3. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Цель: Прямая диагностика мутаций на уровне ДНК. Используется для диагностики генных болезней.
3.1.Основные методы
1.Полимеразная цепная реакция (ПЦР): Фундаментальный метод, позволяющий амплифицировать (многократно скопировать) специфический участок ДНК. Это основа для большинства других методов.
2.Методы ДНК-диагностики:
o Прямые методы: Обнаруживают конкретную, известную мутацию.
ПДРФ-анализ |
(Полиморфизм |
Длины |
Рестрикционных |
||
Фрагментов): |
Использует |
ферменты-рестриктазы, |
которые |
||
разрезают ДНК в строго определенных местах. Наличие мутации может изменять сайты рестрикции.
Секвенирование ДНК: "Золотой стандарт" — определение точной последовательности нуклеотидов в гене.
oКосвенные методы: Используются, когда ген известен, но мутация не идентифицирована. Основаны на анализе сцепления с ДНК-маркерами.
Что такое маркеры? Это полиморфные участки ДНК, которые не вызывают болезнь, но расположены близко к исследуемому гену
инаследуются вместе с ним. К ним относятся:
ОНП (Однонуклеотидный полиморфизм).
Повторяющиеся последовательности (микро- и минисателлиты).