Тимоловая проба

Принцип Сывороточные р-, у-глобулины и липопротеины осаждаются при рН 7,55 тимоловым реактивом вследствие образования глобулин-тимол-липидного комплекса.

Реактивы Тимоловый буфер, рН 7,55-7,6.

Практическое значение Как и все коагуляционные тесты, тимоловая проба является неспецифической реакцией. Вместе с тем, она гораздо более спе­цифична для функционального исследования печени, чем другие коллоидные пробы. В 90-100% случаев тимоловая проба положи­тельна при болезни Боткина (уже в преджелтушной стадии или при безжелтушной форме) и при токсическом гепатите. При механи­ческой желтухе тимоловая проба отрицательна.

Оформление работы Отмечают принцип методов, регистрируют результаты анализа и делают вывод.

Билет №15

1)

По строению бокового радикала – неполярные (алифатические, аромати-

ческие) и полярные (незаряженные, отрицательно и положительно заряжен-

ные);

По необходимости для организма (физиологическая классификация) – не-

заменимые (Лей, Иле, Вал, Фен, Три, Тре, Лиз, Мет) и заменимые. Две ами-

нокислоты являются условно незаменимыми (Арг. Гис)

2)

Давно выяснено, что все ферменты являются белками и обладают всеми свой-

ствами белков. Подобно белкам они делятся на простые исложные.

Простые состоят только из аминокислот – пепсин, трипсин, лизоцим.

Сложные ферменты имеют в своем составе белковую часть, состоящую из ами-

нокислот – апофермент, и небелковую часть –кофактор. Кофактор может назы-

ваться коферментом, если он легко отделяется от апобелка, илипростетической

группой, если он связан с белком прочно.

N.B. Для осуществления катализа

необходим комплекс апобелка и ко-

фактора, по отдельности они катализ

осуществить не могут.

В составе апофермента выделяют

несколько участков, выполняющих раз-

личную функцию.

1. Активный центр – комбинация

аминокислотных остатков, обеспечи-

вающая непосредственное связывание

с молекулой субстрата и осуществ-

ляющая катализ. Аминокислотные ра-

3

дикалы в активном центре могут находиться в любом сочетании. При разворачива-

нии пептидной цепи аминокислоты активного центра могут значительно удаляться

друг от друга.

У сложных ферментов в активном центре обязательно расположены функцио-

нальные группы кофактора.

В свою очередь в активном центре выделяют два участка:

• Якорный (или контактный, или связывающий) – отвечает за связывание и

ориентацию субстрата в активном центре

• Каталитический – отвечает непосредственно за осуществление реакции.

2. Аллостерический центр (allos - чужой) – регуляторный центр, пространствен-

но отделен от активного, имеется не у всех ферментов и осуществляет регуляцию

активности фермента. Связывание с ним какой-либо молекулы, называемой эффек-

тором, модулятором, регулятором, активатором или ингибитором, вызывает измене-

ние конфигурации белка и, как следствие, скорости ферментативной реакции. В ка-

честве такого регулятора чаще всего выступает продукт данной реакции или одной

из последующих реакции.

3)

Влияние активаторов и ингибиторов на активность амилазы

Принцип Метод основан на сравнении скорости гидролиза крахмала под действием амилазы слюны до и после добавления ионов Ch и Си²*. Действие фермента на субстрат выявляется при помощи реакции с йодом.

Реактивы 1)1% раствор CuS0₄,

2. раствор Люголя,

3. 0,9% раствор NaCI.

Материал исследования Слюна, разведенная 1:10 (источника-амилазы). Проведение реакции

1. Приготовление разведенной слюны 1:10: собирают 1 мл слюны в центрифужную пробирку и доводят дистиллированной водой до метки 10 мл, хорошо перемешивают.

2. Берут три пробирки. В первую добавляют 10 капель дистилли­рованной воды, во вторую - 10 капель раствора NaCI, в третью - 10 капель раствора CuS0₄.

3. Добавляют в каждую пробирку по 10 капель разбавленной слю­ны, перемешивают.

1. Добавляют по 10 капель раствора крахмала.

2. Ставят в водяную баню (37 °С) на 5 минут.

4. Готовят три пробирки с водой по 1 мл в каждой, добавляют 1-2 капли реактива Люголя и прибавляют по 5 капель содержимого опытных пробирок. Сравнивают окраску в пробирках. Если су-г щественной разницы в окраске нет, то инкубацию опытных проб увеличивают до 10-15 минут.