8 Билет
Противовирусный иммунитет. Роль неспецифических факторов защиты
Противовирусный иммунитет – состояние устойчивости организма к патогенному вирусу, осуществляемое системой иммунитета. Однако кроме системы иммунитета невосприимчивость к инфекции зависит от неиммунитетных факторов.
К неспецифическим факторам противовирусного иммунитета относятся клеточная ареактивность, сывороточные ингибиторы, лихорадочная реакция организма, фагоцитоз и интерферон. Тяжесть вирусной инфекции зависит от инфекционных свойств вируса, количества пораженных клеток, возраста и состояния макроорганизма, окружающей среды.
Клеточная ареактивность объясняется отсутствием клеток, способных поддерживать репродукцию вирусов. Полагают, что это связано с подавлением первоначальных этапов взаимодействия вириона с клеткой хозяина (адсорбции или депротеинизации вириона). Tемпература тела является одним из важных факторов регуляции репродукции вируса в чувствительных к нему клетках. Повышение температуры способствует задержке и подавлению репродукции вирионов, но в то же время стимулирует продукцию интерферона и специфический иммунный ответ. Вирусы вследствие своих структурных особенностей и химического состава слабо фагоцитируются макрофагами и не разрушаются их ферментами. Это указывает на соподчиненную роль макрофагов в непосредственном подавлении вирусной репродукции. Лейкоциты также не имеют существенного значения в защитных реакциях против вирусных инфекций. Однако макрофаги начинают довольно интенсивно фагоцитировать клетки, пораженные вирусами, по мере усиления их кооперации с Т-лимфоцитами. Под интерференцией вирусов понимают способность одного вируса подавлять репродукцию другого вируса в клетке-хозяине. Так, описана интерференция между вирусом гриппа и вирусом энцефаломиелита лошадей, вирусом осповакцины и вирусом ящура и бешенства и т. д. Однако не всегда при смешанном заражении клетки двумя вирусами наблюдается интерференция. Некоторые вирусы могут репродуцироваться в одной клетке независимо друг от друга и даже один вирус (вирус-помощник) может стимулировать репродукцию другого. В механизме интерференции основную роль играет образование клетками интерферона — мощного ингибитора репродукции вирусов. Интерферон первоначально был получен Л. Айзексом и И. Линденманом в 1957 г. в виде экстракта из хорионаллантоисной ткани куриных эмбрионов, зараженных вирусом гриппа. Такие экстракты частично или полностью блокировали репродукцию вируса гриппа в курином эмбрионе. Интерферон является белком, он содержится в незначительном количестве в здоровом организме. Под влиянием вирусов количество интерферона резко увеличивается в различных клетках организма человека и животных. Наибольшая продукция интерферона обеспечивается лимфоцитами. Интерферон не является специфическим агентом, поскольку блокирует репродукцию разнообразных вирусов. Вместе с тем он обладает тканевой специфичностью, так как клетки разных тканей образуют неодинаковый интерферон. В естественных условиях при вирусных инфекциях образование интерферона индуцируется вирусной нуклеиновой кислотой. Искусственными индикаторами интерферона (интерфероногенами) могут быть не только вирусы, но и другие микробы, их токсины, синтетические полимеры и разные вещества. Механизм противовирусного действия интерферона заключается в нарушении трансляции вирусной иРНК рибосомами клетки хозяина и прекращении синтеза белка. Интерферон препятствует также распространению вируса на соседние клетки, ограничивая тем самым вирусную инфекцию. Получают интерферон из лейкоцитов человека, клеток костного мозга. В настоящее время разрабатываются методы получения высокоактивного интерферона путем его очистки и концентрации.
Перевиваемые культуры клеток.
Перевиваемые КК – клетки, способные к размножению вне организма неопределенно длительное время. В лаборатории их поддерживают путем пересевов из одного сосуда в другой (при условии замены питательной среды). Получают их из первичных КК с повышенной активностью роста путем длительных пересевов в определенном режиме культивирования. Клетки перевиваемых культур имеют одинаковую форму, гетероплоидный набор хромосом, стабильны в условиях роста in vitro, некоторые из них обладают онкогенной активностью. Перевиваемые клетки имеют преимущества перед первичными: их приготовление значительно проще, экономятся труд и материальные средства; эти культуры заранее можно проверить на наличие латентных вирусов и микрофлоры; клональные линии обеспечивают более стандартные условия для размножения вирусов, чем первичные, представляющие смешанную популяцию клеток. Большинство перевиваемых клеток обладает более широким спектром чувствительности к вирусам, чем соответствующие первичные культуры. Однако перевиваемые клетки имеют и недостатки: они склонны к малигнизации, то есть злокачественное перерождение независимо от происхождения и снижения чувствительности к вирусам у них происходит быстрее, чем у первичных, поэтому необходимо применять клональные линии перевиваемых клеток. Поддерживают перевиваемые клетки путем периодических пересевов. Чаще используют бесцентрифужный метод. Чисто на всякий случай: для очередного пересева отбирают 2–3-дневную культуру с хорошим монослоем, сливают питательную среду, а клеточный монослой покрывают подогретым до 35–37 °С 0,02%-м раствором Версена. Диспергирующее действие Версена объясняется связыванием им двухвалентных катионов (Mg++, Ca++), которые способствуют прикреплению клеток к стеклу и обеспечивают целостность клеточной культуры. Под действием Версена клетки округляются, отделяются от стекла. Через 10–15 минут после округления клеток версен сливают, оставляя небольшое количество его (в 1-литровом матрасе – 5–10 мл, в 0,1-литровом – 2–3 мл), и выдерживают еще 5–10 минут, периодически омывая клетки версеном, затем добавляют небольшое количество питательной среды. После встряхивания подсчитывают клетки в камере Горяева, исходную клеточную взвесь разводят ростовой питательной средой до необходимой концентрации (100–200 тыс. в 1 мл) и разливают при помешивании в пробирки или матрасы, закрывают резиновыми пробками и культивируют в термостате при 37 °С в течение 3–4-х дней до образования сплошного монослоя.
Диарея КРС
Diarhea viralis bovum, болезнь слизистых, инфекционный энтерит крупного рогатого скота - контагиозная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, эрозийно-язвенным воспалением слизистых оболочек пищеварительного тракта и дыхательных путей, сопровождающаяся диареей, ринитом, конъюнктивитом. У коров возможны аборты. сферич. РНК-содержащий вирус рода Pestivirus сем. Togaviridae. 30—40 нм. В естеств. условиях болеют кр. рог. скот, буйволы, олени и косули. Наиболее восприимчивы животные в возрасте от 6 мес до 2 лет. Источник возбудителя инфекции — больные животные. Животные заражаются различными путями: алиментарным, аэрогенным, внутвиуторбно; имеются сообщения о передаче вируса через сперму. Вирусоносительство может быть и течение 4 мес после переболевания. Факторами передачи возбудителя инфекции могут быть заражённая обувь и одежда обслуживающего персонала, а также инфицированные корм, вода и предметы ухода за животными. Вирус может годами сохраняться при t ниже 20°С, в культуральной жидкости не теряет биол. активность до 1 года, в крови, лимфатич. узлах, селезёнке и др. патол. материале — до 6 мес. При t 25 °С в течение 1 сут вирус практически не снижает биол. активности, при t 37 °С погибает через 5 сут. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, трипсину и дезоксихолату натрия. Для прижизненного выделения вируса диареи в период лихорадки и выраженного клинического течения болезни берут носовые, глоточные смывы, фекалии, кровь, а из патологического материала — кусочки пораженных отделов пищеварительного тракта, брыжеечных и заглоточных лимфоузлов. Культивируются в организме естественно восприимчивых животных (телят). Лабораторные животные нечувствительны. У кроликов может быть повышение температуры и бессимптомное течение; Некоторые штаммы удается адаптировать к куриным эмбрионам после нескольких пассажей через желточный мешок. Культивируют в культурах из семенников КРС (Тестикулы Бычка = ТБ), макрофагов и лейкоцитов, и в перевиваемых линиях клеток. Воротами инфекции являются слизистые оболочки желудочно кишечного тракта и дыхательных путей. При латентной - в сыворотке крови специфич. антител. Подострое течение характ. внезапным началом, кратковре. (до 24ч) незначительным (39,7—40,0 °С) подъёмом темп. тела, учащённым сердцебиением и дыханием, отсутствием аппетита. Могут возникнуть поражения слизистой оболочки ротовой полости в виде гиперемии, эрозий и изъязвлений; у нек. животных — носовые истечения, слезотечение, кашель, кратковременная диарея. Острое течение начинается внезапным подъёмом темп-ры (40,5—42,4 °С), умеренной или сильной депрессией, тахикардией, учащением дыхания и потерей аппетита. Через 1—2 сут начинается резкий подъём темп-ры. В это время у больных животных отмечаются гиперемия слизистой оболочки носа и носовое истечение, к-рое в дальнейшем становится слизистым. В тяжёлых случаях лицевая часть головы покрывается липкими выделениями, засыхающими в виде корочек, под к-рыми образуются эрозии. У нек-рых животных — жёсткий сухой кашель, в ротовой полости,— гиперемированные участки. Часто подобные дефекты обнаруживают на носовом зеркальце, ноздрях и во влагалище. Иногда осн. клинич. признаком является хромота. Длительность его после переболевания колеблется от 4—5 мес до 2—5 лет. При наличии у коров специфических антителноворожденные телята получают их с молозивом, что может предохранить их от заболевания в течение нескольких недель. Вакцина есть. Человек не болеет. Вирус выделяют на первичных культурах клеток тестикул быка, селезенки или почки эмбриона коровы и типируют в РН в культуре клеток, РИД, РСК, РИФ.