4. Выполнить самостоятельную работу.

Опыт № 1 Влияние адреналина и ацетилхолина на фагоцитарную (поглотительную) активность лейкоцитов крови.

В 3 пронумерованные пробирки последовательно вносят 1 объём раствора гепарина, 2 объёма крови, 1 объём смыва суточной культуры стафилококка (1 объём соответствует 30 делениям капилляра Панченкова). Гепарин, кровь и культуру стафилококка набирают тремя различными капиллярами.

Содержимое пробирок тщательно перемешивается, после чего в 1-ую пробирку добавляют 2 капли раствора адреналина 1:108, во 2-ую – 2 капли ацетилхолина 1:105, в 3-ю – 2 капли физиологического раствора (контроль).

Все три пробирки одновременно ставят в термостат, нагретый до 37°С. Через 15 минут содержимое пробирок вновь тщательно перемешивают, из каждой пробирки делают мазки на предметных стеклах, обозначив на них номера пробирок. Высушив мазки на воздухе, фиксируют их в смеси Никифорова 30 минут или в метиловом спирте – 3 минуты. Затем мазки окрашивают в течение 30 минут краской Романовского-Гимза. По истечении этого времени краска смывается водопроводной водой, и мазки высушивают-ся на воздухе.

Пользуясь иммерсионной системой микроскопа, высчитать для каждого мазка: 1) фагоцитарный индекс, 2) фагоцитарное число.

Для этого необходимо сосчитать 100 нейтрофильных лейкоцитов и моноцитов, включая в это число фагоциты как поглотившие, так и не поглотившие микробы. Активные фагоциты, поглотившие микробы, обозначаются цифрами, соответствующими количеству кокков, находящихся в них; интактные фагоциты обозначаются нулями.

Фагоцитарный индекс указывает на количество микробов, приходящееся в среднем на 1 фагоцит. Вычисляется он так: сумма всех поглощенных стафилококков делится на количество всех сосчитанных фагоцитов, т.е. на 100.

Фагоцитарное число равно количеству фагоцитов, поглотивших микробы из 100 сосчитанных, т. е. фагоцитарное число – это процент активных фагоцитов.

Отметить изменение показателей фагоцитарной активности лейкоцитов крови в зависимости от добавления в пробирку адреналина или ацетилхолина и сделать соответствующие выводы.

1. Какие стадии фагоцитоза вы наблюдали при просмотре мазков?

2. Как и почему изменяются количественные показатели фагоцитоза при воз-действии ацетилхолина и адреналина?

3. Какие бактерицидные механизмы включаются в фагоцитах при захвате микроорганизмов в данном эксперименте?

4. Какое значение для клиники может иметь оценка фагоцитарной активности лейкоцитов?

5. Решить ситуационные задачи и оформить протоколы опытов.

Задача 1.

Пациент К., 28 лет, обратился к врачу с жалобами на часто повторяющиеся стоматиты, ангины, трахеиты, отиты, периоди­чески — пневмонии, в том числе в летнее время. Попытки по­высить активность «неспецифической сопротивляемости» орга­низма путём закаливания эффекта не дали.

Лабораторные данные: реакции лимфоцитов на фитогемагглютинин и туберкулин положительные; активность факторов комплемента и уровни IgM, IgG, IgA в сыворотке крови нор­мальные; в крови содержание эритроцитов и НЬ в пределах нор­мы, число лейкоцитов снижено за счёт моноцитопении, коли­чество гранулоцитов — нормальное; фагоцитарная активность макрофагов снижена на 45%.

Вопросы

1. В каком звене системы иммунобиологического надзора организма пациента имеется дефект: в системе иммуните­та или в системе факторов неспецифической защиты? Ответ аргументируйте.

2. Если дефект в системе факторов иммунитета, то за счёт поражения каких её клеток: макрофагов, В- или Т-лимфоцитов? Как при этом объяснить происхождение симп­томов, имеющихся у пациента К.?

3. Если это дефект в системе факторов неспецифической за­щиты организма, то какого (или каких) из них именно? Как при этом объяснить механизмы симптомов, имею­щихся у данного пациента?

4. Как Вы обозначите форму патологического состояния, наблюдающегося у пациента?

Ответы

1. В системе иммунобиологического надзора данного паци­ента нарушена в основном функция антиген-представляющих клеток. Об этом свидетельствуют моноцитопения и снижение фагоцитарной активности макрофагов. Нарушения в системе фагоцитирующих клеток. Моноцито­пения и снижение активности макрофагов приводят к тому, что клетки иммунокомпетентной системы не получают ин­формации о чужеродном агенте, которая необходима для развития специфического иммунного ответа. Клиническая картина — стоматиты, ангины, отиты, пневмонии, вялоте­кущие рецидивирующие инфекции — свидетельствует в большей степени именно о нарушениях в системе фагоци­тирующих клеток. Расстройства фагоцитоза (фагоцитарная недостаточность) и процесса представления АГ лимфоци­там могут лежать в основе снижения эффективности и спе­цифических реакций за счёт В- и Т-лимфоцитов. В данном случае механизмы фагоцитарной недостаточности — «лейкопенический» и «дисфункциональный».

3. Прямых доказательств (данных) того, что имеются нару­шения в системе факторов неспецифической защиты -комплемента, интерферонов, лизоцима, интерлейкинов и др., — нет. Вместе с тем нет оснований и исключить их. Можно допустить снижение фагоцитарной активности макрофагов, что характерно для пациентов с синдромом Шедъяка—Хигаси.

4. Фагоцитарная недостаточность, недостаточность антиген-представляющих клеток.

Задача 2

Пациент 21 год, госпитализирован по поводу тяжелой двусторонней пневмоцистной пневмонии (пневмоцисты относятся к так называемым оппортунистическим инфекциям, которые вызывают заболевания только у лиц с ослабленной иммунной системой). Сделайте заключение по иммунограмме:

Лейкоциты – 3,2х10⁹ кл/л

Лимфоциты – 20% (абсолютное число 0,64х10⁹ кл/л)

НСТ спонтанный – 0,8

НСТ стимулированный – 0,8

Индекс стимуляции – 1,0

Т-система:

CD 3 - 52% (абсолютное число 0,33 х 1(f)

CD 4 - 24% (абсолютное число 0,15 х 10⁹)

CD 8 - 30% (абсолютное число 0,19 х 10⁹)

ИРИ - 0,8 В-система:

CD 20 - 30% (абсолютное число 0,19 х 10⁹)

Ig A -1,2 г/л

Ig M - 0,8г/л

Ig G - 9,6г/л

ЦИК - 20 ед. опт. пл.

Антитела к ВИЧ положит.

Заключение:

Лейкопения, лимфоцитопения, Т-лимфоцитопения. Абсолютная недостаточность CD 4. Уменьшение концентрации им­муноглобулинов.

Учитывая наличие антител к ВИЧ можно предположить иммуно­дефицит специфической этиологии (СПИД).

Задача 3.

Сделайте заключение по иммунограмме пациента (Л., 57 лет) с диагнозом хронический гнойно-обструктивный бронхит (обструктивная болезнь).

Лейкоциты 15,6 х 10 кл/л

Лимфоциты 17% (абсолютное число 2652)

НСТ спонтанный - 0,62 ед, НСТ стимулированный - 0,64

Индекс стимуляции = 1,03

Т-система:

CD 3 -40% (абсолютное число 1061)

CD 4 - 13% (абсолютное число 345)

CD 8 - 24% (абсолютное число 636)

ИРИ-0,54

В-система:

CD 20- 12% (абсолютное число - 1218)

IgA-3,7

igM-0,60

IgG-18,8

ЦИК - 46 ед. опт. пл.

Заключение:

Лейкоцитоз, относительная лимфоцитопения, сни­жение функционального резерва фагоцитов. Относительное и абсо­лютное снижение количества хелперов. Снижение количества В-лимфоцитов, снижение количества иммуноглобулинов М.

Задача 4.

В клинику детских болезней поступил Костя Н., 8 лет. Его родители встревожены частым развитием у ребенка отитов, ангин, ринитов, конъюнк­тивитов, бронхитов, пневмоний, энтероколитов. Настоящая госпитализация связана с подозрением на развитие эндокардита и сепсиса.

При обследовании обнаружено: лейкопения за счет значительного сни­жения числа лимфоцитов, в основном их Т-пула и в меньшей мере - В-лимфоцитов; уменьшение содержания в крови иммуноглобулина А (на 40% от нормы), уровень иммуноглобулина G - на нижней границе нормы; реакция лимфоцитов на фитогемагглютинин (ФГА) снижена.

Вопросы:

1. Как Вы обозначите патологическое состояние, развившееся у ребен­ка? Ответ обоснуйте.

2. Каковы его возможные причины?

3. Каков механизм развития и последствия этого состояния, судя по ла­бораторным данным?

4. Как Вы объясните факты снижения реакции лимфоцитов на ФГА и значительного уменьшения содержания в крови IgA при норме IgG?

5. Какие проявления болезненного состояния ребенка в большой мере могут являться результатом снижения уровня IgA?

Ответы:

1. У ребенка развился комбинированный иммунодефицит в системе клеточных факторов иммунобиологического надзора (Т- и В-лимфоцитов).

2. Причины развития данного синдрома различные мутации и дефекты генов синтеза и дифференцировки иммунокомпетентных клеток. Иммунная система в силу ее высокой митотической активности высоко чувствительна к действию многих этиологических факторов – канцерогенных, мутагенных, цитостатических, вызывающих нарушения размножения клеток и синтеза белков в них.

3. Механизм развития: нарушается дифференцировка Т-лимфоцитов на ранних этапах генеза, а также селективное нарушение дифференцировки В-лимфоцитов, секретирующих Ig A

4. Снижение реакции лимфоцитов на ФГА свидетельствует о нарушении процессов бласттрансформации лимфоцитов и, как следствие, о сниженной активности Т-клеточного звена иммунитета, значительное снижение содержания в крови IgA при норме IgG свидетельствует о нарушении дифференцировки В-лимфоцитов в плазматические клетки, секретирующих IgA, в то же время дифференцировка В-лимфоцитов, секретирующих IgG не затронута.

Результатом снижения уровня IgA могут являться следующие проявления болезненного состояния ребенка: риниты, конъюнк­тивиты