Лабораторные методы диагностики наследственных заболеваний

Общая цель: подтвердить клинический диагноз, выявить носительство патологического гена, провести дородовую и раннюю постнатальную диагностику для профилактики и лечения.

1.1. Основные понятия

•Кариотип — это полный набор хромосом соматической клетки, характеризующийся их числом, размером и формой. Нормальный кариотип человека: 46, XX (женский) и 46, XY (мужской).

•Половой хроматин (Х-хроматин, или тельце Барра) — это неактивная, спирализованная Х-хромосома в ядрах соматических клеток женщин. Образуется для дозированной компенсации генов (в норме у женщин одна из двух Х-хромосом инактивируется).

oЧто это такое? Плотное гетерохроматиновое тельце, расположенное на периферии ядра, чаще у ядерной мембраны. Окрашивается основными красителями.

oДиагностическое значение: Определение пола и числа Х-хромосом.

В норме у женщин в 20-40% клеток обнаруживается 1 тельце Барра.

У мужчин (кариотип 46,XY) половой хроматин отсутствует.

При синдроме Клайнфельтера (47,XXY) у мужчин обнаруживается 1 тельце Барра.

При синдроме трипло-X (47,XXX) у женщин обнаруживается 2 тельца Барра.

Формула: Число телец Барра = Число Х-хромосом - 1.

1.2.Этапы цитогенетического исследования

1.Получение препаратов митотических хромосом:

oМатериал: Лимфоциты периферической крови (наиболее частый метод), клетки костного мозга, фибробласты кожи.

oСтимуляция деления: Лимфоциты стимулируют фитогемагглютинином

(ФГА).

oОстановка деления: На стадии метафазы колхицином, который разрушает веретено деления.

oОбработка гипотоническим раствором: Клетки набухают, хромосомы "расползаются".

oФиксация и приготовление препарата.

2.Окраска хромосом:

oРутинная (G-окраска по Гимзе): Позволяет идентифицировать каждую хромосому по характерной исчерченности. Это основа для составления идиограммы — систематизированного изображения хромосомного набора.

oДругие методы: Q-окраска (флюоресценция), R-окраска (обратная G), C-окраска (для центромерных районов).

1.3.Показания для проведения цитогенетических исследований

•Множественные врожденные пороки развития (МВПР).

•Задержка психомоторного развития у ребенка.

•Нарушения половой дифференцировки.

•Подозрение на распространенные хромосомные синдромы (Дауна, Эдвардса, Патау, «кошачьего крика»).

•Бесплодие или привычное невынашивание беременности.

•Наличие в семье ребенка с хромосомной патологией.