Методички для студентов / пособие ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ 2021

превращаются в неподвижные клетки – гистиоциты или тканевые макрофаги. Продолжительность жизни макрофагов в тканях до 3-х недель.

Моноциты - это крупные клетки диаметром 12-20 мкм. Для них характерно максимальное содержание лизосом, наличие множества выростов на мембране, содержащей рецепторы для лимфокинов и др. веществ.

Моноциты – важнейшие клеточные факторы неспецифической резистентности (устойчивости) организма в связи с наличием у них фагоцитарной и бактерицидной активности.

Функции моноцитов:

1.фагоцитарная защита против микробной инфекции;

2.токсический эффект метаболитов макрофагов на паразитов человека;

3.участие в иммунном ответе организма и воспалении;

4.регенерация тканей и противоопухолевая защита;

5.регуляция гемопоэза;

6.фагоцитоз старых и поврежденных клеток крови.

Гистиоциты образуют отграничивающий вал вокруг инородных тел,

которые не могут быть разрушены ферментами. Этих клеток всегда много в лимфоузлах, печени, селезенке и костном мозге. Причем, максимальная фагоцитарная активность проявляется у макрофагов в кислой среде, в

которой нейтрофилы теряют свою активность.

Лимфоциты.

Лимфоциты представляют центральное звено иммунной системы организма. Они отвечают за формирование специфического иммунитета и осуществляют функцию иммунного надзора в организме, обеспечивая защиту от всего чужеродного и сохраняя генетическое постоянство внутренней среды. Лимфоциты обладают способностью различать в организме «свое» и «чужое» вследствие наличия в их оболочке специфических участков-рецепторов, активирующихся при контакте с чужеродными белками. Лимфоциты осуществляют синтез защитных антител,

21

лизис чужеродных клеток, обеспечивают реакцию отторжения трансплантата, иммунную память, уничтожение собственных мутантных клеток и другое.

Все лимфоциты делятся на три группы:

1.Т-лимфоциты (тимусзависимые);

2.В-лимфоциты (бурсазависимые);

3.0-лимфоциты (нулевые).

Т-лимфоциты. В период внутриутробного развития и на протяжении всей жизни предшественники Т-клеток проникают из костного мозга в тимус,

где в результате контакта с его стромой и под действием гормонов,

вырабатываемых в нем, проходят «обучение». Таким образом, незрелые Т-

клетки в тимусе приобретают способность отличать чужеродное начало, а в периферических лимфоидных тканях первыми опознают антигены. Т-

лимфоциты составляют 70-80% всех лимфоцитов крови.

Среди Т-лимфоцитов различают:

•Т-хелперы – стимулируют дифференцировку В-лимфоцитов,

осуществляя реакции гиперчувствительности замедленного типа при многих инфекционных заболеваниях.

•Т-киллеры – осуществляют иммунный лизис чужеродных клеток. Они также участвуют в отторжении трансплантата.

•Т-супрессоры – подавляют иммунный ответ на антигены, а также предотвращают развитие аутоиммунных реакций, подавляя клоны лимфоцитов, способных реагировать на собственные антигены организма.

•Т-клетки иммунной памяти – хранят информацию о всех антигенных воздействиях, обеспечивая возникновение иммунного ответа в случае повторного контакта организма с данным антигеном.

Т-лимфоциты обеспечивают реакции клеточного иммунитета.

22

В-лимфоциты образуются в костном мозге, а дифференцировку проходят в лимфоидной ткани кишечника, аппендикса, небных и глоточной миндалин. В крови на их долю приходится 10-20% циркулирующих лимфоцитов. Основная функция В-лимфоцитов – создание гуморального иммунитета путем выработки антител, причем каждая лимфоидная клетка способна продуцировать антитела одной специфичности.

Нулевые лимфоциты не проходят дифференцировки в органах иммунной системы, но при необходимости способны превратиться в В- или Т-лимфоциты. На их долю приходится 5-10% лимфоцитов крови.

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ ЗНАНИЙ

1.Понятие о системе крови. Основные функции крови. Состав и количество крови человека. Гематокрит.

2.Плазма и ее состав. Основные физиологические константы крови и основные механизмы их регуляции. Осмотическое и онкотическое давление и основные механизмы их регуляции, функциональные системы, обеспечивающие постоянство онкотического, осмотического давления и кислотно-основного состояния крови.

3.Лейкоциты, их виды, количество, методики подсчета, понятие о лейкоцитозе и лейкопении. Лейкоцитарная формула. Понятие об индексе сдвига. Функция различных видов лейкоцитов.

Физиологический лейкоцитоз, условия и механизмы его развития.

4.Нервная и гуморальная регуляция лейкопоэза.

5.Иммунитет. Клеточный и гуморальный иммунитет.

23

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

Темы практических работ:

1.Определение гематокрита.

2.Определение показателей крови с помощью гематологического анализатора.

3.Подсчет лейкоцитарной формулы.

Работа 1. Определение гематокрита.

Гематокрит – процентное соотношение между объемом плазмы и объемом форменных элементов в крови.

В норме гематокрит составляет у женщин 36-42 (36-42%), у мужчин

40-48 (40-48%). Изменение гематокрита в основном наблюдается при нарушении количества самой большой популяции форменных элементов крови – эритроцитов: он увеличивается при эритроцитозе и уменьшается при эритропении или микроцитозе.

Оснащение: гематокритная микроцентрифуга, гематокритная трубка.

Ход работы: гематокритную трубку, предварительно гепаринизированную и высушенную, заполняют кровью до метки «100»,

закрывают резиновым колпачком и центрифугируют. По высоте столбика эритроцитов в градуированной трубке определяют гематокрит.

Оформление результатов работы: полученные результаты определения гематокрита занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой.

24

Работа 2. Определение показателей крови с помощью гематологического анализатора.

Преаналитический этап гематологических исследований. Взятие крови.

На данный этап приходится до 70% лабораторных ошибок, что может приводить к неверным или неточным результатам анализов и,

следовательно, к постановке ошибочного диагноза. В этот этап включены:

взятие пробы крови, при необходимости ее транспортировка и хранение,

использование качественных реактивов, а также факторы, связанные с пациентом (соблюдение правил подготовки к забору крови для анализа).

Устройство гематологических приборов не терпит посторонних механических частиц и биологических фрагментов, что сказывается не только на точности и правильности результатов гематологических приборов, но и на их эксплуатации в целом.

Кровь следует брать натощак (после примерно 12 часов голодания,

воздержания от приема алкоголя и курения), между 7 и 9 часами утра, при минимальной физической активности непосредственно перед взятием (в

течение 20-30 мин.), в положении пациента лежа или сидя.

Венозная кровь считается лучшим материалом для клинического исследования крови. Для дезинфекции места венопункции рекомендуется использование безворсовых салфеток, смоченных 70% спиртом. Для предохранения от формирования микросгустков и гемолиза кровь следует собирать непосредственно в пробирку, содержащую антикоагулянт

(предпочтителен антикоагулянт ЭДТА). Для кратковременного хранения и перемешивания проб крови рекомендуется использование шейкеров или других роторных механизмов, препятствующих образованию микросгутков.

Аналитический этап. Аппаратура, используемая для подсчета

форменных элементов.

25

Кпреимуществам гематологических анализаторов относят:

1)высокая производительность (до 100-120 проб в час),

2)небольшой объем крови для анализа (12-150 мкл),

3)анализ большого количества (десятки тысяч) клеток,

4)высокая точность и воспроизводимость,

5)оценка 18-30 и более параметров одновременно,

6)графическое представление результатов исследований в виде гистограмм или скатерограмм.

По степени сложности (по используемым методам) и по количеству определяемых показателей (в основном из-за способности дифференцировать лейкоциты) их разделяют на 3 основных класса.

I класс. Анализаторы определяют 18-20 параметров, включая расчетные показатели эритроцитов и тромбоцитов, гистограммы распределения лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов по объему.

Лейкоциты частично дифференцируют на 3 популяции - лимфоциты,

гранулоциты и средние клетки (представлены в основном моноцитами) (рис.

6).

27

омического сопротивления, что вызывает появление электрического

импульса, количество и характер которого регистрируется прибором (рис. 7).

Рисунок. 7. Апертуро-импедансный метод Д.Калтера. Ведется подсчет числа и определение характера импульсов, возникающих при прохождении клеток через микроотверстие, по обе стороны которого расположены электроды.

Дифференцировка лейкоцитов кондуктометрическим методом на основные субпопуляции невозможна из-за близости их объемов. Для их разделения используются гемолитики, благодаря которым различные виды лейкоцитов изменяют свои размеры в разной степени (в зависимости от объема цитоплазмы, величины и формы ядра, присутствия гранул). На образующейся лейкограмме лимфоциты образуют зону малых объемов (35-

90 фл), гранулоциты (нейтрофилы, базофилы и эозинофилы) - область больших объемов (120-400 фл). Между двумя пиками имеется зона так называемых "средних лейкоцитов" (90-120 фл), которую формируют моноциты.

II класс. Приборы проводят развернутый анализ крови с полной дифференцировкой лейкоцитов по 5 параметрам (нейтрофилы, эозинофилы,

базофилы, моноциты и лимфоциты). Кроме того, предоставляют не только гистограммы распределения эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов по объему, но и скатерограммы (рис.8 ).

29

Рисунок .8. Скатерограмма.

Гематологические анализаторы III класса выполняют развернутый анализ крови с полной дифференцировкой лейкоцитов, а также подсчет и анализ ретикулоцитов. Кроме того, определяют редкие для периферической крови клетки (атипичные и большие клетки, ядросодержащие эритроциты и т.д.). Это сложные аналитические системы, которые могут доукомплектовываться дополнительным блоком для автоматического приготовления и окраски мазков из заданных образцов крови.

Анализаторы II и III-го классов это высокотехнологические гематологические анализаторы, в работе которых используют комбинации разных методов. Эти приборы способны осуществлять классическую дифференцировку лейкоцитов на 5 видов (нейтрофилы, эозинофилы,

базофилы, моноциты и лимфоциты), а также обнаруживать активированные лимфоциты, незрелые гранулоциты, бласты, эритробласты. Многочисленные их функции основаны на использовании новых технологий, значительно отличающихся у разных фирм-производителей.

Так, для дифференцировки лейкоцитов по 5-ти (5Diff) основным популяциям может использоваться цитофлюориметрическая техника;

трехмерный анализ (VCS-технология), включающий компьютерный анализ клеток одновременно по объему (Volume), электропроводности (Conductivity)

и дисперсии лазерного света (Scatter). Результаты дополнительно отображаются в виде лейкоцитарной скатерограммы, на которой каждый тип клеток имеет свою зону расположения. Также применяется технология

30