Методички для студентов / 2.Ультраструктура бактериальной клетки.
...pdfФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
«БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ДЛЯ ОБУЧАЮЩИХСЯ
к практическому занятию на тему: « Морфология бактерий.
Ультраструктура и химический состав бактериальной клетки. Сложные
методы окраски»
Дисциплина микробиология, вирусология Специальность: 31.05.01 «лечебное дело» курс 2 Семестр 3
Уфа – 2023г.
Рецензенты: Д.м.н, проф. Ю.С.Шишкова. Д.м.н, проф. А.В.Жестков
Авторы: доцент Давлетшина Г.К.
Утверждение на заседание № 56 |
кафедры микробиологии, |
|
|
|
|
вирусологии от 19.04.2025 г. |
|
|
1. Тема и ее актуальность: « Морфология бактерий. Ультраструктура и химический состав бактериальной клетки. Сложные методы окраски»
Микроскопические методы – это методы изучения морфологии и тинкториальных признаков микроорганизмов – мельчайших объектов,
неразличимых невооруженным глазом, которые по базисной физиологии похожи на высшие организмы, отражая эволюционное единство живой материи. Они абсолютно необходимы для сохранения жизни на нашей планете, так как обеспечивают непрерывность цепей питания, сопрягающих все живое. В медицинской микробиологии представлена лишь малая часть царства микробов – те из них, которые вступают в непосредственные взаимоотношения с человеком, являются возбудителями инфекционных заболеваний. Знакомство с миром микробов начинается у студентов с изучения морфологии основных групп микроорганизмов: бактерий,
актиномицетов, грибов, микоплазм, спирохет, риккетсий, хламидий и вирусов, изучение морфологии и тинкториальных свойств которых облегчит изучение частного раздела микробиологии и дисциплин профессионального цикла на старших курсах.
2. Учебные цели: освоение микроскопического метода – метода изучения морфологических и тинкториальных признаков бактерий.
2.1.Для формирования профессиональных компетенций
обучающиеся должны знать:
. современные методы микроскопического исследования;
правила работы в бактериологической лаборатории;
принципы современной классификации микробов;
строение бактериальной клетки;
теоретические основы приготовления и окрашивания препаратов из микробов.
2.2.Для формирования профессиональных компетенций студент должен
владеть и уметь:
обращаться с иммерсионной системой микроскопа;
готовить препараты из бактериальных культур;
готовить препараты для исследования микробов в живом состоянии;
окрашивать мазки простыми методами (водным фуксином и метиленовой синью)
сложными методами (Грама, Циль-Нильсена, Ожешко, Нейссера,
Бури)
и овладеть следующими компетенциями: УК-1,УК-2,УК-8,ОПК-1,
ОПК-2,ОПК-4, ОПК-5, ПК-1
- А/02.7; А/05.7.
3.Материалы для самоподготовки к освоению данной темы:
Вопросы для самоподготовки:
1) Особенности химического состава грамположительных и грамотрицательных бактерий. Окраска по методу Грама. Назначение,
основная краска, протрава, обесцвечивающий фактор, дополнительная краска, механизм.
2) Споры, их характеристика, назначение у бактерий. Окраска по методу Циля-Нильсена и Ожешко. , их назначения, основная краска, протрава,
обесцвечивающий фактор, дополнительная краска, механизм. 3)Включения бактерий, окраска по Нейссеру.
4)Капсула, особенности химического состава. Окраска по Бурри-Гинсу
4.Вид занятия – практическое занятие.
5.Продолжительность занятия – 3 часа.
6.Оснащение: таблицы, микропрепараты, наборы красок, биологические микроскопы,культура бактерий.
6.1.Дидактический материал (мультимедийные атласы, ситуационные
задачи, таблицы – электронный вариант, видеофильмы); 6.2.ТСО (компьютеры, микроскопы, мультимедийные проекторы)
7.Содержание занятия:
7.1.Контроль исходного уровня знаний и умений.
Задания для самоконтроля:
1.Перед началом микроскопии студент установил иммерсионный объектив, наблюдая в окуляр, начал подбирать освещение. Какая была допущена ошибка? Как ее устранить? Каким зеркалом следует пользоваться при работе с иммерсионным объективом при естественном освещении?
2.Каковы отличия нуклеотида бактерий от ядра клеток-эукариотов?
3.Какова основная функция бактериальных рибосом?
4.В каких процессах участвуют мезосомы?
5.Каковы основные функции цитоплазматической мембраны?
6.Какова роль пилей?
Эталоны ответов.
1.Перед началом микроскопии устанавливают правильное освещение поля зрения микроскопа с помощью вогнутого зеркала. Затем на предметный столик помещают исследуемый препарат и рассматривают его с объективом (x10), затем под иммерсионным объективом,
предварительно нанеся каплю иммерсионного масла.
2.Нуклеоид бактерий не имеет мембраны, не содержит набора хромосом,
не делится митозом.
3.Та же, что у эукариотов – обеспечивают синтез функциональных и структурных белков в клетке.
4.В делении бактериальной клетки, спорообразовании, синтезе клеточной стенки, энергетическом метаболизме. .
5.В цитоплазматической мембране локализуются пермеазы и окислительные ферменты. Цитоплазматическая мембрана регулирует транспорт метаболитов, участвует в транспорте ДНК, в выделении ферментов и токсинов.
6.Известно несколько типов пилей, отличающихся по своим функциям.
Пили 1-го типа («ворсинки общего типа») имеются на поверхности бактериальной клетки в большом количестве (100-200), они обеспечивают адгезию бактерий к клеткам человека и животных,
имеют большое значение в механизме патогенного действия. Пили 2-го типа («половые ворсинки» или «конъюгативные пили») имеются у бактерий в небольшом количестве (1-4) и участвуют в передаче генетического материала от одной клетки к другой при конъюгации бактерий.
7.2.Разбор с преподавателем узловых вопросов, необходимых для
освоения темы занятия:
Окраска мазков сложными методами.
Приготовление препарата из бактерий
7.3.Демонстрация преподавателем методики практических приемов по данной теме.
Приготовление препарата из эмульсии, состоящей из смеси кишечной палочки и стафилококка
Окраска мазков простыми и сложными методами
Определение подвижности бактерий приготовлением препаратов
«раздавленной» и «висячей» капли.
Демонстрации:
1.Окрашенного препарата из смеси грамположительных и грамотрицательных бактерий.
2.Готового препарата капсул сибиреязвенный палочки.
3.Готового препарата из туберкулезной палочки (окраска по ЦилюНильсену)
4.Готового препарата спор антрокоида ( окраска по Ожешко)
5.Готового препарата дифтерийной палочки окрашенного по Нейссеру.
6.Таблицы.
7.4.Самостоятельная работа студентов под руководством преподавателя
|
|
|
Методические |
|
|
№ |
Последовательность |
указания к |
Ориентировочные |
||
п/п |
|||||
|
|
|
|
||
|
|
действий |
деятельности и цель |
признаки |
|
|
|
|
|
||
1. |
Освоение микроскопии с |
Изучение основных |
Обратить внимание |
||
|
иммерсионной системой |
форм бактерий в |
на форму(кокки, |
||
|
|
|
готовых окрашенных |
паочки, извитые), |
|
|
|
|
препаратах |
цвет( сине- |
|
|
|
|
(стафилококка, |
фиолетового и |
|
|
|
|
стрептококка, |
розового цвета) и |
|
|
|
|
сарцины, кишечной и |
расположение |
|
|
|
|
сенной палочек, |
микробов. |
|
|
|
|
вибриона). Зарисовка |
|
|
|
|
|
просмотренных |
|
|
|
|
|
препаратов. |
|
|
|
|
|
|
||
2. |
Освоение техники |
|
|
||
|
приготовления мазков из |
|
|
||
|
бактериальных культур |
|
|
||
|
|
|
|
||
3. |
Освоение окраски простыми |
Время окраски |
Все виды бактерий |
||
|
и сложными методами: |
1-2 минуты |
одинаково |
||
|
a) |
окраска водным |
|
интенсивно |
|
|
|
фуксином Пфейффера |
|
окрашиваются в |
|
|
|
|
|
красный цвет. |
|
|
b) |
окраска синькой |
Время окраски |
Отмечается |
|
|
|
Леффлера |
3-5 минут |
различная степень |
|
|
|
|
|
интенсивности |
|
|
|
|
|
окраски бактерий в |
|
|
|
|
|
синий цвет. |
|
|
c) |
окраска |
|
|
|
|
|
универсальным |
|
Грамположительные |
|
|
|
методом Грама: |
Генцианвиолет – |
бактерии (кокки) – |
|
|
1. На фиксированный мазок |
основная краска. |
сине-фиолетового |
||
|
накладывают |
|
цвета, |
||
|
фильтровальную бумагу, |
|
Грамотрицательные |
||
|
пропитанную |
Раствор Люголя – |
(палочковидной |
|
|
генцианвиолетом и наносят |
протрава: усиливает |
формы) – розового |
|
|
каплю воды на 2 минуты. |
действие основной |
цвета. |
|
|
2. |
Бумагу сбрасывают и, не |
краски у |
|
|
промывая водой, наливают |
грамположительных |
|
|
|
раствор Люголя на 1 минуту. |
бактерий. |
|
|
|
|
|
Спирт – |
|
|
|
|
обесцвечивающий |
|
|
3. |
Препарат обесцвечивают |
фактор. |
|
|
3-5 каплями спирта в |
|
|
|
|
течении 30 секунд до |
|
|
|
|
прекращения отхождения |
|
|
|
|
фиолетовых струек краски. |
Водный фуксин – |
|
|
|
4. |
Промывают водой. |
дополнительная |
|
|
5. |
Докрашивают водным |
краска. |
|
|
фуксином Пфейффера в |
|
|
|
|
течении 1-2 минут. |
|
|
|
|
6. |
Промывают водой, |
|
|
|
высушивают |
|
|
|
|
фильтровальной бумагой и |
|
|
|
|
микроскопируют под |
|
|
|
|
иммерсией. |
|
|
|
|
|
d) окраска методом |
|
|
|
|
Нейссера: |
|
|
|
1. |
На фиксированный мазок |
Синька Нейссера – |
|
|
на 1 мин. наливают синьку |
основная краска. |
Тела бактерий |
|
|
Нейссера. |
|
светло-коричневого |
|
|
2. |
Промывают раствором |
Раствор Люголя – |
цвета, а зерна |
|
Люголя. |
протрава. |
волютина – темно- |
|
|
3. |
Не промывая водой, |
Везувин – |
синего, почти |
|
окрашивают везувином в |
дополнительная |
черного цвета. |
|
|
течение 5 мин. |
краска |
|
|
|
4. |
Промывают водой, |
|
|
|
высушивают и смотрят под |
|
|
|
|
иммерсией. |
|
|
|
|
|
e) окраска методом |
|
|
|
|
Циль-Нильсена: |
|
Кислотоустойчивые |
|
1. |
На фиксированный мазок |
Карболовый фуксин – |
бактерии и споры – |
|
накладывают белую |
основная краска. |
рубиново-красного |
|
|
фильтровальную бумагу и |
Прогревание – |
цвета, а остальная |
|
|
наливают карболовый |
протрава. |
микрофлора – |
|
|
фуксин Циля. Препарат 2-3 |
|
синего цвета. |
|
|
раза подогревают в пламени |
|
|
|
|
до появления паров. |
|
|
|
|
2. |
Препарат промывают |
|
|
|
водой, бумагу сбрасывают. |
|
|
|
|
3.Препарат обесцвечивают в |
Серная кислота – |
|
|
|
5% растворе серной |
обесцвечивающий |
|
|
|
кислоты. |
фактор. |
|
|
|
4. |
Промывают водой. |
|
|
|
5. |
Докрашивают синькой |
Синька Леффлера – |
|
|
Леффлера 3-5 минут. |
дополнительная |
|
|
|
6. |
Промывают водой, |
краска. |
|
|
высушивают, смотрят под |
|
|
|
|
иммерсией. |
|
|
|
7.6. Контроль конечного уровня усвоения темы:
Материалы для контроля уровня освоения темы.
ТЕСТЫ I ТИПА. Для каждого вопроса выберите один наиболее правильный ответ.
1.Спиралевидную форму имеют:
a)микрококки
b)сарцины
c)спирохеты
d) стафилококки |
Ответ: c) |
2. Функции капсулы бактерий:
a)защита от действия света
b)участвует в метаболизме
c)усиливает болезнетворность
d)сохраняет форму клеток
e) адаптация |
Ответ: c) |
3.Способны образовывать споры:
a)стафилококки
b)сарцины
c)бациллы
d) |
спириллы |
|
e) |
хламидии |
Ответ: c) |
1.Грамположительные бактерии:
a)бациллы
b)менингококки
c)кишечные палочки
d)вибрионы
e) спирохеты |
Ответ: a) |
2. Для окраски спор используется:
a)простой метод окраски
b)окраску по Циль-Нильсену
c)метод Романовского-Гимза
d)метод Бури
e) метод Нейссера Ответ: b)
ТЕСТЫ II ТИПА. Вопросы с подбором.
А. На соответствие. Для каждого вопроса, пронумерованного цифрой,
подберите один соответствующий ответ, обозначенный буквенным индексом. Один и тот же ответ может быть использован один или несколько раз.
1.) Подобрать термины, эквивалентные следующим понятиям:
1. |
Спорообразующие бактерии, у которых |
|
|
диаметр спор равен диаметру палочек. |
А. Сарцины |
2. |
Кокки, делящиеся в одной плоскости |
|
|
и расположенные цепочкой. |
В. Клостридии |
3. |
Спорообразующие бактерии, у которых |
|
|
диаметр спор больше диаметра палочек. |
С. Бациллы |
4. |
Кокки, делящиеся в нескольких плоскостях |
|
