Principy_diagnostiki_allergicheskih_zabolevanij_Belan_2025

с процессом дегрануляции базофилов, например, CD63 или поверхностных (мембранных) IgE (рис. 3). Обнаружение антигенов считается более точным и надежным методом обнаружения активации базофилов по сравнению с высвобождением гистамина.

Рис. 3. Фенотип покоящихся (слева) и активированных (справа) базофилов

Наиболее часто на сегодняшний день в качестве маркеров активации базофилов используются CD63+, CD203c+ и поверхностные IgE. В частности, экспрессия CD63 непосредственно и сильно позитивно коррелирует с выбросом гистамина при активации базофилов. Активация базофилов может быть выявлена также опре-

делением CD193 (CD193+), CD123/HLA-DR (CD123+HLA-DR–), CD107a (CD107a+) или диаминооксидазы.

– 30 –

Наиболее точные и релевантные результаты оценки активации базофилов могут быть получены при одновременном выявлении двух или более вышеперечисленных маркеров активации.

Методы выявления поверхностных антигенов на активированных базофилах также достаточно разнообразны и включают в себя различные варианты иммуноферметного анализа, иммунофлюоресцентного анализа (рис. 4) или проточную цитометрию.

Рис. 4. Иммунофлюоресцентная окраска CD63 и CD203c в изолированных базофилах

Очищенные базофилы обрабатывали анти-IgE (в отношении 1 : 100) или буферным раствором в течение 20 мин при 37 °С. Образцы были блокированы и окрашены специфическими первичными антителами к CD63 и CD203c и козлиными вторичными антителами против мышиных IgG (H+L), конъюгированных

– 31 –

с молекулами IgE на базофилах и мастоцитах происходит каскад ферментных реакций, приводящих к синтезу и секреции медиаторов аллергического воспаления, в том числе и лейкотриенов. Лейкотриены синтезируются также и в случае псевдоаллергической реакции, т. е. без участия sIgE, поэтому CAST также называют провокационным тестом in vitro.

Рис. 5. Пример результатов анализа теста активации базофилов методом проточной цитометрии [6]

Благодаря синтезу сульфидолейкотриенов de novo анализ CAST обладает высочайшей специфичностью. В качестве положительного контроля для каждого образца используют моноклональные антитела к высоко аффинному рецептору IgE (FcεRI),

– 33 –

обеспечивающие имитацию связывания IgE-антител с рецептором на мембране базофилов, что дополнительно повышает специфичность метода. Метод CAST хорошо дополняет рутинные кожные тесты и определение аллерген-специфических IgE в крови, что

иопределяет его перспективы для:

-диагностики IgE-зависимой аллергии и псевдоаллергических реакций, особенно лекарственной непереносимости, в случаях противоречивых или отрицательных результатов кожных тестов и анализа IgE в пуповинной крови;

-диагностики аллергии к ядам насекомых, для принятия решения о проведении специфической иммунотерапии аллергенами насекомых и контроле АСИТ (уровень лейкотриенов снижается на 50 % и более в течение 1 года после успешного лечения);

-определения аутоанти-IgE-антител и антител к рецептору IgE, обнаруживаемым в некоторых случаях хронической крапивницы;

-подбора адекватной схемы лечения, а также для составления гипоаллергенной диеты.

В целом, говоря о BAT, необходимо ответить, что его результаты предоставляют важнейшую и максимально точную информацию для клинических решений относительно диагноза и терапии аллергических состояний.

Определение уровня сывороточных триптазы и гистамина для диагностики анафилаксии

Лабораторные тесты для подтверждения анафилаксии целесообразно проводить в определенное время после развития реакции:

- определение уровня сывороточной триптазы – через 15 минут – 3 часа после возникновения первых симптомов и после выздоровления;

– 34 –

- определение уровня сывороточного гистамина – в течение 15–60 минут после возникновения первых симптомов (менее информативный метод).

Однако необходимо помнить, что изменение уровня гистамина и триптазы не является абсолютным критерием анафилаксии, потому как повышенный уровень гистамина может выявляться и при неаллергической гиперчувствительности, а уровень триптазы может повышаться при инфаркте миокарда, травме и других состояниях. С другой стороны, нормальные уровни гистамина и триптазы, определяемые в оптимальные сроки, не исключают диагноза анафилаксии.

Оценка интенсивности аллергического воспаления

Для оценки интенсивности воспалительного процесса, вызванного аллергическими реакциями, в клинической практике используются следующие методы:

-определение признаков активации эозинофилов (эозинофильный катионический протеин, эозинофилы низкой плотности, медиаторы и метаболиты – эозинофильная пероксидаза);

-определение метаболитов лейкотриенов (кровь, БАЛ, моча, выдыхаемый воздух);

-определение метаболитов эйкозаноидов (9a,11b-PGF2; LTE4);

-усиленная экспрессия молекул адгезии (sICAM-1, VICAM-1, L-селектин, эндотелин);

-реакция Праустница – Кюстнера (в настоящее время не используется).

Компонентная диагностика

Определение уровня специфических IgE может осуществляться как с использованием природных или частично очищенных

– 35 –

экстрактов аллергена, так и отдельных его молекулярных компонентов, поскольку характерным свойством природных аллергенов является их сложный состав.

Все природные аллергены представляют собой смеси нескольких индивидуальных химических компонентов переменного состава. Так, например, аллергенность яблок определяется четырьмя различными белковыми компонентами (от Mald 1 до Mald 4), а плодов арахиса – не менее чем 9 компонентами (от Arah 1 до Arah 9). Аллергенность коровьего молока зависит

– 36 –

Из табл. 10 хорошо видно, что различные индивидуальные компоненты обладают разной степенью аллергенности и в различной степени могут быть связаны с перекрестной аллергенностью с другими видами организмов. Такая ситуация характерна для всех известных природных аллергенов. Фактически, можно утверждать, что перекрестная реактивность аллергенов является в живой природе правилом, а не исключением. Примеры широкой перекрестной реактивности белковых аллергенов приведены на рис. 6, 7.

Рис. 6. Перекрестная реактивность между аллергенными липокалинами [6]

Наблюдающаяся в подавляющем числе случаев перекрестная чувствительность пациентов к различным аллергенам имеет достаточно простое объяснение на молекулярном уровне.

Если посмотреть на структуру индивидуальных компонентов аллергенов различных видов организмов, вызывающих перекрестные аллергические реакции у пациентов, легко обнаружить, что в каждом из таких аллергенов выявляются молекулярные компоненты белковой природы, обладающие весьма сходной, порой почти идентичной пространственной структурой.

– 37 –