18)Приготовление препаратов для изучения м/о в нативном виде.

Метод прижизненного исследования микробов позволяет изучать форму, величину, строение микробной клетки и некоторые процессы жизнедеятельности в их естественном состоянии. Существую различные методы прижизненного исследования микробов: 1)в «раздавленной» капле 2)в «висячей» капле 3)в темном поле 4) с помощью прижизненной окраски 5)в фазово-контрастном микроскопе (микрокамере Пешкова).

Метод "висячей капли". Препарат готовят на покровном стекле, в центре которого наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Для микроскопии вначале используют малый сухой объектив 8Х, под увеличением которого находят край капли, а затем устанавливают объектив 40Х и исследуют препарат.

Метод "раздавленной" капли. На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Капля должна быть небольшой, не выходящей за край покровного стекла. Микроскопируют препарат с объективом 40Х. После микроскопии препараты "раздавленной" капли или "висячей" капли опускают в дезинфицирующий раствор.

19)Люминесцентная микроскопия.

Метод основан на способности некоторых веществ светиться при воздействии коротковолнового излучения. При этом испускаемые световые волны длиннее волны, вызывающей свечение. Иными словами, флюоресцирующие объекты поглощают свет одной длины волны и излучают в другой области спектра. Например, если индуцирующее излучение синее, то образующееся свечение может быть красным или желтым. Эти вещества используют как флюоресцирующие красители для наблюдения флюоресцирующих объектов. В люминесцентном микроскопе свет от источника проходит через два фильтра. Первый (синий) задерживает свет перед образцом и пропускает свет длины волны, возбуждающей флюоресценцию образца. Второй (желтый) задерживает синий цвет, но пропускает желтый, красный, зеленый свет, излучаемый флюоресцирующим объектом и воспринимаемый глазом. Обычно исследуемые м/о окрашивают непосредственно либо с помощью АТ или лектинов, помеченных флюорохромами. Препараты взаимодействуют с АГ или другими связывающими лиганд структурами объекта. Люминесцентная микроскопия нашла широкое применение для визуализации результатов иммунохимических реакций, основанных на специфическом взаимодействии меченных флюоресцирующими красителями АТ с АГ изучаемого объекта.

20)Темнопольная микроскопия.

Позволяет наблюдать живые бактерии. Для этого используют темнопольный конденсор, выделяющий контрастирующие структуры неокрашенного материала. Перед началом работы свет устанавливают и центруют по светлому полю, затем светлопольный конденсор удаляют и заменяют соответствующей системой (ОИ-10 или ОИ-21). Препарат готовят по методу «раздавленной капли», делая его как можно более тонким. Лучи от осветителя падают на объект сбоку, а в линзы микроскопа поступают только рассеянные лучи. Наблюдаемый объект выглядит освещенным на темном поле. В качестве иммерсионной жидкости пригодно вазелиновое масло.