- •Введение
- •1.1 Основные правила поведения в бактериологической лаборатории
- •1.3 Правила забора материала и хранения при особо опасных инфекциях
- •1.4 Оформление направления на микробиологическое исследование
- •1.5. Дезинфекция в микробиологической лаборатории
- •1.6. Стерилизация лабораторной посуды, подготовка к стерилизации
- •2.Изучение морфологии и тинкториальных признаков микробов.
- •2.1 Этапы приготовления мазка для иммерсионной микроскопии
- •2.2 Овладение методикой микроскопирования с иммерсионной системой
- •3.2 Метод Дригальского
- •3.3 Методы создания анаэробных условий
- •3.4 Этапы выделения чистой культуры анаэробных бактерий
- •3.5 Вирусологические методы
- •3.6 Реакция гемагглютинации (РГА)
- •3.7 Методы индикации бактериофагов
- •3.8 Реакция фаголизиса
- •3.9Реакция фаготипированияS.aureus
- •4. Идентификация микроорганизмов по генетической структуре.
- •4.1 Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
- •4.2 Метод рекомбинации
- •5.1Бактериологический метод контроля эффективности стерилизации
- •5.2 Определение антибиотикочусвтвительности бактерий
- •6. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника.
- •8. Билогический метод и идентификация бактерий по вирулентности.
- •8.1 Заражение экспериментальных животных
- •(биологический метод)
- •8.2 Методы определения факторов вирулентности микроорганизмов
- •8.3 Методы определения персистентных свойств бактерий
- •9. Иммунологические методы диагностика инфекционных заболеваний.
- •9.1 Реакция агглютинации (РА) на стекле.
- •9.2 Развернутые реакции агглютинации Видаля, Вейгля и Райта
- •9.3 РПГА – реакция пассивной гемагглютинации
- •9.4 Реакция преципитации (РП)
- •9.5 Реакция нейтрализации токсина антитоксином (РН) на мышах
- •9.6 Реакция нейтрализации вирусов (РН) на мышах
- •9.7 Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
- •9.8 Реакции связывания комплемента (РСК)
- •9.10 Реакции непрямой иммунофлюоресценции (РИФ)
- •9.11 Иммуноферментный анализ (ИФА)
- •Список использованной литературы
- •Основная литература
- •Дополнительная литература
ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»
МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Кафедра микробиологии, вирусологии
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
по дисциплине «Микробиология, вирусология»
УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ
Уфа – 2018
1
УДК 579 .083.1(075.8)
ББК 52.64
М 59
Рецензенты: Телешева Л.Ф.,проректор по научной работе, профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГБОУ ВПО «Южно-
Уральский государственный медицинский университет» МЗ РФ, д.м.н.:
Чайникова И.Н, ведущий научный сотрудник Лаборатории биомониторинга и молекулярно-генетических исследований ФГБУН Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН, д.м.н., профессор.
М59«Микробиологические методы»: учебное пособие /соавт.: Г.К.
Давлетшина,М.М. Туйгунов, Ю.З. Габидуллин, А.А. Ахтариева, А.К.
Булгаков, Т.А. Савченко, - Уфа:изд-во ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава РФ,
2018. - 119с.
Учебное пособие подготовлено на основании рабочей программы по дисциплине «Микробиология, вирусология» (2017г.), действующего учебного плана ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава РФ (2017г.) и в соответствии с требованиями.ФГОС ВОпо направлениям подготовки: 31.05.01 - лечебное дело и 31.05.02. – педиатрия.
Издание предназначено для самостоятельной аудиторной работы студентов лечебного и педиатрического факультетов. В пособии излагаются основные практические навыки по дисциплине «Микробиология,
вирусология», приведены основные принципы и этапы постановки микробиологических методов.
Рекомендовано координационным научно-методическим советом и утверждено решением Редакционно-издательского совета ФГОС ВО БГМУ Минздрава России.
УДК 579 .083.1(075.8)
ББК 52.64
2
|
Содержание |
|
Введение ................................................................................................................... |
5 |
|
1.1 |
Основные правила поведения в бактериологической лаборатории ................ |
6 |
1.3 |
Правила забора материала и хранения при особо опасных инфекциях .......... |
8 |
1.4 |
Оформление направления на микробиологическое исследование .................. |
9 |
1.5. Дезинфекция в микробиологической лаборатории ....................................... |
10 |
|
1.6. Стерилизация лабораторной посуды, подготовка к стерилизации............... |
10 |
|
2.Изучение морфологии и тинкториальных признаков микробов. ..................... |
11 |
|
2.1 |
Этапы приготовления мазка для иммерсионной микроскопии ..................... |
13 |
2.2 |
Овладение методикой микроскопирования с иммерсионной системой ....... |
14 |
2.3 |
Сложные методы окраски ................................................................................ |
14 |
2.4 |
Методы определения подвижности бактерий................................................. |
18 |
3.1 |
Методы выделения чистых культур аэробных и факультативно- |
|
анаэробных бактерий ............................................................................................. |
22 |
|
3.2 |
Метод Дригальского......................................................................................... |
23 |
3.3 |
Методы создания анаэробных условий........................................................... |
27 |
3.4 |
Этапы выделения чистой культуры анаэробных бактерий ............................ |
29 |
3.5 |
Вирусологические методы ............................................................................... |
31 |
3.6 |
Реакция гемагглютинации (РГА)..................................................................... |
32 |
3.7 |
Методы индикации бактериофагов ................................................................. |
33 |
3.8 |
Реакция фаголизиса.......................................................................................... |
34 |
3.9 |
Реакция фаготипирования S.aureus ................................................................. |
35 |
4. Идентификация микроорганизмов по генетической структуре. ................... |
36 |
|
4.1 |
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) ............................................................. |
37 |
4.2 |
Метод рекомбинации ....................................................................................... |
39 |
|
|
3 |
5. Бактериологическая оценка качества стерилизации и определение |
|
|
антибиотикочувствительности. ............................................................................. |
40 |
|
5.1 |
Бактериологический метод контроля эффективности стерилизации ............ |
41 |
5.2 |
Определение антибиотикочусвтвительности бактерий ................................. |
42 |
6. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника.......................... |
44 |
|
7. Определение общего микробного числа (метод Коха) и санитарно- |
|
|
показательных микробов воздуха. ........................................................................ |
47 |
|
8. Билогический метод и идентификация бактерий по вирулентности. ............. |
48 |
|
8.1 |
Заражение экспериментальных животных ..................................................... |
51 |
(биологический метод)........................................................................................... |
51 |
|
8.2 |
Методы определения факторов вирулентности микроорганизмов ............... |
53 |
8.3 |
Методы определения персистентных свойств бактерий................................ |
55 |
9. Иммунологические методы диагностика инфекционных заболеваний. ......... |
58 |
|
9.1 |
Реакция агглютинации (РА) на стекле. ........................................................... |
59 |
9.2 |
Развернутые реакции агглютинации Видаля, Вейгля и Райта ....................... |
59 |
9.3 |
РПГА – реакция пассивной гемагглютинации ............................................... |
62 |
9.4 |
Реакция преципитации (РП) ............................................................................ |
63 |
9.5 |
Реакция нейтрализации токсина антитоксином (РН) на мышах ................... |
64 |
9.6 |
Реакция нейтрализации вирусов (РН) на мышах........................................... |
65 |
9.7 |
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) ............................................. |
66 |
9.8 |
Реакции связывания комплемента (РСК) ....................................................... |
66 |
9.10 Реакции непрямой иммунофлюоресценции (РИФ) ...................................... |
70 |
|
9.11 Иммуноферментный анализ (ИФА) .............................................................. |
71 |
|
9.12 Диагностика ВИЧ-инфекции с помощью реакции иммуноблоттинга ....... |
74 |
|
Список использованной литературы..................................................................... |
86 |
|
Основная литература.............................................................................................. |
86 |
|
Дополнительная литература .................................................................................. |
86 |
|
4
Введение
Микробиология, вирусология находится на стыке фундаментальных и теоретических дисциплин. Полученные при изучении дисциплины теоретические знания и практические умения позволят обучающимся воспользоваться результатами микробиологических исследований для подтверждения клинического диагноза на старших курсах и проведения лечения с учетом антибиотикочувствительности.
Цель учебного пособия – освоение студентами практических навыков по микробиологической диагностике.
В результате изучения дисциплины обучающиеся должны
знатьследующих основных методов микробиологической диагностики:
микроскопический, биологический, бактериологический, иммунологический,
аллергический и молекулярно-биологический.
Обучающиеся должны уметь:
-соблюдать технику безопасности;
-выполнить микробиологические исследования.
В пособии изложены практические навыки, ориентированые на конечную цель подготовки врачей в соответствии с квалификационными характеристиками.
Приобретение практических навыков способствует формированию у обучающихся общекультурных (ОК) и профессиональных (ПК)
компетенций:
- готовность к саморазвитию, самореализации, самообразованию,
использованию творческого потенциала (ОК-1) ; - готовность решать стандартные задачи профессиональной
деятельности с использованием информации, медико-биологической терминологии (ОПК-1) ;
5
- способность выявлять у пациентов основные патологические
симптомы и синдромы заболеваний (ПК-6).
1.Соблюдение правил противоэпидемического режима
Бактериологическиелабораторииприлечебно-
профилактическихучрежденияхвыполняютанализы,
необходимыедляпостановки и уточнениядиагнозаинфекционногозаболевания,
способствуяправильномувыборуспецифическоголечения.
Предметом для исследования являются выделения из организма человека,
трупный материал и объекты внешней среды.
В соответствии с рекомендациями ВОЗ патогенные микроорганизмы разделены на 4 группы по степени биологической опасности для сотрудников
лабораторий и окружающего населения:
-I - возбудители особо опасных инфекций (чумы, оспы, желтой
лихорадки);
-II – возбудители высококонтагиозных эпидемических заболеваний
(сибирской язвы, бруцеллеза, сыпного тифа);
-III – возбудители инфекционных болезней, выделяемые в
самостоятельные нозологические группы ( брюшного тифа, шигеллезов);
-IV– условно-патогенные микробы, |
возбудители оппортунистических |
инфекций. |
|
Нумерация групп микробов, принятая в России, отличается обратным |
|
порядком от классификации ВОЗ, где к |
I группе относят микроорганизмов |
самой низкой патогенности, а к IV - особо опасные. По номенклатуре ВОЗ выделяют три категории лабораторий:
-базовые (основные или общего типа);
-режимные (изолированные);
-лаборатории особого режима (максимально изолированные).
1.1Основные правила поведения в бактериологической лаборатории
1.В помещении лаборатории нельзя входить без специальной одежды:
халата, сменной обуви.
6
2.В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, запрещается курить и приносить пищу.
3.При распаковывании заразного материала необходимо соблюдать осторожность: пробирки снаружи обтирать дезинфицирующим раствором;
переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, содержащим дезинфицирующий раствор.
4.Если разбилась посуда, содержащая заразный материал (пробирки,
чашка Петри и др.), немедленно производится обеззараживание предметов,
одежды, стола и помещения.
5.После окончания работы дезинфицируют руки и поверхность рабочего стола.
6.Музейные культуры микробов ставят на хранение в холодильник,
закрывают и опечатывают
7.Работники лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, с возбудителями которых они работают. На кафедре микробиологии используются материалы, содержащие возбудителей
III-IV групп, после разрешения председателя режимной комиссии Республиканской СЭС.
1.2 Правила забора материала для микробиологических
исследований
При заборе и работе с клиническим материалом персонал должен использовать перчатки и халат. При этом необходимо соблюдать ряд правил.
1)Забор исследуемого материала следует провести до начала антибактериальной терапии или через 8-10 часов после приема последней дозы антибиотика. Необходимо соблюдать строжайшую асептику.
Используют стерильный материал: а) ватные тампоны для взятия материала из раны, со слизистых оболочек (глаз, зева, носа); проволочную петлю для взятия материала из влагалища, анального отверстия; б) шприц для взятия крови, гноя; в) стерильную посуду для непосредственного сбора мочи,
мокроты, испражнений.
7
Кровь для посева следует брать из вены на высоте подъема температуры; Посев производится в жидкую элективную среду в соотношении 1:10.
Моча здорового человека стерильна. От начала взятия пробы мочи до начала исследования в лаборатории должно проходить не более 1-2 часов.
Испражнения на патогенные энтеробактерии берут ректальными петлями, смоченными консервантом, и помещают в пробирку с консервирующей средой.
Слизь из носоглотки(на дифтерию) забирают стерильным тампоном
натощак.
Спинно-мозговую жидкость получают в результате люмбальной пункции. 3-5мл ликвора помещают в пробирку (при транспортировке предохранять от охлаждения).
Мокроту собирают натощак после ополаскивания рта.
2)Транспортировку полученного материала следует проводить в максимально короткие сроки (2-3 часа) в специальных биксах или пеналах.
3)Направление прилагается к клиническому образцу в качестве сопроводительного документа (см. практические навыки 1.4).
1.3Правила забора материала и хранения при особо опасных инфекциях
Кособо опасным инфекциям (ООИ), прежде всего, относится чума.
При постановке предварительного диагноза «чума» в лаборатории проводятся срочные мероприятия:
1.Немедленно сообщают в вышестоящие органы здравоохранения. 2.На лабораторию накладывается карантин, т.е. ни один лабораторный
работник, контактировавший с заразным материалом, не должен покидать помещения лаборатории до прибытия эпидемиолога.
3.Все материалы: от больных, чистые культуры и павшие животные должны быть направлены в специализированные лаборатории для окончательного установления диагноза.
4.Меры безопасности при транспортировке.
8
