Методички для студентов / пособие ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ 2021

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

Темы практических работ:

1.Определение времени свертывания крови.

2.Определение групп крови с помощью стандартных сывороток.

3.Определение групп крови с помощью цоликлонов.

4.Определение индивидуальной совместимости крови по системе АВ0.

Работа 1. Определение времени свертывания крови.

Принцип метода: Метод определения времени свертывание крови in vitro является одним из широко применяемых в клинической практике.

Однако позволяет выявить лишь грубый дефицит факторов свертывания

(фибриногена, антигемофильных глобулинов, протромбина). Время свертывания крови зависит от используемого способа определения, поэтому

врезультате всегда необходимо указывать название метода.

I. Определение времени свертывания крови по Сухареву.

Оснащение: сухой капилляр Панченкова, секундомер.

Ход работы: уколите палец. Первую каплю удалите. В капилляр Панченкова наберите 25 мм крови. Включите секундомер. Путем наклона капилляра на 45о переведите взятую кровь на его середину. Затем каждые 30

секунд наклоняйте капилляр на 45о сначала в одну сторону, затем возвращайте капилляр в горизонтальное положение и через 30 секунд вновь наклоняйте его, но уже в другую сторону. Отметьте момент замедления движения крови или появления на стенке капилляра микросгустков.

Окончание процесса кровотечения регистрируйте в момент полного прекращения движения крови.

В норме начало свертывания 0,5-2 минуты, конец -3-5 минут.

61

II. Определение скорости свертывания крови по Альтгаузену.

Оснащение: часовое стекло, секундомер, скарификатор.

Ход работы: чистое и сухое часовое стекло согрейте на ладони до температуры тела. Нанесите на стекло 2-3 капли капиллярной крови.

Включите секундомер. Через каждые 30 секунд проводите через кровь скарификатором до тех пор, пока не потянется первая нить фибрина.

Зафиксируйте время (в норме время свертывания 5-6 минут).

Оформление результатов работы: полученные результаты определения времени свертывания крови по обеим методикам занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой.

Работа 2. Определение групп крови по системе АВ0 с помощью стандартных сывороток.

Принцип метода: При одновременном нахождении в капле крови одноименных агглютиногенов и агглютининов (А и α), (В и β), а также антигена D и антител к нему между ними происходит реакция агглютинации

(рис. 14), выражающаяся в склеивании эритроцитов и образовании осадка из их конгломератов (капля состоит из комочков красного цвета, разделенных прозрачной смесью плазмы и стандартной сыворотки). При отсутствии агглютинации, капля остается равномерно окрашенной. После смешивания реакция агглютинации наступает через 1-5 минут.

Для определения групп крови используют стандартные сыворотки,

содержащие определенный титр соответствующих агглютининов.

Оснащение: предметные стекла, вата, стандартные сыворотки крови групп αβ (I), β (II) и α (III).

62

Таблица 5. Интерпретация результатов определения группы крови системы АВ0

с использованием стандартных сывороток.

Примечание: знаком «+» обозначено наличие агглютинации, знаком «-» - отсутствие агглютинации.

Оформление результатов работы: опишите полученные результаты в тетради протоколов опытов. Рекомендуется сделать цветной рисунок,

демонстрирующий агглютинацию эритроцитов в разных каплях сыворотки.

Определите групповую принадлежность исследуемой крови и сделайте вывод, отразив значение определения группы крови для клиники.

Работа 3. Определение групп крови с помощью цоликлонов.

Принцип метода: цоликлоны анти-А, анти-В и анти-D предназначены для определения группы крови человека по системе АВ0 и резус-системы вместо стандартных гемагглютинирующих сывороток. В отличие от сывороток, в цоликлонах наблюдается высокий титр антител. Эти моноклональные антитела к антигенам А, В и D продуцируются специальными встроенными в организм мышей гибридомами. Они принадлежат к иммуноглобулинам класса М и обладают высочайшей специфичностью. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител.

Время наступления реакции агглютинации и ее выраженность у цоликлонов выше, чем у гемагглютинирующих сывороток.

64

Определение групп крови по системе АВ0.

Оснащение: цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ; пластина или планшет, пипетки, стеклянные палочки.

Ход работы: нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле

(0,1 мл) под соответствующими надписями. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле (0,01 – 0,03 мл) исследуемой крови,

смешайте кровь с реагентом. Наблюдайте за ходом реакции при периодическом покачивании пластины в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-6 секунд, однако наблюдение следует вести 3 минуты. Планшет после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 секунд, для образования более полной крупнолепестковой агглютинации.

Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами для определения группы крови системы АВ0 представлена в таблице 6.

Таблица 6. Интерпретация результатов определения группы крови системы АВ0 с

использованием цоликлонов

Примечание: знаком «+» обозначено наличие агглютинации, знаком «-» - отсутствие агглютинации.

Определение резус-принадлежности.

Оснащение: цоликлоны анти-D, пластина или планшет, пипетки,

стеклянные палочки.

65

Ход работы: на пластину или планшет нанесите большую каплю

(около 0,1 мл) цоликлона анти-D, рядом поместите маленькую каплю (0,01-

0,05 мл) исследуемой крови смешайте стеклянной палочкой. Реакция агглютинации начинается через 10-15 секунд, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 секунд. (Для сокращения времени начала реакции планшет можно предварительно подогреть до 3740о С.)

Результаты реакции учитывайте через 3 минуты.

Оформление результатов работы: опишите полученные результаты в тетради протоколов опытов. Рекомендуется сделать цветной рисунок,

демонстрирующий агглютинацию эритроцитов в каплях разных цоликлонов.

Определите групповую принадлежность исследуемой крови и сделайте вывод, отразив значение определения группы крови системы АВ0 и резус-

системы для клиники.

Работа 4. Определение индивидуальной совместимости крови по

системе АВ0.

Гемотратсфузия – это серьезная операция по транплантации живой ткани человека. Перед переливанием крови помимо определения групповой и резус-принадлежности крови донора и реципиента определяют еще и их индивидуальную совместимость.

Оснащение: микроцентрифуга с пробирками, предметное стекло, две глазные пипетки, стеклянная палочка, 5% раствор цитрата натрия,

изотонический раствор хлорида натрия.

Ход работы: кровь реципиента в количестве 1-2 мл поместите в центрифужную пробирку, добавьте одну каплю 5% цитрата натрия и центрифугируйте 10-15 минут, для отделения плазмы от форменных элементов.

На предметное стекло поместите каплю плазмы реципиента, а рядом каплю крови донора в соотношении 10:1. Перемешайте капли стеклянной

66

палочкой в течение 5 минут, после чего добавьте каплю изотонического

раствора хлорида натрия.

Оформление результатов работы: опишите полученные результаты в тетради протоколов опытов. Сделайте вывод о совместимости или несовместимости крови донора и реципиента и возможности переливания крови.

67

VI. ОЦЕНОЧНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

Контрольные вопросы для самоподготовки к итоговому занятию по разделу «Физиология крови»

1.Понятие о системе крови. Основные функции крови. Состав и количество крови человека.

2.Плазма и ее состав. Гематокрит. Основные физиологические константы крови и основные механизмы их регуляции. Осмотическое и онкотическое давление. Функциональные системы, обеспечивающие постоянство осмотического давления и кислотно-основного состояния крови.

3.Эритроциты, строение, количество, методики подсчета, функции.

4.Лейкоциты, их виды, количество, методики подсчета, понятие о лейкоцитозе и лейкопении. Лейкоцитарная формула. Понятие об индексе сдвига. Функция различных видов лейкоцитов. Физиологический лейкоцитоз, условия и механизмы его развития.

5.Нервная и гуморальная регуляция эритропоэза и лейкопоэза.

6.Иммунитет. Клеточный и гуморальный иммунитет.

7.Гемоглобин, строение, свойства, количество в крови. Физиологические разновидности гемоглобина. Соединения гемоглобина с газами. Цветовой показатель крови, его определение.

8.Гемолиз, виды гемолиза, механизм происхождения. Понятие об аутогемолизе.

9.Осмотическая резистентность эритроцитов, ее границы.

10.Скорость оседания эритроцитов (СОЭ), механизм, факторы, влияющие на СОЭ.

11.Группы крови (система АВ0, резус-принадлежность, другие системы).

Правила переливания крови. Кровезаменяющие растворы.

12.Наследование групп крови.

13.Тромбоциты, их строение, количество, функции.

14.Процесс свертывания крови (А.А. Шмидт) и его значение.

68

15.Современные представления об основных факторах, участвующих в свертывании крови (тканевые, плазменные, тромбоцитарные,

эритроцитарные, лейкоцитарные).

16.Фазы свертывания крови.

17.Фибринолиз, этапы фибринолиза.

18.Свертывающая, противосвертывающая и фибринолитическая системы крови как главные аппараты функциональной системы поддержания ее жидкого состояния.

19.Факторы, ускоряющие и замедляющие свертывание крови. Регуляция гемостаза.

Тестовые задания

Для оценки сформированности компетенци (УК-1) предлагаются следующие тестовые задания:

Выберите один правильный ответ

1. ОБЪЕМНОЕ СООТНОШЕНИЕ ПЛАЗМЫ И ФОРМЕНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ КРОВИ СОСТАВЛЯЕТ

1.плазма-55-60%, форменные элементы - 40-45%

2.плазма- 40-45%, форменные элементы - 55-60%

2. ВЕЛИЧИНА ОСМОТИЧЕСКОГО ДАВЛЕНИЯ КРОВИ СОСТАВЛЯЕТ

1.6,6 атм

2.8,6 атм

3.25 - 30 мм рт. ст.

4.7,6 атм

3.РАЗЛИЧАЮТ СЛЕДУЮЩИЕ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ РАЗНОВИДНОСТИ ГЕМОГЛОБИНА

1.примитивный, фетальный, взрослый

2.метгемоглобин, оксигемоглобин, карбоксигемоглобин

69

4.МЕТГЕМОГЛОБИН - ЭТО

1.соединение гемоглобина с кислородом

2.окисленный гемоглобин, образующийся при действии сильных

окислителей 3.соединение гемоглобина с угарным газом

4.соединение гемоглобина с углекислым газом

5.МЕХАНИЧЕСКИЙ ГЕМОЛИЗ ПРОИСХОДИТ

1.под влиянием веществ, разрушающих белково-липидную оболочку эритроцитов

2.при переливании несовместимой группы крови

3.при замораживании и оттаивании крови

4.при сильном встряхивании крови

6.СОДЕРЖАТСЯ В ПЛАЗМЕ КРОВИ

1.агглютиногены

2.агглютинины

7.ВТОРИЧНЫЙ ГЕМОСТАЗ ОБЕСПЕЧИВАЕТ СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ В

1.микроциркуляторных сосудах с низким кровяным давлением

2.крупных сосудах с высоким кровяным давлением

8.ПЕРВИЧНЫЙ ГЕМОСТАЗ ОБЕСПЕЧИВАЕТ СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ В

1.микроциркуляторных сосудах с низким кровяным давлением

2.крупных сосудах с высоким кровяным давлением

Для оценки сформированности компетенций (ОПК-4) предлагаются следующие тестовые задания:

Выберите один правильный ответ

1.РН АРТЕРИАЛЬНОЙ КРОВИ В НОРМЕ СООТВЕТСТВУЕТ

1.7,4

2.7,36

3.7,6

70