7.2 Самостоятельная работа под контролем преподавателя.

Выполнение практической работы на примере эксперимента с воспроизведением анафилактического шока у морских свинок, и реакции дегрануляции тучных клеток из перитонеального смыва крысы.

Опыт № 1* Воспроизведение и демонстрация анафилактического шока у морской свинки

Предварительно сенсибилизированной морской свинке (введением 0,1 мл нормальной лошадиной сыворотки за 14 дней до опыта) ввести разрешающую дозу (0,5–1,0 мл) лошадиной сыворотки в полость сердца или внутривенно (в ушную или бедренную вену). Наблюдают за развитием анафилактического шока. Каждые 5 минут отмечают изменения со стороны дыхания, измеряют ректальную температуру и следят за появлением беспокойства, судорог, непроизвольного мочеиспускания, дефекации. Результаты наблюдений записывают в таблицу 2.

Таблица 2.

Показатели	Внешний вид	Подвижность	Частота дыхания	Ректальная температура	Непроизвольные реакции	Дополнительные данные
Время
Исходное состояние
После введения разрешающей дозы сыворотки
Через 5'
Через 10'
и т.д.

В случае летального исхода произвести вскрытие грудной клетки и сделать обзор органов дыхания (наличие симптома Ауэр-Льюиса). Результаты записать в протокол, ответить на твопросы и сделать выводы.

1. К какому типу аллергических реакций по классификации Джилла-Кумбса относится анафилактический шок?

2. Какую стадию аллергии вы наблюдали? Объясните механизм возникших нарушений.

3. Какова непосредственная причина смерти в случае летального исхода? Объясните механизм возникновения «шокового легкого».

Опыт № 2* Реакция непрямой дегрануляции тучных клеток

Сенсибилизированную лошадиной сывороткой белую крысу (0,5 мл через день 3-х кратно) усыпить до 3-ей стадии эфирного наркоза. Положить ее на препаровальный столик брюшком кверху, ввести внутрибрюшинно 10 мл физиологического раствора, подогретого до 37ºС. В течение 1-2 минут массировать пальцами брюшную стенку для получения перитонеального смыва.

Ножницами вскрыть брюшную полость по средней линии живота (длина разреза 3-3,5 см). Взять химический стаканчик, ополоснуть его рабочим раствором гепарина (1:1000). Перевернуть крысу над стаканчиком брюшком вниз для того, чтобы перитонеальный смыв стекал в стаканчик по петлям кишки.

Полученную взвесь отцентрифугировать и осторожно удалить надосадочную жидкость. После взятия перитонеального смыва ушить послойно брюшную стенку крысы.

На три предметных стекла, окрашенных нейтральным красным, нанести по одной капле центрифугата с помощью глазной пипетки.

На 1-ое стекло добавить по одной капле сенсибилизированной сыворотки и аллергена (лошадиную сыворотку) и осторожно перемешать; на 2-ое стекло – по одной капле сенсибилизированной сыворотки и физиологического раствора (контроль сыворотки); на 3-е стекло – по одной капле аллергена и физиологического раствора (контроль аллергена). Накрыть капли покровными стеклами, углы которых заранее смазаны вазелином. Инкубировать препараты в термостате в течение 15 минут.