Laboratornye_metody_ocenki_gumoralnogo_zvena_immuniteta_ Belan_E_B2021
.pdf
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Э. Б. Белан, С. А. Осипов, Т. Л. Садчикова
Учебно-методическое пособие
Издательство
ВолгГМУ
Волгоград
2021
– 1 –
УДК 612.017.1:616-07(07)
ББК 28.073+53.4я7 Б43
Рецензенты:
зав. кафедрой микробиологии, вирусологии, иммунологии с курсом клинической микробиологии д-р мед. наук, профессор В. С. Замараев;
зав. кафедрой патофизиологии, клинической патофизиологии д-р мед. наук, профессор
Л. Н. Рогова
Печатается по решению ЦМС ВолгГМУ (протокол № 2 от 22.12.2020 г.)
Белан, Э. Б.
Б43 Лабораторные методы оценки гуморального звена иммунитета : учебно-методическое пособие / Э. Б. Белан, С. А. Осипов, Т. Л. Садчикова. – 2-е изд., исп. и доп. – Волгоград : Изд-во ВолгГМУ, 2021. – 84 с.
В настоящем учебно-методическом пособии представлены основные сведения о лабораторных методах оценки гуморального звена иммунитета. Пособие составлено по дисциплине «Иммунология», для студентов, обучающихся по специальности «Медикопрофилактическое дело».
Учебно-методическое пособие позволяет развивать компетенции УК-1 и ОПК-5.
УДК 612.017.1:616-07(07)
ББК 28.073+53.4я7
©Волгоградский государственный медицинский университет, 2021
©Издательство ВолгГМУ, 2021
– 2 –
ВВЕДЕНИЕ............................................................................................................ |
4 |
ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ГУМОРАЛЬНОГО |
|
ЗВЕНА ИММУНИТЕТА ....................................................................................... |
5 |
Типы зрелых В-лимфоцитов ........................................................................... |
7 |
Строение В-клеточного рецептора.................................................................. |
9 |
Механизм активации В-лимфоцитов ........................................................... |
10 |
Маркеры активации В-лимфоцитов ............................................................. |
11 |
Проточная цитофлоуметрия .......................................................................... |
13 |
Метод розеткообразования для определения |
|
В-лимфоцитов в периферической крови ..................................................... |
16 |
Определение В-лимфоцитов методом спонтанного |
|
розеткообразования с эритроцитами быка (Е-РОК) ................................. |
17 |
Реакция радиального гемолиза в геле .......................................................... |
22 |
МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ |
|
ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ......................................... |
25 |
Реакция радиальной иммунодиффузии (по Манчини) ............................ |
25 |
Встречная иммунодиффузия по Оухтерлони и Элеку............................... |
28 |
Нефелометрия................................................................................................... |
30 |
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ |
|
ИММУНОГЛОБУЛИНОВ .................................................................................. |
32 |
Иммуноферментный анализ (ИФА).............................................................. |
32 |
Радиоиммунный анализ (РИА) ...................................................................... |
41 |
Иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА).......................................... |
48 |
Иммуноблоттинг .............................................................................................. |
55 |
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ ......... |
59 |
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АФФИННОСТИ ПУТЕМ |
|
ИЗМЕРЕНИЯ ГАШЕНИЯ ФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ............................................... |
62 |
Тестовые задания для самоконтроля............................................................ |
68 |
Контрольные вопросы..................................................................................... |
82 |
Рекомендуемая литература ............................................................................ |
83 |
– 3 –
В настоящем учебно-методическом пособии описаны методики проведения и области применения лабораторной оценки гуморального звена иммунитета. Кратко изложена информация о классификации, механизмах активации и рецепторном аппарате B-лимфоцитов, как ключевого звена гуморального иммунитета. В учебно-методическое пособие включены тестовые задания.
Учебно-методическое пособие составлено в соответствии с Федеральным государственным образовательным стандартом (Приказ № 552 от 15.06.17), учебным планом ВолгГМУ, рабочей программой и требованиями к минимуму содержания и базовому уровню подготовки. Оно позволяет развивать навыки работы с учебной, научной и справочной литературой и навык интерпретации результатов исследований биосубстратов, обследований различных контингентов для решения профессиональной задачи (компетенции УК-1 и ОПК-5).
– 4 –
Гуморальные факторы иммунитета представляют собой комплекс белков, растворимых в крови и жидкостях организма. Эти факторы способны сами обладать антимикробными свойствами или могут опосредованно активировать другие гуморальные и клеточные механизмы противоинфекционной защиты.
Кнеспецифическим гуморальным факторам иммунитета относятся белки системы комплемента, интерфероны, С-реактивный белок, лизоцим, трансферрин и другие факторы неспецифической гуморальной защиты
Кспецифическим факторам гуморального иммунитета относятся иммуноглобулины – гликопротеины, выделяемые иммунокомпетентными клетками при специфической
ееактивации и способные специфически связываться с соответствующим антигеном.
Практический интерес в оценке состояния гуморального звена иммунитета представляет определение, как суммарного уровня иммуноглобулинов, так и уровня иммуноглобулинов различных классов. Это очень важный и надежный метод его оценки. Его можно считать главным методом диагностики всех форм иммунодефицитов, связанных с недостаточностью биосинтеза антител. Изменения концентрации иммуноглобулинов служат подтверждением гуморально-ассоциированной иммунопатологии.
–5 –
Важную информацию о состоянии гуморального иммунитета дает определение специфических антител к различным антигенам, так как степень защиты организма от данной конкретной инфекции зависит не от общего уровня иммуноглобулинов, а от количества специфических антител к ее возбудителю.
Оценка функционального состояния гуморального звена иммунитета по Р. М. Хаитову предполагает выполнение следующих лабораторных тестов:
относительное и абсолютное содержание В-лимфо-
цитов;
уровени IgA, IgG, IgM, IgE в сыворотке крови и других биологических жидкостях;
аффинность антител;
циркулирующие иммунные комплексы;
титры антител к некоторым оппортунистическим микробам.
– 6 –
Клеточную основу гуморального звена иммунитета составляют В лимфоциты. Эти клетки рождаются и созревают в костном мозге, выходят в кровь, переносятся в периферические органы иммунной системы, где они взаимодействуют с антигенами и/или Т-лимфоцитами. В результате В-лимфоциты частично превращаются в плазматические
клетки и в клетки памяти. |
|
|
В1 и В2 – лимфоциты: |
|
|
В настоящее время описаны В1 |
и |
В2 клетки. |
Их преимущественное отличие состоит |
в |
способности |
вырабатывать различные классы антител и локализации в организме.
В1-лимфоциты секретируют антитела, которые направлены для борьбы с недавно проникшим в организм чужеродным агентом (иммуноглобулины М), поэтому клетки данного вида располагаются в прибарьерных полостях, а В1-лимфоциты обеспечивают первую линию специфической защиты.
В2-лимфоциты образуют основной пул В-лимфоцитов и характеризуются широким разнообразием B-клеточных рецепторов.
Данная подгруппа В-клеток распознает Т-зависимые антигены, способна продуцировать иммуноглобулины разных классов, а также формирует иммунологическую память.
По своему участию в иммунном ответе В-клетки делятся на три основных типа:
– 7 –
1. Наивные В-лимфоциты
Это клетки, которые только что созрели, отправились из костного мозга в периферические органы иммунной системы и еще не встретились с антигеном.
2. В-клетки памяти
Клетки памяти являются долгоживущим клоном. Иногда продолжительность их жизни составляет годы и десятилетия.
Иммунологическая роль данного типа клеток состоит в «запоминании» информации о встреченном антигене и, при его повторном попадании в организм, эти клетки стимулируют быстрый и более эффективный иммунный ответ. Именно клетки памяти формируют пожизненный иммунитет к некоторым заболеваниям.
3. Плазматические клетки
Когда наивные В-клетки активируются антигеном, то все лимфоциты, не ставшие клетками памяти, становятся плазмоцитами. Они видоизменяются: в них сильно развиваются эндоплазматическая сеть и комплекс Гольджи. Плазмоциты синтезируют антитела, агрессивно действующие на проникший в организм чужеродный агент. В отличие от предыдущей группы, плазматические клетки недолго сохраняются в крови в увеличенном количестве: как только агрессор выводится из организма, клетки сразу погибают.
– 8 –
Антигенсвязывающей молекулой В-лимфоцитов является мономерный иммуноглобулин М, связанный с мембраной клетки. Молекула IgМ также плотно связана с гетеродимерами Ig-α / Ig-β. Этот комплекс молекул и формирует единый В-клеточный рецептор (BCR) (рис. 1). Каждый гетеродимер содержит экстрацеллюлярный Ig-подобный сегмент, мембранный участок и цитоплазматический хвост, который связан с внутриклеточными сигнальными молекулами. Гетеродимеры Ig-α / Ig-β участвуют в трансдукции сигнала с IgМ в ядро клетки. Дефектность молекул Ig-α / Ig-β нарушает проведение сигнала с рецептора внутрь клетки.
Рис. 1. Строение В-клеточного рецептора (Kurosaki T., 2011)1
1 Kurosaki, T. Regulation of BCR signaling / T. Kurosaki // Mol Immunol. – 2011. – Vol. 48, вып. 11. – P. 1287 – 1291.
– 9 –