ФиÐиоÐогиÑ_и_ÑкоÐогиÑ_микÑооÑганиÐмов

Рисунок 4 – Питательные среды по консистенции и формам розлива (а – плотная среда (МПА) в чашке Петри; б – столбик полужидкого МПА; в – жидкая среда (МПБ); г –скошенный МПА.

По составу (рис. 5):

•простые (МПА, МПБ);

•сложные (кровяной агар, сывороточный агар и др.).

а б

Рисунок 5 – Сложные питательные среды (а – кровяной агар; б – сыворо-

точный агар).

11

По назначению питательные среды классифицируют на транспортные,

элективные (селективные), дифференциально-диагностические, специальные,

накопительные:

•транспортные – для первичного посева и транспортировки исследуемого материала в лабораторию: среда Стюарта (рис. 6);

Рисунок 6 – Транспортные питательные среды

•элективные (селективные) – среды для избирательного культивирования бактерий определенного вида (1% пептонная вода и щелочной агар для хо-

лерных вибрионов, среда Плоскирева – для возбудителей брюшного тифа и дизентерии);

•дифференциально-диагностические – для дифференциации отдельных видов бактерий по ферментативным свойствам. Например: среда Эндо (рис.

7) позволяет дифференцировать кишечные палочки от возбудителей брюш-

ного тифа и дизентерии.

Состав и механизм работы среды Эндо.

Состав: МПА + 1% лактозы + индикатор (фуксин, обесцвеченный сульфи-

том натрия).

Дифференциация кишечных бактерий основана на различиях в способно-

сти расщеплять лактозу. Кишечные палочки расщепляют лактозу до кислоты,

которая нейтрализует сульфит натрия. В результате фуксин из связанного со-

12

стояния переходит в свободное. Колонии кишечных палочек окрашиваются в красный цвет (лактозопозитивные). Возбудители брюшного тифа и дизенте-

рии не расщепляют лактозу, поэтому дают на среде Эндо бесцветные (лакто-

зонегативные) колонии.

1

Рисунок 7 – Дифференциально диагностическая среда Эндо (а – среда Эн-

до; б – колонии энтеробактерий на среде Эндо: 1 – лактозопозитивные; 2 – лак-

тозонегативные

•специальные – для выделения и культивирования бактерий, не растущих на простых средах (сывороточный агар, кровяной агар, среды для анаэро-

бов);

Кроме того, на специальных средах определяют некоторые свойства бак-

терий, например, на кровяном агаре – способность стафилококков и стрепто-

кокков лизировать эритроциты (гемолитическая активность) (рис. 8).

Рисунок 8 – Рост стафилококков на кровяном агаре: а – с гемолизом; б –

без гемолиза.

13

•накопительные – для накопления возбудителя при его низкой концентра-

ции в материале от больного (селенитовая среда – для возбудителей дизен-

терии).

4. Дыхание бактерий. Классификация бактерий по типу дыха-

ния.

При микробиологическом исследовании, кроме питательных потребностей бактерий, необходимо учитывать их потребность в доступе кислорода.

Сущность дыхания у микроорганизмов – получение энергии, образующей-

ся в процессе прямого биологического окисления веществ кислородом или пу-

тем ферментативного метаболизма. Накопление энергии происходит в мезосо-

мах.

В соответствии с потребностями в кислороде бактерии классифици-

руют на облигатные аэробы, облигатные анаэробы, факультативные анаэробы,

микроаэрофилы.

Облигатные (строгие) аэробы – микроорганизмы, которые растут и раз-

множаются только в присутствии кислорода. Например: Vibrio cholerae, Pseu-

domonas aeruginosa.

Облигатные анаэробы – микроорганизмы, которые растут и размно-

жаются только в отсутствии кислорода. Например: Clostridium botulinum, Clos-

tridium tetani, Bacteroides fragilis.

Факультативные анаэробы – микроорганизмы, которые могут расти и размножаться как в присутствии кислорода, так и в бескислородных условиях.

Например: Escherichia coli, Salmonella typhi, Staphylococcus aureus.

Микроаэрофильные бактерии – микроорганизмы, которые растут и раз-

множаются при повышенном содержании СО2 и низком содержании О2.

Например: Helicobacter pylori, Campylobacter coli.

14

5.Бактериологический метод диагностики инфекционных забо-

леваний, его цель и этапы. Способы создания анаэробных и

микроаэрофильных условий.

Основным методом диагностики инфекционных заболеваний является

бактериологический. Цель метода – выделение и идентификация (определе-

ние вида) возбудителя. Метод состоит из нескольких этапов и заключается в

посеве исследуемого материала (кровь, моча, фекалии, мокрота, мазок со сли-

зистой оболочки ротоглотки и носа и др.) на искусственные питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя. Затем проводят его идентифика-

цию по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим,

антигенным и др. признакам, а также определяют чувствительность к антимик-

робным препаратам.

Этапы бактериологического исследования.

I этап. Посев исследуемого материала на пластинчатый агар с целью полу-

чения изолированных колоний микроорганизмов (рис. 9). На плотной среде происходит механическое разобщение отдельных микробных клеток друг от друга.

чашка Петри с плотной питательной средой

бактериологическая петля

Рисунок 9 – Посев исследуемого материала на пластинчатый агар с целью получения изолированных колоний микроорганизмов

15

Посев производят бактериологической петлей секторами. Посевы культи-

вируют при t 370 С в термостате (24 часа) – для аэробных бактерий и в анаэро-

стате (48-72 часа) – для анаэробных бактерий. Размножение изолированных ко-

лоний дает потомство (колонию) одного вида, т.е. чистую культуру микробов.

II этап. Изучение выросших колоний (рис. 10) и выделение чистой культу-

ры с целью накопления биомассы одного вида микроорганизмов.

Рисунок 10 – Изолированные колоний микроорганизмов

III этап. Определение биохимических (рис. 11), антигенных, патогенных и других свойств выделенной культуры с целью идентификации бактерий, а так-

же определение чувствительности к антимикробным препаратам.

Рисунок 11 – Планшет полимерный с мультимикротестом для биохимиче-

ской идентификации бактерий

16

IV этап. Учет свойств бактерий, определение их видовой принадлежности,

а также чувствительности к антимикробным препаратам, выдача заключения.

Способы создания анаэробных и микроаэрофильных условий

Для выделения культуры анаэробных или микроаэрофильных бакте-

рий производят посев исследуемого материала на питательные среды с после-

дующим культивированием в анаэробных (бескислородных) или микроаэро-

фильных условиях, которые создают рядом способов:

1.Механическое удаление воздуха из анаэростата* (рис. 12) с последую-

щим заполнением газовой смесью для облигатных анаэробов – 80% N2, 10% CO2, 10% H2; для микроаэрофильных бактерий – 85% N2, 10% СО2, 5% О2.

Рисунок 12 – Анаэростат

2.Использование газогенераторных пакетов (рис. 13) с набором специаль-

ных реагентов (боргидрит натрия, винная кислота, бикарбонат натрия)

для создания бескислородной или микроаэрофильной газовой среды в анаэ-

ростате.

*Анаэростат – герметически закрываемая цилиндрическая емкость, в крышку которой вмонтированы манометр и вентиль для присоединения вакуумного насоса и внешнего источника газа.

17

Рисунок 13 – Устройство газогенераторных пакетов

3.Использование специальных полужидких питательных сред в пробир-

ках для выделения анаэробных бактерий без использования анаэростата.

Агар препятствует проникновению в среду кислорода. Перед посевом среду расплавляют и кипятят для удаления растворенного кислорода. Например:

среда Вильсона-Блера для выделения клостридий (рис. 14).

Рисунок 14 – Среда Вильсона-Блера (железо-сульфитный агар) содержит хлорид железа, сернисто-кислый натрий, глюкозу. Анаэробы образуют черные колонии за счет образования сернистого железа (вещество черного цвета).

18

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Выделение чистой культуры аэробов.

I этап исследования. Посев смеси бактерий (S. aureus+E. coli) на пла-

стинчатый МПА в чашке Петри петлей секторами.

Этапы посева:

а) на дне чашки Петри с МПА маркером по стеклу поставить дату исследо-

вания;

б) прокалить петлю, над спиртовкой открыть пробирку, обжечь ее края,

внести петлю в пробирку и остудить ее о стенки пробирки. Забрать пет-

лей исследуемый материал. Закрыть пробирку над спиртовкой и поста-

вить в штатив;

в) взять чашку Петри, приоткрыть крышку и нанести петлей секторами ис-

следуемый материал на МПА, закрыть чашку, прожечь петлю;

г) посевы поставить в термостат при температуре 37°С на 24 часа.

19

Занятие №2

Тема. Рост и размножение бактерий. Выделение чистой культуры аэробов.

Влияние физических и химических факторов на микроорганизмы. Методы сте-

рилизации. Дезинфекция. Асептика. Антисептика.

Цель занятия. Изучить рост и размножение бактерий, действие физических и химических факторов на микроорганизмы, методы стерилизации, дезинфекции и антисептики. Изучить второй этап бактериологического исследования по выделению чистой культуры аэробов.

I.Теоретические знания:

1.Рост и размножение бактерий.

2.Характеристика роста бактериальной популяции на плотных и жидких пита-

тельных средах.

3.Фазы развития бактериальной популяции в жидкой питательной среде.

4.Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы. Механизмы по-

вреждающего действия физических факторов, практическое применение.

5.Стерилизация, методы, режимы, применение.

6.Дезинфекция или обеззараживание. Виды дезинфекции. Вещества, исполь-

зуемые для дезинфекции.

7.Асептика. Антисептика. Вещества, используемые для антисептики.

II.Практические навыки и знания:

1.Изучить схему проведения II этапа бактериологического исследования по выделению чистой культуры аэробов.

2.Действия медицинского работника при аварийных ситуациях (угроза зара-

жения ВИЧ).

20