Методички для студентов / 19. Возбудители венерических болезней и ЗППП

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ

«БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ДЛЯ ОБУЧАЮЩИХСЯ

к практическому занятию на тему:

«Возбудители венерических болезней и ЗППП. Контрольная работа №17-

19»

Дисциплина: микробиология, вирусология Специальность: 31.05.01 «лечебное дело» Курс 2 Семестр 4

Уфа-2023

Рецензенты: Д.м.н, проф. Ю.С.Шишкова. Д.м.н, проф. А.В.Жестков

Автор: доценты: Хуснаризанова Р. Ф.

Утверждение на заседание № 56 кафедры микробиологии, вирусологии от 19.04.2023 г.

1. Тема и ее актуальность.

«Возбудители венерических болезней и ЗППП. Контрольная работа №17-19»

Необходимость знаний биологии сифилиса, микоплазм и хламидий, обусловлена их большим значением в патологии беременности и поражении плода. При этом важным является акцентирование студентов на микробиологической диагностике сифилиса, микоплазм и хламидиозов ввиду практической невозможности клинической диагностики этих форм патологии человека.

Важно, что, зная клинику и микробиологическую диагностику этих заболеваний, современный специалист сможет вовремя распознать заболевание, своевременно начать лечение, осуществить ликвидацию очага инфекции.

2.Учебные цели: изучение биологических свойств бактерий -

возбудителей венерических болезней и ЗППП.

Для формирования профессиональных компетенций обучающиеся должны знать:

–анатомо-физиологические особенности органов и систем;

-правила безопасной работы с материалом подозрительным на содержание возбудителей венерических болезней;

-биологические свойства возбудителей бактериальных венерических болезней;

-микробиологические методы диагностики возбудителей венерических болезней и ЗППП.

-особенности постинфекционного и инфекционного иммунитета;

- методы лечения и профилактики инфекций венерических болезней и ЗППП.

Для формирования профессиональных компетенций обучающиеся должны владеть и уметь:

- провести микроскопическое исследование (световая и темнопольная

микроскопия) возбудителей и отличить их по характеру окрашивания по

Грамму, подвижности бактерий;

-применить знания для выделения чистой культуры микроорганизмов;

-провести биохимическую и серологическую идентификацию возбудителей;

-оценить различные варианты РСК Вассермана;

-оценить результаты готовой реакции Борде-Жангу;

-осуществлять выбор и забор материала для исследований в зависимости от фазы сифилиса и с соблюдением мер безопасности;

-заполнять бланки “Направление на исследование”;

-приготовить мазок из гноя больного острым гонококковым уретритом и окрасить Синькой Лефлера, Романовскому-Гимзе

-и овладеть следующими компетенциями: УК-1,УК-2,УК-8,ОПК-1,

ОПК-2,ОПК-4,ОПК-5, ПК-1.

-А/02.7; А/05.7

3.Материалы для самоподготовки к освоению данной

темы:

Вопросы для самоподготовки:

1) Трепонема сифилиса. Таксономия, свойства. Клинические периоды. Особенности иммунитета. Принципы и методы лабораторной диагностики сифилиса с учетом периода заболевания. РИТ, ИФА и РИФ,

реакции микропреципитации, осадочные реакции, РСК Вассермана.

2) Гонококки. Таксономия, свойства. Вызываемые заболевания.

Патогенез гонококковой инфекции, особенности иммунитета. Принципы и методы лабораторной диагностики острой и хронической гонореи,

бленнореи. РСК Борде-Жангу, назначение, механизм, учет реакции.

Профилактика бленнореи у новорожденных. Профилактика и лечение гонореи. Специфическая терапия и лечение.

3) Микоплазма. Таксономия, свойства, особенности культивирования,

вызываемые заболевания. Эпидемиология. Роль микоплазмы в

патологии беременности и поражения плода. Принципы и методы лабораторной диагностики.

4) Хламидии. Таксономия, свойства, вызываемые заболевания. Роль хламидий в патологии беременности и поражения плода. Патогенез, иммунитет. Принципы и методы лабораторной диагностики.

5)Контрольная работа по темам №19-21.

4.Вид занятия: практическое занятие

5.Продолжительность занятия – 4 часа

6.Оснащение

6.1.Дидактический материал (мультимедийные атласы, ситуационные задачи, таблицы – электронный вариант, видеофильмы);

6.2.ТСО (компьютеры, микроскопы, мультимедийные проекторы)

7. Содержание занятия

7.1.Контроль исходного уровня знаний и умений. Задания для самоконтроля.

7.2.Разбор с преподавателем узловых вопросов, необходимых для освоения темы занятия.

1.Источники инфекции. Входные ворота. Пути передачи инфекции. Зоонозные инфекции.

2.Серологические реакции, их диагностическая ценность, преимущества, недостатки.

7.3.Демонстрация преподавателем методов практических приемов по данной теме.

7.4. Самостоятельная работа студентов под контролем

преподавателя.

РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА БОРДЕ-ЖАНГУ.

Реакция ставится для диагностики хронической гонореи с целью обнаружения антител к гонококку.

В РСК участвует 2 системы: основная система – испытуемая сыворотка, антиген, комплимент и вспомогательная, индикаторная или гемолитическая система – гемолитическая сыворотка и эритроциты барана.

Если в первой системе образуются специфический комплекс антиген + антитело, то комплемент адсорбируется (соединяется с этим комплексом) и гемолиза во второй системе не происходит.

Для реакции требуется:

1. Испытуемая сыворотка, которая получается из крови, взятой пункцией локтевой вены больного. После свёртывания крови сыворотка отсасывается в отдельную пробирку и инактивируется 30 минут при 560

на водяной бане.

2.Антиген - взвесь убитых гонококков.

3.Эритроциты барана получают из стерильно взятой дефибринированной крови. Их отмывают, центрифугируя 3 раза с новыми порциями физиологического раствора. В реакции используют 3 % взвесь эритроцитов.

4.Гемолитическая сыворотка готовится заранее путём иммунизации кроликов эритроцитами барана. Перед употреблением производится титрование сыворотки.

5.Комплемент / свежая сыворотка морской свинки. Из сердца морской свинки шприцем насасывается кровь, после свёртывания отделяется сыворотка. Перед опытом вытитровывается рабочая доза комплемента. Для этого берут основное разведение комплемента 1:10 и

разливают его по пробиркам, от 0,1 до 0,5, после чего объем в каждой пробирке доводят физиологическим раствором до 1,5 мл.

эритроцитов барана. Оба ингредиента в разных объемах и выдерживают в термостате 30 минут (сенсибилизация смеси), после чего смесь добавляют по 1 мл в пробирки помещают в термостат на 30 минут. Контролем служат

3пробирки:

1.1 мл гемолитической системы + 1,5 мл физиологического раствора;

2.0,5 мл комплемента 1:10 + 0,5 мл взвеси эритроцитов + 1,5 мл физиологического раствора.

Титром комплемента называется его минимальное количество, при котором ещё происходит гемолиз. Для постановления реакции берут рабочую дозу комплемента увеличенную против титра на 20-25 % т. е.,

обычно то количество комплимента, которое имеется в предпоследней пробирке с гемолизом. Увеличение дозы комплимента необходимо потому, что в реакции активность комплемента может оказаться несколько подавленной другими ингредиентами реакции (антиген, сыворотка).

ПОСТАНОВКА ОСНОВНОГО ОПЫТА РСК

БОРДЕ-ЖАНГУ.

В начале в 2 пробирки разливается инактивированная и разведённая 1:5 испытуемая сыворотка. Затем в 1-ю пробирку приливается

антиген, во вторую физиологический раствор. После этого во все пробирки добавляются рабочая доза комплемента.

После смешивания ингредиентов штатив с пробирками помещается в термостат при 370 на 30 минут (горячее связывание). При холодном связывании штатив с пробирками помещается в ледник при температуре -40 на 18 часов. После выдерживания в термостате во все пробирки добавляется гемолитическая система. Реакция ставится в объёме 0,5 мл. Пробирки снова помещают в термостат на 2 часа, после чего производится предварительная регистрация результатов. Пробирки остаются при комнатной температуре, а на следующий день отмечается окончательный результат.

Степень интенсивности реакции оценивается в плюсах. Полная задержка гемолиза - четыре плюса (++++), неполная - три, и один плюс. Полный гемолиз обозначается минусами (-).

РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА

ВАССЕРМАНА.

Ставится для диагностики сифилиса с целью обнаружения антител, а также для определения эффективности специфической терапии. Она основана на принципе реакции связывания комплемента Борде-Жангу. Существенным отличием реакции Вассермана является неспецифичность антигена: в качестве антигена употребляют липоидные экстраты из нормальных органов животных.

Для постановки реакции Вассермана необходимо иметь сыворотку больного, диагностикумы перекрестнореагирующие антигены № 1, № 2, комплемент, гемолитическую сыворотку, эритроциты барана, физиологический раствор.

Диагностикум № 1 - специфический, трепонемный. Диагностикум №2 - неспецифический, кардиолипиновый антиген,

которые представляют собой высокоочищенные экстракты бычьего сердца, имеющие постоянный химический состав липоидов. Липоиды,

экстрагированные из сердца, по химическому составу близки к липоидам бледной трепонемы, поэтому хотя и не являются специфическими, но фиксируют антитела против спирохеты. Указанные антигены выпускаются централизованно и в реакцию употребляются, разведёнными согласно к титру, указанному на этикетке.

Одновременно с основным опытом ставят 2 контроля: с нормальной сывороткой и сывороткой заведено больного сифилисом.

ПОСТАНОВКА ОСНОВНОГО ОПЫТА

В начале в 4 пробирки разливается инактивированная и разведённая 1:5 испытуемая сыворотка. Затем в 2 пробирки разливаются антигены (№ 1, № 2), в 3-ю пробирку физиологический раствор. После этого во все пробирки добавляется рабочая доза комплемента. После смешивания ингредиентов штатив с пробирками помещается в термостат при 370 на 30 минут. После выдерживания в термостате во все пробирки добавляется гемолитическая система. Пробирки снова помещают в термостат на 2 часа, а затем оставляют при комнатной температуре. На следующий день отмечают результат. Степень интенсивности реакции оценивается в

плюсах. Полная задержка гемолиза - четыре плюса (++++), полная

задержка гемолиза - три (+++), два (++) и один (+) плюс. Полный гемолиз обозначаются (-) минусом. При резком расхождении результатов с различными антигенами опыт повторяют с новой порцией крови.

4) Заполнить бланки «Направление на исследование» при подозрении на сифилис и гонорею.

5)Прочитать и оценить различные варианты готовой реакции Вассермана. Ингредиенты, механизм, учет и недостатки реакции.

6) Составить план лабораторной диагностики различных периодов сифилиса.

7) Составить план лабораторной диагностики острой и хронической гонореи.

8) Поставить или отвергнуть диагноз «Хроническая гонорея» у женщин, перенесших воспаление придатков и страдающих бесплодием,

подтверждении диагноза.

7.5.Контроль конечного уровня усвоения темы.

Тесты

Тесты 1 типа. Для каждого вопроса выберите один правильный ответ.

1. Возбудитель урогенитального хламидиоза? Хламидии пневмонии Хламидии трахоматис Хламидии пситаци

7.Что используют в качестве материала для выделений хламидий?

А– соскоб

В - испражнения С – кровь

Д – спинномозговую жидкость Е – трупный материал