Неподвижная фаза
Для проведения хроматографии в тонком слое необходима пластинка, покрытая тонким сорбентом. В качестве сорбента в пластинках чаще всего используются:
модифицированный и немодифицированный силикагель;
целлюлоза;
оксид алюминия;
оксид циркония;
оксид титана;
ионообменные смолы.
В ТСХ сорбент нанесен в виде слоя суспензии с последующим испарением жидкости на стеклянную, алюминиевую или полимерную (полиэтилентерефталат) основы (твердая подложка). В качестве связующих веществ может использоваться гипс (5-10 %), силиказоль, силикаты щелочных металлов, полиакриламид, полиакриловый эфир, крахмал.
Хроматографические пластинки могут содержать флуоресцентный индикатор для детектирования веществ, поглощающих в ультрафиолетовой области спектра при 254 и 365 нм: смесь силикатов цинка и магния; смесь сульфидов цинка и кадмия; вольфраматы щелочноземельных элементов. На эффективность разделения значительное влияние оказывают диаметр частиц, среднее распределение частиц по размерам и размер пор.
Чем меньше размер частиц и чем более узкое распределение частиц по размерам, тем выше эффективность разделения. Диаметр частицы стандартных силикагелей лежит в области от 5 до 40 мкм.
В зависимости от зернения сорбента ТСХ подразделяют на: ТСХ, если размер зерна лежит между 10 и 40 мкм, ВЭТСХ, если диаметр зерна составляет 3, 5, 7 или 10 мкм. Меньший диаметр зерна в ВЭТСХ способствует лучшей эффективности разделения. Большая поверхность означает более интенсивное взаимодействие между пробой и стационарной фазой и, вместе с тем, большую силу адсорбции, а потому и более сильное удерживание. Поверхность стандартных силикагелей составляет от 400 до 600 м2/г. Типичная величина объема пор – это 0,8 мл/г, типичная величина диаметра пор – 100 нм.
Аналитические ТСХ пластины как правило имеют размер частиц 5-20 или 5-17 мкм, пластины для высокоэффективной тонкослойной хроматографии содержат сорбент с диаметром частиц 8-12 или 5-7 мкм (Рисунок 2). При использовании высокоэффективная тонкослойная хроматографии, эффективность разделения увеличивается как вследствие увеличения площади раздела подвижной и неподвижной фазы за счет уменьшения диаметра частиц сорбента, так и благодаря большей однородности размеров этих частиц.
Рисунок
2 – Распределение частиц по размерам
сорбента для ТСХ и ВЭТСХ
Подготовка пластин: для очистки, как правило, через пластинку один раз пропускают смесь хлороформ/метанол (1:1) или используемый в дальнейшем элюент, причем дают подняться фронту выше, чем это планируется для собственно разделения.
Адсорбция на поверхности сорбента деактивирующих соединений понижает его активность. Как правило, речь идет о полярных веществах. Деактивация обычных ТСХ пластинок обычно происходит вследствие адсорбции водяного пара из воздуха, когда полярные молекулы воды связываются с активными центрами сорбента и уменьшают его активную поверхность. Равновесие сорбции-десорбции воды из воздуха, которое зависит от относительной влажности воздуха, устанавливается за несколько минут. Так как подготовка пластинок и нанесение пробы, как правило, занимают больше времени, то активность сорбента после несения пробы определяется в основном относительной влажностью воздуха в лаборатории.
Подготовка пластин: для очистки, как правило, через пластинку один раз пропускают смесь хлороформ/метанол (1:1) или используемый в дальнейшем элюент, причем дают подняться фронту выше, чем это планируется для собственно разделения.
Адсорбция на поверхности сорбента деактивирующих соединений понижает его активность. Как правило, речь идет о полярных веществах. Деактивация обычных ТСХ пластинок обычно происходит вследствие адсорбции водяного пара из воздуха, когда полярные молекулы воды связываются с активными центрами сорбента и уменьшают его активную поверхность. Равновесие сорбции-десорбции воды из воздуха, которое зависит от относительной влажности воздуха, устанавливается за несколько минут. Так как подготовка пластинок и нанесение пробы, как правило, занимают больше времени, то активность сорбента после несения пробы определяется в основном относительной влажностью воздуха в лаборатории.