Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
ПОСОБИЕ Микробиологические методы.pdf
Скачиваний:
0
Добавлен:
13.02.2026
Размер:
2.22 Mб
Скачать

ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Кафедра микробиологии, вирусологии

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

по дисциплине «Микробиология, вирусология»

УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ

Уфа – 2018

1

УДК 579 .083.1(075.8)

ББК 52.64

М 59

Рецензенты: Телешева Л.Ф.,проректор по научной работе, профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГБОУ ВПО «Южно-

Уральский государственный медицинский университет» МЗ РФ, д.м.н.:

Чайникова И.Н, ведущий научный сотрудник Лаборатории биомониторинга и молекулярно-генетических исследований ФГБУН Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН, д.м.н., профессор.

М59«Микробиологические методы»: учебное пособие /соавт.: Г.К.

Давлетшина,М.М. Туйгунов, Ю.З. Габидуллин, А.А. Ахтариева, А.К.

Булгаков, Т.А. Савченко, - Уфа:изд-во ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава РФ,

2018. - 119с.

Учебное пособие подготовлено на основании рабочей программы по дисциплине «Микробиология, вирусология» (2017г.), действующего учебного плана ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава РФ (2017г.) и в соответствии с требованиями.ФГОС ВОпо направлениям подготовки: 31.05.01 - лечебное дело и 31.05.02. – педиатрия.

Издание предназначено для самостоятельной аудиторной работы студентов лечебного и педиатрического факультетов. В пособии излагаются основные практические навыки по дисциплине «Микробиология,

вирусология», приведены основные принципы и этапы постановки микробиологических методов.

Рекомендовано координационным научно-методическим советом и утверждено решением Редакционно-издательского совета ФГОС ВО БГМУ Минздрава России.

УДК 579 .083.1(075.8)

ББК 52.64

2

 

Содержание

 

Введение ...................................................................................................................

5

1.1

Основные правила поведения в бактериологической лаборатории ................

6

1.3

Правила забора материала и хранения при особо опасных инфекциях ..........

8

1.4

Оформление направления на микробиологическое исследование ..................

9

1.5. Дезинфекция в микробиологической лаборатории .......................................

10

1.6. Стерилизация лабораторной посуды, подготовка к стерилизации...............

10

2.Изучение морфологии и тинкториальных признаков микробов. .....................

11

2.1

Этапы приготовления мазка для иммерсионной микроскопии .....................

13

2.2

Овладение методикой микроскопирования с иммерсионной системой .......

14

2.3

Сложные методы окраски ................................................................................

14

2.4

Методы определения подвижности бактерий.................................................

18

3.1

Методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-

 

анаэробных бактерий .............................................................................................

22

3.2

Метод Дригальского.........................................................................................

23

3.3

Методы создания анаэробных условий...........................................................

27

3.4

Этапы выделения чистой культуры анаэробных бактерий ............................

29

3.5

Вирусологические методы ...............................................................................

31

3.6

Реакция гемагглютинации (РГА).....................................................................

32

3.7

Методы индикации бактериофагов .................................................................

33

3.8

Реакция фаголизиса..........................................................................................

34

3.9

Реакция фаготипирования S.aureus .................................................................

35

4. Идентификация микроорганизмов по генетической структуре. ...................

36

4.1

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) .............................................................

37

4.2

Метод рекомбинации .......................................................................................

39

 

 

3

5. Бактериологическая оценка качества стерилизации и определение

 

антибиотикочувствительности. .............................................................................

40

5.1

Бактериологический метод контроля эффективности стерилизации ............

41

5.2

Определение антибиотикочусвтвительности бактерий .................................

42

6. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника..........................

44

7. Определение общего микробного числа (метод Коха) и санитарно-

 

показательных микробов воздуха. ........................................................................

47

8. Билогический метод и идентификация бактерий по вирулентности. .............

48

8.1

Заражение экспериментальных животных .....................................................

51

(биологический метод)...........................................................................................

51

8.2

Методы определения факторов вирулентности микроорганизмов ...............

53

8.3

Методы определения персистентных свойств бактерий................................

55

9. Иммунологические методы диагностика инфекционных заболеваний. .........

58

9.1

Реакция агглютинации (РА) на стекле. ...........................................................

59

9.2

Развернутые реакции агглютинации Видаля, Вейгля и Райта .......................

59

9.3

РПГА – реакция пассивной гемагглютинации ...............................................

62

9.4

Реакция преципитации (РП) ............................................................................

63

9.5

Реакция нейтрализации токсина антитоксином (РН) на мышах ...................

64

9.6

Реакция нейтрализации вирусов (РН) на мышах...........................................

65

9.7

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) .............................................

66

9.8

Реакции связывания комплемента (РСК) .......................................................

66

9.10 Реакции непрямой иммунофлюоресценции (РИФ) ......................................

70

9.11 Иммуноферментный анализ (ИФА) ..............................................................

71

9.12 Диагностика ВИЧ-инфекции с помощью реакции иммуноблоттинга .......

74

Список использованной литературы.....................................................................

86

Основная литература..............................................................................................

86

Дополнительная литература ..................................................................................

86

4

Введение

Микробиология, вирусология находится на стыке фундаментальных и теоретических дисциплин. Полученные при изучении дисциплины теоретические знания и практические умения позволят обучающимся воспользоваться результатами микробиологических исследований для подтверждения клинического диагноза на старших курсах и проведения лечения с учетом антибиотикочувствительности.

Цель учебного пособия – освоение студентами практических навыков по микробиологической диагностике.

В результате изучения дисциплины обучающиеся должны

знатьследующих основных методов микробиологической диагностики:

микроскопический, биологический, бактериологический, иммунологический,

аллергический и молекулярно-биологический.

Обучающиеся должны уметь:

-соблюдать технику безопасности;

-выполнить микробиологические исследования.

В пособии изложены практические навыки, ориентированые на конечную цель подготовки врачей в соответствии с квалификационными характеристиками.

Приобретение практических навыков способствует формированию у обучающихся общекультурных (ОК) и профессиональных (ПК)

компетенций:

- готовность к саморазвитию, самореализации, самообразованию,

использованию творческого потенциала (ОК-1) ; - готовность решать стандартные задачи профессиональной

деятельности с использованием информации, медико-биологической терминологии (ОПК-1) ;

5

- способность выявлять у пациентов основные патологические

симптомы и синдромы заболеваний (ПК-6).

1.Соблюдение правил противоэпидемического режима

Бактериологическиелабораторииприлечебно-

профилактическихучрежденияхвыполняютанализы,

необходимыедляпостановки и уточнениядиагнозаинфекционногозаболевания,

способствуяправильномувыборуспецифическоголечения.

Предметом для исследования являются выделения из организма человека,

трупный материал и объекты внешней среды.

В соответствии с рекомендациями ВОЗ патогенные микроорганизмы разделены на 4 группы по степени биологической опасности для сотрудников

лабораторий и окружающего населения:

-I - возбудители особо опасных инфекций (чумы, оспы, желтой

лихорадки);

-II – возбудители высококонтагиозных эпидемических заболеваний

(сибирской язвы, бруцеллеза, сыпного тифа);

-III – возбудители инфекционных болезней, выделяемые в

самостоятельные нозологические группы ( брюшного тифа, шигеллезов);

-IV– условно-патогенные микробы,

возбудители оппортунистических

инфекций.

 

Нумерация групп микробов, принятая в России, отличается обратным

порядком от классификации ВОЗ, где к

I группе относят микроорганизмов

самой низкой патогенности, а к IV - особо опасные. По номенклатуре ВОЗ выделяют три категории лабораторий:

-базовые (основные или общего типа);

-режимные (изолированные);

-лаборатории особого режима (максимально изолированные).

1.1Основные правила поведения в бактериологической лаборатории

1.В помещении лаборатории нельзя входить без специальной одежды:

халата, сменной обуви.

6

2.В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, запрещается курить и приносить пищу.

3.При распаковывании заразного материала необходимо соблюдать осторожность: пробирки снаружи обтирать дезинфицирующим раствором;

переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, содержащим дезинфицирующий раствор.

4.Если разбилась посуда, содержащая заразный материал (пробирки,

чашка Петри и др.), немедленно производится обеззараживание предметов,

одежды, стола и помещения.

5.После окончания работы дезинфицируют руки и поверхность рабочего стола.

6.Музейные культуры микробов ставят на хранение в холодильник,

закрывают и опечатывают

7.Работники лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, с возбудителями которых они работают. На кафедре микробиологии используются материалы, содержащие возбудителей

III-IV групп, после разрешения председателя режимной комиссии Республиканской СЭС.

1.2 Правила забора материала для микробиологических

исследований

При заборе и работе с клиническим материалом персонал должен использовать перчатки и халат. При этом необходимо соблюдать ряд правил.

1)Забор исследуемого материала следует провести до начала антибактериальной терапии или через 8-10 часов после приема последней дозы антибиотика. Необходимо соблюдать строжайшую асептику.

Используют стерильный материал: а) ватные тампоны для взятия материала из раны, со слизистых оболочек (глаз, зева, носа); проволочную петлю для взятия материала из влагалища, анального отверстия; б) шприц для взятия крови, гноя; в) стерильную посуду для непосредственного сбора мочи,

мокроты, испражнений.

7

Кровь для посева следует брать из вены на высоте подъема температуры; Посев производится в жидкую элективную среду в соотношении 1:10.

Моча здорового человека стерильна. От начала взятия пробы мочи до начала исследования в лаборатории должно проходить не более 1-2 часов.

Испражнения на патогенные энтеробактерии берут ректальными петлями, смоченными консервантом, и помещают в пробирку с консервирующей средой.

Слизь из носоглотки(на дифтерию) забирают стерильным тампоном

натощак.

Спинно-мозговую жидкость получают в результате люмбальной пункции. 3-5мл ликвора помещают в пробирку (при транспортировке предохранять от охлаждения).

Мокроту собирают натощак после ополаскивания рта.

2)Транспортировку полученного материала следует проводить в максимально короткие сроки (2-3 часа) в специальных биксах или пеналах.

3)Направление прилагается к клиническому образцу в качестве сопроводительного документа (см. практические навыки 1.4).

1.3Правила забора материала и хранения при особо опасных инфекциях

Кособо опасным инфекциям (ООИ), прежде всего, относится чума.

При постановке предварительного диагноза «чума» в лаборатории проводятся срочные мероприятия:

1.Немедленно сообщают в вышестоящие органы здравоохранения. 2.На лабораторию накладывается карантин, т.е. ни один лабораторный

работник, контактировавший с заразным материалом, не должен покидать помещения лаборатории до прибытия эпидемиолога.

3.Все материалы: от больных, чистые культуры и павшие животные должны быть направлены в специализированные лаборатории для окончательного установления диагноза.

4.Меры безопасности при транспортировке.

8