3. Пиролитическая проба

Исследуемое вещество (около 0,1 г) помещают в сухую пробирку и нагревают на пламени спиртовки выше температуры плавления до появления окрашенного сплава.

4.Качественные реакции

Для идентификации сульфаниламидных препаратов существуют общие групповые или дифференцирующие и специфические реакции.

Общие групповые реакции

1.Все сульфаниламидные препараты, имеющие открытую первичную ароматическую аминогруппу (вещества с закрытой аминогруппой после кислотного гидролиза) диазотируются и при последующем сочетании солей диазония с фенолами или аминами в щелочной среде образуют азокрасители оранжево-красного или вишнево-красного цвета.

Методика определения:

Свободная аминогруппа. 0,03 – 0,05 г. препарата растворяют в 5 – 6 каплях разведенной хлористоводородной кислоты. К раствору прибавляют 2 – 3 капли 5% раствора натрия нитрита и полученный раствор переносят в пробирку, содержащую 1 мл щелочного раствора

B-нафтола.

Замещенная аминогруппа. 0,03 – 0,05 г. препарата растворяют в 1 мл

воды, прибавляют 1 мл разведенной хлористоводородной кислоты и нагревают до кипения. После охлаждения определение проводят, как указано выше.

2. Лигниновая проба.

Все сульфаниламидные препараты, имеющие открытую первичную ароматическую аминогруппу, при нанесении на древесину или газетную бумагу, смоченной каплей разведенной хлористоводородной кислоты, образуют оранжево-желтое окрашивание.

3.Реакции с солями тяжелых металлов.

Все сульфаниламидные препараты с солями тяжелых металлов образуют растворимые или нерастворимые окрашенные комплексные соединения.

Методика определения:

Препараты нерастворимые в воде. 0,05 г. препарата взбалтывают с 1 – 1,5 мл 0,1 Н раствора едкого натра, раствор сливают с осадка, разбавляют 1 мл воды, делят на 2 части и добавляют соответствующие реактивы.

Препараты нерастворимые в воде. 0,05 г. препарата растворяют в 2 мл воды и далее поступают, как указано выше.

4.Окисление перекисью водорода в присутствии железа(III) хлорида.

Методика определения: 0,02 г. препарата взбалтывают с 5 мл воды, добавляют 2 капли пергидроля и через несколько секунд – 2 капли 3% раствора железа(III) хлорида.

5.Окисление хлорамином.

Методика определения: К 0.02 – 0.03 г препарата прибавляют 10 капель 5% раствора хлорамина, 10 капель 1% раствора фенола и несколько секунд нагревают на кипящей бане.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СУЛЬФАНИЛАМИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ РАЗЛИЧНЫМИ МЕТОДАМИ

1. Метод нейтрализации – можно использовать для количественного определения норсульфазола-натрия, сульфацила-натрия, сульфапиридазина-натрия.

Методика определения: Около 0,1 г препарата (точная масса) растворяют в 10 – 20 мл воды и титруют 0,1 раствором хлористоводородной кислоты.

Индикатор – метиловый оранжевый (от желтого до оранжево-розового). Кроме того, метод нейтрализации можно использовать для количественного определения уросульфана, сульфадимезина, норсульфазола, фталазола, сульфапиридазина и других препаратов, используя в качестве растворителя воду, спирт или ацетон, а в качестве титранта 0,1 Н раствор едкого натра. Индикатор – фенолфталеин или смесь 3 частей 1% раствора фенолфталеина и 1 части 0,1% спиртового раствора тимолового синего.

Например: уросульфан. Около 0,1 г препарата (точная масса) растворяют в 20 мл воды при нагревании не выше 50^оС. При охлаждении титруют 0,1Н раствором едкого натра (индикатор - фенолфталеин).

2. Метод кислотно-основного титрования в неводной среде.

Т.к. SO₂ – группа является сильным электрофилом, поэтому сульфаниламиды можно титровать как кислоту в растворителях основного характера (диметилформамид или пиридин) с помощью метилата натрия (в смеси бензол-метанол) в присутствии индикатора тимолового синего до появления голубого окрашивания.

Методика: Около 0,1 г препарата (точная масса) растворяют в 10 мл диметилформамида, нейтрализованного по тимоловому синему и титруют 0,1 Н раствором метилата натрия (индикатор – тимоловый синий).

3. Методы анализа, основанные на реакциях электрофильного замещения ароматического ядра.

Бромато-йодометрическое определение можно показать на примере стрептоцида.

Методика определения: Около 0,1 г препарата (точная масса) стрептоцида растворяют в 20 мл воды при нагревании в колбе с притертой пробкой. После охлаждения прибавляют 40 мл 0,1 Н раствора калия бромата, 0,5 г калия бромида, 10 мл разведенной хлористоводородной кислоты, закрывают пробкой и оставляют в темном месте на 15 мин. Затем прибавляют 1,0 калия йодида, оставляют на 5 минут и титруют 0,1 Н раствором тиосульфата натрия до обесцвечивания раствора (индикатор - крахмал).

4. Фотоколориметрическое определение сульфаниламидных препаратов можно проводить на основании реакций получения азокрасителя или по продуктам взаимодействия кислых растворов сульфаниламида со спиртовым раствором ванилина.

Методика анализа, основанная на получении азокрасителя.

Около 0,1 г препарата (точная масса) растворяют в воде или 10% растворе хлористоводородной кислоты в мерной колбе вместимостью 500 мл и доводят объем водой до метки (раствор А).

1 мл раствора переносят в мерную колбу объемом 100 мл, смешивают с 2,5 мл 10% хлористоводородной кислоты и после охлаждения до 0^оС прибавляют 5 мл 0,5 % раствора натрия нитрита. Через 5 минут добавляют 1 г мочевины и оставляют на 10 – 15 минут. Затем прибавляют 1 мл 0,5% раствора тимола в 10% растворе едкого натра. Через 10 минут доводят объем водой до метки.

Оптическую плотность измеряют на фотоэлектроколориметре в кюветах с толщиной слоя 10 мм, при длине волны 470 нм (светофильтр № 5). Раствор сравнения – вода.

Одновременно измеряют оптическую плотность стандартного раствора.

Содержание препарата рассчитывается по формуле:

Х=

Где: D_иссл. – оптическая плотность исследуемого раствора препарата;

D_cт. - оптическая плотность стандартного раствора;

0,0002 – содержание препарата в 1 мл стандартного раствора, г.;

a – точная масса препарата, г;

500 – объем мерной колбы, мл;

I – количество мл исследуемого вещества, взятого для анализа из мерной колбы.

Приготовление стандартного раствора: 0,1000 г препарата (точная масса) растворяют в воде или в 10% хлористоводородной кислоте в мерной колбе на 500 мл и доводят водой до метки. Далее поступают так, как описано выше.

Определение, основанное на реакциях образования оснований Шиффа (конденсация сульфаниламидных препаратов с открытой аминогруппой и ванилином).

Приготовление стандартного раствора: 0,1000 г препарата (точная масса), отвечающего требованиям ГФ Х растворяют в 10% хлористоводородной кислоте в мерной колбе на 100 мл и доводят водой до метки.

В 1 мл стандартного раствора содержится 10 мг препарата.

Спектрофотометрическое определение

Количественное содержание сульфаниламидных препаратов в %(С) можно определить методом УФ – спектрофотометрии, по формуле:

где: D – оптическая плотность исследуемого вещества;

- удельный показатель поглощения;

б – толщина слоя;

а – точная масса, г;

n – разведение.

Для определения удельного показателя поглощения из стандарта или препарата фармакопейной чистоты готовят серию растворов, определяют их оптическую плотность при длине волны, соответствующей максимальному поглощению и ведут расчет по формуле:

Таким методом можно определить, например, сульфапиридазин.

Для удельного показателя поглощения готовят серию водных растворов с содержанием в 1 мл 1, 4, 6, 8, 10 мкг сульфапиридазина, перекристаллизованного из метилового спирта и определяют их оптическую плотность при длине волны 262 нм.

Методика: 0,01 г (точная навеска) сульфапиридазина, перекристаллизованного из метилового спирта, растворяют в воде при нагревании (до 50 – 60^оС) и переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и по охлаждении доводят водой до метки (раствор А). Из раствора А готовят серию водных растворов сульфапиридазина с концентрацией 2, 4, 6, 8, 10 мкг в 1 мл. Оптическую плотность растворов измеряют при длине волны 262 нм в кюветах с толщиной слоя 1 см. Раствором сравнения служит дистиллированная вода. Удельный показатель поглощения сульфапиридазина в воде при длине волны 262 нм равен 650.

13