуры хромосом, которые вызывают плюримальформативные синдромы, неоплазии, нарушения половой дифференциации.

Анализ интерфазных хромосом, основанный на технике гибридизации in situ, позволяет определить субмикроскопические хромосомные аномалии (микроделеции и микродупликации) или определить позицию генов на хромосоме.

Тест полового хроматина используется для диагностики хромосомных синдромов в которые вовлечены гоносомы X и определения генетического пола. Х-половой хроматин (тельце Барра) может быть легко визуализирован на цитологических препаратах в интерфазе (количество X-хромосом в анализируемой клетке = количеству телец Барра + 1 хромосома).

Биохимические методы

Спектр биохимических методов предполагает анализ первичного генного продукта (белка), а также и метаболитов, контролируемых соответствующим белком. Используются методы качественного или количественного анализа, специфичные для определенного типа метаболитов.

Биохимические методы показаны для:

- изучения и диагностики моногенных болезней (особенно энзимопатий);

- изучения и диагностики мультифакториальных болезней (общие болезни взрослого);

- выявления предрасположенности к болезням

- изучения эволюции патологического процесса;

- определения эффективности лечения и т.д.

К примеру, при электрофорезе белков плазмы крови можно выявить индивидуальный полиморфизм и определить генетическую конституцию человека (генотип гомозиготный или гетерозиготный по данному признаку).

Генеалогический метод

Одна из особенностей наследственных признаков это их семейное накопление и передача из поколения в поколение. Генеалогический метод предусматривает семейный анализ, выявление индивидуумов с определенным признаком и прослеживание признака в нескольких поколениях. Это является очень важным для определения типа передачи признака и расчета вероятности проявления наследственного признака у потомков определенной пары родителей. Генеалогический анализ реализуется в несколько этапов:

- семейный анамнез;

- семейный анализ;

- составление родословной;

- анализ типа передачи признака;

- определение генотипа членов изучаемой семьи и расчет вероятности (риска) проявления

определенного фенотипа у потомков;

- генетическое консультирование.

Семейный анализ является первым шагом в получении информации о наличии определённого признака в семье. Как правило, информация собирается от пробанда (princeps propositus - первичный случай, человек который обращается в медико-генетическую консультацию). Данные анализа заполняются в специальных анкетах для медико-генетического консультирования и дополняются данными семейного анамнеза.

Семейный анализ включает:

- опрос родственников пробанда (как минимум 2-3 поколений);

- клинический и параклинический анализ пробанда и родственников пробанда (если анализируется патологический признак, исследованию подвергаются и здоровые и больные члены семьи);

- анализ индивидуальных медицинских карточек и листов;

- генетическое тестирование (в зависимости от случая - кариотип, половой хроматин, анализ ДНК, анализ сцепления с маркерами и т.д.).

Вся полученная информация с одной стороны составляет или дополняет семейный анамнез, а с другой стороны уточняет тип аномалии или болезни (точный клинический диагноз).

Анкеты медико-генетического консультирования включают следующие сведения: (а) если пробанд детского возраста: эволюция беременности, острые или хронические болезни у матери и прием во время беременности лекарств, контакт с мутагенными или терратогенными факторами; возраст родителей; степень родства между родителями; протекание родов (срок, продолжительность, акушерская помощь); новорожденные - вес, рост, баллы по шкале Апгар; постнатальное развитие.

(в) если пробанд взрослый: эволюция пубертантности, репродуктивная функция (нормальная или нарушенная: бесплодие, спонтанные аборты, мертворожденные или новорожденные е мальформациями); место работы, контакт с токсическими веществами.

Семейный анализ очень важный этап в дифференциации ненаследственной врожденной аномалии от ненаследственной патологии.

Составление родословной. Родословная или генеалогическое древо это графическое изображение результатов семейного анкетирования и используется для определения типа наследования, если признак наследственный.

Определение типа наследования признака, когда признак — наследственный, осуществляется в соответствии с критериями распознавания (наличие признака в каждом поколении или прерывистость в передаче; пропорции наличия признака у двух разных полов). Передача может быть моногенной или полигенной, аутосомной или сцепленной с половыми хромосомами, может быть определена доминантными или рецессивными аллелями. В зависимости от типа передачи, определяется генотип нормальных и больных членов семьи, рассчитывается риск (вероятность проявления анализируемой аномалии у потомков).

Результаты генеалогического анализа являются основой медико-генетического консультирования в целях:

- объективной информированности семьи;

- планирования семьи;

- определения возможности пренатальной диагностики для предупреждения рождения детей с мажорными аномалиями;

- предупреждения проявления осложнений в случае болезней с поздним проявлением у взрослых.