13. Микробная биоплёнка и её роль в этиологии болезней пародонта.

Биоплёнки — это устойчивые структуры, образуемые микроорганизмами, которые прочно закрепляются на поверхностях зубов, дёсен, имплантатов и СОПР. Биоплёнки становятся причиной множества заболеваний полости рта, включая кариес зубов, пародонтит, периимплантит, а также могут быть источником инфекционных осложнений после стоматологических манипуляций, таких как чистка зубов или установка имплантатов.

Они сгруппированы в микроколонии, окруженные обволакивающим слизисто-полимерным экзополисахаридным-муциновым матриксом, содержащим внутреннюю среду с регулируемым микроэлементным составом и сигнальными веществами, продуцируемыми микроорганизмами одного вида для других симбионтов. Матрикс пронизан каналами, по которым циркулируют питательные вещества, продукты жизнедеятельности, ферменты, метаболиты и кислород.

Эти микроколонии имеют свои микросреды, отличающиеся уровнями pH, усваиваемостью питательных веществ, концентрациями кислорода.

Бактерии в биоплёнке "общаются между собой" посредством химических раздражений (сигналов). Эти химические раздражения вызывают выработку бактериями потенциально вредных белков и ферментов. Слизистый матрикс обеспечивает устойчивость биоплёнки к воздействиям извне, выполняет адгезивную, транспортную и дренажную функции для населяющих его микробов. С пониманием сути биоплёнки было показано, что существуют большие различия в поведении бактерий в лабораторной культуре и в их естественных экосистемах.

Находясь в биоплёнке, бактерии вырабатывает такие вещества, которые они не продуцирует, будучи в культуре. Кроме того, матрикс, окружающий микроколонии, служит защитным барьером для организма-хозяина от колонизации патогенами.

Основными свойствами биоплёнки являются:

1. взаимодействующая общность разных типов микроорганизмов (микробиоценоз)

2. микроорганизмы образуют микроколонии

3. микроколонии окружены защитным матриксом, пронизанным каналами, по которым циркулируют питательные вещества, продукты жизнедеятельности, ферменты, метаболиты и кислород

4. микроорганизмы имеют определенную систему связи

5. микроорганизмы в биоплёнке устойчивы к некоторым агрессивным факторам макрорганизма и внешней среды.

В состав норм микробной биоплёнки ПР могут внедряться представители агрессивных видов, которые получили название пародонтопатогенных: Actinobacillus actinomycetemcomitans, Bacteriodes forsithus, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia Tannerella forsythia.

Характеристики пародонтопатогенов:

- внутриклеточный паразитизм

- активный синтез токсичных субстанций

- контагиозность (заразность)

Выделяют пародонтопатогены 1-го порядка - Actinobacillus actinomycetemcomitans, Bacteriodes forsithus, обладают всеми тремя признаками.

Возбудители, для которых доказано наличие 1-2 признаков, относятся к пародонтопатогенам 2-го порядка, Prevotella intermedia Tannerella forsythia и др.

Это помогает объяснить, почему механическое удаление бляшек и личная гигиена ротовой полости продолжают оставаться неотъемлемой составной частью лечения заболеваний пародонта. Биоплёнки можно удалить механическими средствами, разрушить антисептиками, детергентами и антибиотиками, однако они немедленно начинают восстанавливаться.

Все микробы, формирующие биоплёнку в ПР, можно разделить на ранних (первичных), промежуточных и поздних (вторичных) колонизаторов:

Типы колонизаторов:

1. Ранние (первичные): Streptococcus oralis, S. sanguis, Actinomyces, Veillonella и др. Эти микроорганизмы закрепляются на зубной пелликуле благодаря адгезинам и подготавливают поверхность для следующих колонизаторов.

2. Промежуточные: F. nucleatum, который соединяет ранние и поздние виды.

3. Поздние (вторичные): A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis, Treponema spp. и др.

Механизм формирования биоплёнок начинается с прикрепления отдельных клеток микроорганизмов к поверхности зубов или других тканей, что происходит через специфические молекулы адгезии. Этот процесс начинается с адгезии первичных микроорганизмов, таких как Streptococcus mutans. В дальнейшем присоединяются промежуточные микроорганизмы, создавая сложную многослойную структуру. И по такой же схеме добавляются вторичные микроорганизмы.

Роль биоплёнок в инфекционных осложнениях - Микроорганизмы, входящие в состав биоплёнок, вырабатывают токсины, которые могут вызывать воспаление тканей, окружающих зубы и десны.

14. Лабораторные методы диагностики заболеваний пародонта (исследование качественного состава десневой жидкости, цитология содержимого пародонтальных карманов, микробиологическое и гистологическое исследование)

Цитология – метод, который основывается на математической обработке результатов цитограмм и количественной оценке содержания различных клеточных элементов.

Цель – определить уровень защитных реакций организма, степень фагоцитоза

Методика: заготовленные резиновые клинья, предварительно хранящиеся в чашках Петри, залитые 70 % раствором этилового спирта, вводят в десневую борозду - одна поверхность мишени должна касаться зуба, а вторая — внутренней поверхности десневой бороздки. Затем цитологический материал переносят в виде отпечатков на предметное стекло. С каждого зуба получают два типа отпечатков: один — с десны, другой — с зуба. После цитологический материал отправляют на микроскопическое исследование.

2 вариант: Пародонтальные карманы предварительно промывают изотоническим раствором хлорида натрия, стерильной корневой иглой с турундой производят забор материала. Исследуемый материал распределяется на предметном стекле. Препарат фиксируют и окрашивают по Граму и Гимзе-Романовскому. Далее материал высушивается и микроскопируется при помощи светового микроскопа

Исследование качественного состава десневой жидкости

Для забора десневой жидкости для количественного исследования применяется внутрибороздковый забор с использованием полосок фильтровальной бумаги 15*4 мм.

Десневую жидкость берут в области зубов 16, 1 1, 24, 31, 36, 44. Перед этим область исследования очищают от налёта, изолируют от слюны и высушивают. Затем бумажную полоску вводят в десневую борозду пародонтальный карман или в область межзубного промежутка на 3 мин.

Количество десневой жидкости определяют путём взвешивания, или измерения площади пропитывания бумаги.

При интактном пародонте площадь пропитывания фильтровальной бумаги десневой жидкостью равна 0—0,5 мм² (не боле 0,06 мг по весу), при хроническом катаральном гингивите — 0,5—1 мм², при хроническом пародонтите— 1—2 мм² и более.

Микробиологическое исследование и Гистологическое исследование

Цель – определить возбудителей для подбора АБ терапии

Методика: Забор материала производят стерильной ватной турундой на глубине 2 мм. Затем концевую часть турунды промывают 10 мл изотонического раствора хлорида натрия, получают взвесь микроорганизмов. Посев культуры проводят в чашке Петри, после чего подсчитывают колонии микроорганизмов.

Результаты: количество колоний при заболеваниях пародонта = степени развития воспаления пародонтита (то есть их очень много)

Для оценки факторов местной иммунологической реактивности используют реакцию адсорбции микроорганизмов.

Путём соскоба берут мазок со здорового участка слизистой оболочки десны и окрашивают по Романовскому. При микроскопическом исследовании подсчитывают количество кокков, адсорбированных на поверхности эпителиальных клеток, которые делят на 4 группы:

1 - эпителиальные клетки, на поверхности которых нет адсорбированных микроорганизмов или единичные кокки

2 - от 5 до 25 кокков на поверхности клетки

3 - от 25 до 50 кокков на поверхности клетки

4 - 50 и более кокков на поверхности клетки

1 и 2 группы клеток характеризуют отрицательную РАМЭК, а 3 и 4 группы – положительную РАМЭК.

При РАМЭК 70% и выше - неспецифическая резистентность организма хорошая, 30-60% - удовлетворительная, меньше 30% - неудовлетворительная. Тут, наверное, делается шкала, где 0% - отрицательная реактивность (3, 4 группы), а 100% - положительна (1, 2)