7 Билет:
Методы генетического взаимодействия вирусов. Негенетическое взаимодействие
Взаимодействие вирусов между собой может происходить только при заражении одной клетки несколькими вирусами (смешанная инфекция). При этом характер взаимодействия в условиях смешанной инфекции может быть генетический и негенетический.
Генетические взаимодействия: 1. Кросс-реактивация 2. Множественная реактивация. 3. Пересортировка генов.
Негенетические взаимодействия.
1. Комплементация. При этом дефектный (мутантный) по функциональному белку вирус не способен к собственной репродукции и требует помощника. В этом случае вирусом - помощником может являться как родственный недефектный вирус, так и биологически неродственный вирус (лейкоз птиц и вирус саркомы Рауса).
2. Негенетическая реактивация. В случае проникновения в клетку вместе с полноценным живым вирусом
дефектного по структурному белку инактивированного вируса возможна репродукция последнего. При этом живой вирус, используя собственные ферменты, раздевает инактивированный вирус, после чего начинается репликация его нуклеиновой кислоты.
3. Фенотипическое смешивание (транскапсидация). Является разновидностью гибридизации, при которой
полноценный геном одного вируса в процессе сборки заключается в белковую оболочку (капсид) другого вируса. В этом случае образующиеся вирусы-гибриды являются генетически полноценными, то есть содержат неизмененный геном исходного вируса.
При всех способах взаимодействия вирусов между собой явления, при которых происходит подавление активности одного вирус другим, условно называют интерференцией. Взаимодействия вирусов, при которых происходит повышение активности участвующих вирусов, называют экзальтацией
Принцип работы электронного микроскопа, разрешающая способность, приготовление препаратов.
В электронном микроскопе образец облучается пучком электронов. Длина же электронной волны значительно меньше, чем световой. Соответственно, волна “чувствует” меньшие препятствия: разрешающая способность микроскопа оказывается выше. Конструктивная особенность состоит в том, что в электронном микроскопе в качестве линз используются электромагнитные катушки.
Типы электронных микроскопов трансмиссионные (просвечивающие) и сканирующие (растровые).
1. При трансмиссионной микроскопии пучок электронов проходит через изучаемый объект, и в результате получается плоскостное изображение объекта.
2. При сканирующей микроскопии на поверхность объекта вначале наносится металлическое напыление, а
в ходе микроскопии электронный пучок последовательно “пробегает” по всем точкам поверхности объекта (сканирует поверхность), выбивая из напылённого вещества вторичные электроны (бета-лучи). Последние формируют пространственное изображение поверхности.
Особенности приготовления препарата.
1. Взятие материала и фиксация Материал берут очень маленькими кусочками (порядка 1 мм 3 ), а фиксацию осуществляют обычно в 2 стадии: вначале глутаральдегидом (стабилизация белков), затем - четырёхокисью осмия (стабилизация фосфолипидов и контрастирование ткани).
2. Уплотнение материала 1) Образцы, как обычно, обезвоживают, а для их дальнейшего уплотнения используют эпоксидные смолы. 2) а) Заливку производят в специальных формах, б) затвердевание смеси происходит путём её полимеризации в термостате, в) и затвердевшие блоки имеют вид маленьких свечей.
3. Приготовление срезов 1) Срез делают с помощью ультратома; их толщина - 30-50 нм (ср. с
микротомными срезами - 10.000 – 20.000 нм). 2) Затем их переносят на сеточки (играющие роль предметного стекла).
4.Окрашивание срезов 1) а) Окрашивание срезов сводится к их контрастированию с помощью солей тяжёлых металлов (свинца, вольфрама, урана). б) Эти соли осаждаются на фосфолипидах мембран и поглощают электроны. 2) Поэтому соответствующие места клетки выглядят более тёмными.
парагрипп-3
Paragrippus bovum, инфекционный бронхит, бронхопневмония, острый катар верхних дыхательных путей, транспортная лихорадка, параинфлуенца-3, parainfluenza-3 – транспортная лихорадка, параинфлюэнца - 3, острая контагиозная вирусная болезнь, гл. обр. телят, характеризующаяся преим. поражением органов дыхания. Болезнь регистрируется во всех странах, где развито скотоводство. В естеств. условиях вирус поражает в основном кр. рог. скот, редко — овец, лошадей и буйволов.
РНК - вирус, относящийся к сем. Paramyxoviridae Вирус обладает гемолитич., гемагглютинирующим и гемадсорбирующим свойствами. Размеры вириона — 150—250 нм. Источник возбудителя инфекции — больное животное, выделявщие вирус с выдыхаемым воздухом, носовой слизью, а также с вагинальными истечениями и спермой. Болезни способствуют транспортировка и перегруппировка телят. Животные чаще заражаются аэрогенно, но возможны алиментарный и половой пути инфицирования.
Возбудитель погибает при температуре 56С в течение часа, при 36С — за 5 ч. К низкой температуре он устойчив и сохраняет вирулентность при 4-кратном замораживании и оттаивании; в лиофильном состоянии при; 4С жизнеспособен до 2 лет. Обезвреживают вирус ультрафиолетовые лучи, а так- же 1—2%-ные растворы кислот и щелочей.
Наиболее активно вирус репродуцируется в клетках почки и легкого теленка. В культуре клеток вызывает ЦПД, характеризующееся образованием симпластов за счет слияния нескольких клеток, а в цитоплазме, и ядрах клеток — формирование эозинофильных включений. В куриных эмбрионах вирус лучше накапливается при заражении их в амниотическую полость.
Пат.мат: носовую слизь, лимфоузлы (бронхиальные, средостенные заглоточйые), слизистую оболочку носовой полости, гортани, трахеи, кусочки легких.
Инкубац. период 24—30 ч. Заболевание чаще начинается с лихорадки на 2—3-й сут после заражения, макс. подъем темп-ры до 41ºС и более отмечают на 3—4-е или 6—7-е сут. Аппетит ухудшается, дыхание становится поверхностным и частым, появляются слизисто-гнойные истечения из носа, слезотечение и кашель. Иногда первые симптомы болезни — серозный конъюнктивит и ринит, чрезмерное слюноотделение, а у нек-рых телят — и диарея. У взрослых животных болезнь, как правило, не сопровождается симптомами респираторного заболевания. У стельных коров инфекция может привести к внутриутробному заражению плода, абортам или рождению нежизнеспособных телят.
Иммунитет: переболевшие животные, как правило, повторно не заболевают. У телят колостральный иммунитет сохраняется до 2—4 месячного возраста. Для специфической профилактики используют гипериммунные сыворотки и сыворотки (полиглобулины) животных-реконвалесцентов.
Для серологического исследования направляют кровь, которую исследуют в РТГА, РНГА, РИФ.