ÐÑновнÑе_ÑоÑмÑ_бакÑеÑий_ÐÑÑоение_бÐ

Treponema pallidum – возбудитель сифилиса.

-боррелии – имеют крупные неравномерные первичные завитки и за-

остренные концы:

Borrelia burgdorferi, B. afzelii, B. garini – возбудители болезни Лайма.

-лептоспиры – имеют мелкие тесно прилегающие друг к другу пер-

вичные завитки, крючкообразно загнутые концы и крупные вторич-

ные завитки, придающие микробам S- или С-образную форму:

Leptospira interrogans – возбудитель лептоспироза.

Трепонемы Боррелии Лептоспиры

Рис. 10 – Спирохеты, имеющие медицинское значение

ВЕТВЯЩИЕСЯ БАКТЕРИИ

АКТИНОМИЦЕТЫ (от греч. actis – луч, mykes – гриб) – ветвящиеся палочковидные бактерии (рис. 11). Отличительный признак – способность образовывать мицелий из тонких нитевидных ветвящихся клеток, что прида-

ет им сходство с грибами. Размножаются путем фрагментации мицелия на палочки и кокки.

Большинство актиномицетов – сапрофиты, обитают в почве. Некоторые из них являются продуцентами антибиотиков. Патогенные виды (Actinomyces israelii) вызывают у человека актиномикоз – хронический гнойно-

воспалительный процесс различной локализации.

21

Рис. 11 – A. israelii. Чистая культура. Окраска по Граму

Самые мелкие представители бактерий: микоплазмы, риккетсии,

хламидии.

МИКОПЛАЗМЫ – не имеют клеточной стенки, поэтому могут быть разнообразной формы от кокковидной до нитевидной. Имеют малые размеры

(0,1-1,2 мкм). Mycoplasma pneumoniaе – возбудитель атипичной пневмонии.

РИККЕТСИИ – мелкие короткие палочки, могут быть разнообразной формы от кокковидной до нитевидной. Rickettsia typhi – возбудитель эндеми-

ческого сыпного тифа.

ХЛАМИДИИ – самые мелкие бактерии сферической формы (менее 1,2

мкм). Chlamydia trachomatis – возбудитель урогенитального хламидиоза.

7. Морфология дрожжеподобных и плесневых грибов.

Дрожжеподобные грибы рода Candida. Роль в патологии.

Микроскопические грибы относят к царству Eumycota. Это эукариотиче-

ские микроорганизмы. Они имеют оформленное ядро с ядерной оболочкой и ядрышками, митохондрии, аппарат Гольджи.

ДРОЖЖЕПОДОБНЫЕ ГРИБЫ рода Candida – условно-патогенные микроорганизмы, широко распространены в окружающей среде, являются симбионтами организма человека. Отличаются от истинных дрожжей отсут-

22

ствием размножения спорами. Это крупные округлой или овальной формы клетки (рис. 12). Размножаются почкованием. Род Candida включает около

200 видов. Некоторые представители дрожжеподобных грибов (С. albicans, C. tropicalis и др.) при снижении резистентности макроорганизма могут вы-

зывать микозы (кандидозы) – локальные с поражением кожи, слизистых оболочек, внутренних органов, или генерализованные (кандидозный сеп-

сис).

Рис. 12 – C. albicans. Чистая культура (споровые и мицеллярные формы).

Окраска по Граму

Микроскопические ПЛЕСНЕВЫЕ ГРИБЫ представляют собой скоп-

ления тонких ветвящихся нитей (гифы), формирующих мицелий. Различают субстратный мицелий, погруженный в питательную среду, и воздушный,

растущий на поверхности среды. Размножаются при помощи спорообразова-

ния. Плесневые грибы – сапрофиты, широко распространенные во внешней среде. Используются как продуценты антибиотиков. Могут вызывать заболе-

вания только у ослабленных людей.

Различают следующие виды плесневых грибов (рис. 13):

1. Мукоровая (одноклеточная) плесень (Mucor) – на концах плодонося-

щих гиф располагаются шарообразные расширения (спорангии), наполнен-

ные эндоспорами.

2. Кистевики (Penicillium), многоклеточные грибы, у которых концы плодоносящих гиф имеют вид кисточек.

23

3. Леечная (многоклеточная) плесень (Aspergillus) – на концах плодоно-

сящих гиф имеются небольшие клетки (стеригмы), на которых располагают-

ся цепочки конидий (эндоспоры), что напоминает льющуюся из лейки воду.

Рис. 13 – Гифальный тип грибов: 1 – Mucor, 2 – Penicillium, 3 – Aspergillus

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. Порядок работы с иммерсионной системой светового микроскопа.

Вывести иммерсионный объектив ×90 на оптическую ось микроскопа.

Включить осветитель. На предметное стекло с препаратом нанести каплю иммерсионного масла и положить на предметный столик микроскопа. Погру-

зить объектив в каплю масла. Смотря в окуляр, макровинтом опустить объек-

тив до появления изображения. Четкость изображения достигается работой микровинта.

2. Провести микроскопию демонстрационных окрашенных препаратов мик-

роорганизмов.

24

Занятие № 2

Тема. Виды микроскопии. Техника приготовления и окрашивания бактерио-

логического препарата (мазка). Простые и сложные методы окраски препара-

тов. Клеточная стенка бактерий – строение и значение.

Цель занятия. Ознакомиться с видами микроскопии, используемыми для диагностики инфекционных заболеваний. Освоить технику приготовления мазков микроорганизмов с плотной и жидкой питательных сред. Изучить строение клеточной стенки бактерий, изучить простой и сложные (по Граму и Цилю-Нильсену) методы окраски препаратов.

I.Теоретические знания:

1.Виды микроскопии, используемые в медицинской микробиологии.

2.Техника приготовления и окрашивания бактериологического препарата.

Принцип простого и сложного методов окраски.

3.Клеточная стенка бактерий – строение и значение. Окраска по Граму, ме-

ханизм окраски. Примеры грамположительных и грамотрицательных бак-

терий.

4.Особенности клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий, окраска по Цилю-Нильсену, механизм окраски.

5.L-формы бактерий, их медицинское значение. Микоплазмы.

II.Практические навыки:

1.Освоение техники приготовления мазков для микроскопического исследо-

вания.

2.Окраска мазков простым методом.

3.Микроскопия демонстрационных препаратов, окрашенных сложными ме-

тодами (по Граму и Цилю-Нильсену).

25

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Виды микроскопии, используемые в медицинской микро-

биологии.

Для диагностики инфекционных заболеваний используют световой,

темнопольный, фазово-контрастный, люминесцентный и электронный мик-

роскопы.

Общее увеличение микроскопа определяют произведением увеличе-

ний объектива и окуляра.

Разрешающая способность микроскопа – это наименьшее расстояние между двумя точками, при котором они видны раздельно.

СВЕТОВОЙ МИКРОСКОП.

Разрешающая способность 0,2 мкм.

Предназначен для изучения формы, размеров и структуры окрашенных клеток.

При исследовании микроорганизмов применяют

иммерсионный объектив. Его преимущество – с по-

мощью иммерсионного масла устанавливается оптиче-

ски однородная среда с одинаковым показателем пре-

ломления светового луча между стеклом и линзой.

Благодаря этому все лучи, не преломляясь и не изме-

няя направления, попадают в объектив, чем достигает-

ся более высокая разрешающая способность.

В качестве иммерсионных используют специальные масла, показатель преломления которых равен показателю преломления света в стекле.

Световую микроскопию применяют для микроскопического метода диа-

гностики бактериальных (острая мужская гонорея, первичный сифилис, ту-

беркулез) и вирусных (ЦМВИ, бешенство) инфекций, а также в ежедневной

бактериологической практике.

26

ТЕМНОПОЛЬНЫЙ МИКРОСКОП.

Разрешающая способность – 0,2-0,4 мкм.

Предназначен для изучения формы, размеров и подвижности живых, не-

окрашенных бактерий (рис. 14).

Темное поле создается с помощью специального конденсора, в котором затемнена центральная часть и таким образом создается боковое освещение.

Поэтому в объектив попадают лучи, отраженные от объекта. Увеличение разрешающей способности микроскопа связано с тем, что отраженный луч имеет более короткую длину волны.

Рис. 14 – Мазок со слизистой оболочки ротовой полости в темнопольном микроскопе

ФАЗОВО-КОНТРАСТНЫЙ МИКРОСКОП.

Разрешающая способность – 0,2 мкм.

Предназначен для изучения формы, подвижности и структуры живых неокрашенных бактерий.

Имеет специальный набор фазовых объективов и соответствующих им кольцевых диафрагм конденсора. С помощью этого устройства достигается преобразование невидимых фазовых колебаний преломленного луча в види-

мые амплитудные колебания.

Темнопольную и фазово-контрастную микроскопию используют для ди-

агностики инфекций, вызываемых подвижными бактериями (холера, сифи-

лис, лептоспироз, боррелиоз).

27

ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МИКРОСКОП.

Разрешающая способность – 0,1 мкм.

Люминесцентная микроскопия основана на способности некоторых веществ светиться под действием коротковолновых ультрафиолетовых

(УФ) лучей. Препараты для люминесцентной микроскопии окрашивают специальными люми-

несцентными красителями – флуорохромами (ак-

ридиновый оранжевый, аурамин и др.).

В качестве источника УФ-света обычно используют ртутно-кварцевую лампу. Под действием УФ-излучения окрашенные флуорохромом клетки светятся красным или зеленым светом (рис. 15).

Люминесцентная микроскопия предназначена для экспресс-диагностики вирусных (грипп и др.) и бактериальных (туберкулез, холера и др.) инфек-

ций.

Рис. 15 – Люминесцентная микроскопия (А – бактерии в люминесцентном микроскопе, В – клетки цилиндрического эпителия, зараженные вирусом).

ЭЛЕКТРОННЫЙ МИКРОСКОП.

Разрешающая способность – менее 1Å (ангстрем), 1Å = 10-10 м.

28

В электронном микроскопе вместо света используют поток электронов в без-

воздушной среде. Высокая разрешающая способность достигается малой длиной волны электронов.

Для исследования препаратов в элек-

тронном микроскопе применяют специаль-

ные линзы, управляющие движением элек-

тронов при помощи электромагнитного по-

ля.

Электронную микроскопию используют для изучения строения вирусов,

бактерий и отдельных макромолекул в научных целях.

2. Техника приготовления и окрашивания бактериологического

препарата. Принцип простого и сложного методов окраски.

Этапы приготовления мазка:

1.Собственно приготовление мазка.

2.Высушивание.

3.Фиксация.

4.Окрашивание.

1.Собственно приготовление мазка:

из культуры бактерий, выращенной в жидкой питательной среде:

-обезжирить предметное стекло;

-нанести на стекло с помощью бактериологической петли каплю куль-

туры и распределить ее параллельными движениями;

из культуры бактерий, выращенной на плотной питательной среде:

-на обезжиренное стекло нанести каплю физиологического раствора, за-

тем внести в эту каплю петлей небольшое количество культуры бактерий с

плотной питательной среды и распределить параллельными движениями.

29

2.Высушивание мазка на воздухе или высоко над пламенем спиртовки (в

струе теплого воздуха).

3.Фиксация мазка:

жаром, в пламени спиртовки – при изучении формы и расположения бак-

терий и дифференциации их при окраске сложным методом;

химическим методом – при изучении нативных (сохранивших естествен-

ную структуру) препаратов от больного (кровь, ликвор, гной и т.д.). В каче-

стве химических фиксаторов чаще используют этиловый и метиловый спирт,

а также смесь Никифорова (смесь этилового спирта и эфира в соотношении

1:1).

Цель фиксации:

-убить микроорганизмы;

-прикрепить их к предметному стеклу;

-улучшить их прокрашивание.

4.Окрашивание мазка простым и сложным методом.

Простой метод окраски позволяет изучать форму, размеры и взаимо-

расположение бактерий. Для окраски используют только один краситель,

чаще фуксин Пфейффера или метиленовый синий.

Принципиальный рецепт простого водно-спиртового красителя:

1 часть красителя + 10 частей 96о этилового спирта + 100 частей дистиллированной воды

Для сложных методов окраски используют более одного красителя.

Назначение сложных методов:

а) дифференцировать микроорганизмы – на грамположительные и гра-

мотрицательные (окраска по Граму), на кислотоустойчивые и кислотоподат-

ливые (окраска по Цилю-Нильсену);

б) определять отдельные структуры клеток – капсулу окраской по Бур-

ри-Гинсу, включения волютина окраской по Нейссеру и т.д.

30