модуль вирусология 2
.pdf
модуль вирусология 2
1. титрование вирусов по инфекционному действию
титр вируса — количественное содержание вируса в единице объёма исследуемого материала. используется для сравнения активности вирусных препаратов и оценки инфекционности.
титрование основано на биологическом действии вируса и выражается в условных единицах.
основные способы титрования
по образованию локальных поражений (БОЕ, ООЕ)
по 50% инфекционному действию (ЭД50 и производные)
по гемагглютинирующей активности (ГАЕ)
титрование по 50% инфекционному действию
основано на определении дозы вируса, вызывающей инфекционный эффект у 50% тест-объектов.
используемые показатели:
ЛД50 — гибель 50% животных ИД50 — клинические проявления у 50%
ЦПД50 — цитопатический эффект в 50% культур клеток
методика:
готовят десятикратные разведения вируса заражают группы тест-объектов учитывают наличие или отсутствие эффекта
титр рассчитывают статистически (метод Рида–Менча)
метод универсален, подходит для большинства вирусов, но требует времени и строгого учёта.
2. использование РСК для типизации вируса ящура, характеристика компонентов
реакция связывания комплемента (рск) применяется для определения типа вируса ящура по наличию специфических антител. принцип: антитело в сыворотке связывается с антигеном вируса, фиксирует комплемент; при добавлении гемолитической системы гемолиз эритроцитов не происходит → положительная реакция.
компоненты рск:
антиген: экстракт оболочек пузырьков афты здоровых животных (50% глицерин, фосфатный буфер, рН 7,6), приготовленный после центрифугирования; используется цельным (33%) и в разведениях 1:2, 1:4, 1:8.
гемолизин: титруется 1:1500–1:5000; рабочее разведение = 4× титр; вызывает гемолиз эритроцитов при отсутствии фиксации комплемента.
комплемент: титруется в день реакции; используется ≥2,5% для определения типов; для главного опыта берется с излишком 1%; фиксируется при образовании комплекса антиген + антитело.
контрольные пробы: проверка компонентов реакции параллельно с главным опытом.
результат учитывают по гемолизу эритроцитов:
положительная реакция – гемолиз отсутствует (антитело связывает комплемент);
отрицательная – гемолиз присутствует (комплемент свободен).
3. реакция диффузионной преципитации (РДП) в агаре
РДП применяется для диагностики вирусного гепатита плотоядных, бешенства, лейкоза КРС, инфекционной анемии лошадей и других вирусных заболеваний.
общая характеристика
реакция простая по технике
высокоспецифичная, но менее чувствительная, чем другие серологические реакции 
используется в основном для ретроспективной диагностики
сущность реакции
специфические антиген и антитело, помещённые на расстоянии друг от друга в агаровом геле, диффундируют навстречу друг другу. в месте их встречи образуется полоса преципитации, видимая при боковом освещении на тёмном фоне.
при отсутствии соответствия антигена и антител полосы не образуются.
компоненты реакции
антиген 
сыворотка с антителами
реакция проходит в 1%-ном агарном геле в присутствии физиологического раствора NaCl.
постановка реакции (кратко)
реакцию ставят в чашках Петри или на предметных стеклах
в застывшем агаре делают лунки, куда вносят антиген и сыворотки
инкубируют при 37 °C во влажной камере
учет реакции
учет проводят через 24–48 часов (иногда до 72 часов).
положительная реакция — появление серо-белой полосы преципитации между лунками со специфическими компонентами.
отрицательная реакция — отсутствие полос.
контроль реакции
обязательно ставят:
стандартный антиген + стандартная сыворотка (положительный контроль)
нормальная сыворотка + антиген (отрицательный контроль)
формула для запоминания
диффузия антигена и антитела в агаре → встреча → преципитационная полоса
4. реакция гемагглютинации (РГА)
РГА применяется для обнаружения вирусов, обладающих способностью агглютинировать эритроциты.
гемагглютинирующими свойствами обладают вирусы, вирионы которых имеют на поверхности рецепторы, способные связываться с рецепторами мембран эритроцитов. в результате вирус адсорбируется на эритроцитах и склеивает их.
сущность реакции
при смешивании вируссодержащего материала с взвесью эритроцитов происходит их агглютинация, проявляющаяся образованием хлопьев.
в пробирке или лунке планшета агглютинация выглядит в виде осадка типа «зонтика», при отрицательной реакции эритроциты оседают плотным диском.
положительная РГА указывает:
на наличие вируса в материале
на его гемагглютинирующую активность
на специфичность к определённому виду эритроцитов
применение РГА
РГА используют для:
индикации вирусных антигенов
титрования вируссодержащих материалов
ориентировочной диагностики вирусных инфекций
очистки и концентрирования вирусов
постановка реакции (кратко)
ориентировочную РГА ставят на предметных стеклах классическую РГА проводят в пробирках или лунках планшета с двукратными разведениями вируса в каждое разведение добавляют 1% взвесь отмытых эритроцитов обязательно ставят контроль стабильности эритроцитов
учет реакции
учёт проводят через 30–120 минут (в зависимости от вида эритроцитов).
положительная реакция — осадок в виде «зонтика» или кружевного рисунка отрицательная реакция — плотный диск эритроцитов с ровными краями
титр вируса
титром вируса считают наибольшее разведение вируссодержащего материала, при котором гемагглютинация оценивается не ниже ++.
формула для запоминания
вирус + эритроциты → агглютинация → «зонтик» = РГА положительная
5. реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
принцип реакции
РТГА основана на способности специфических антител иммунной сыворотки связываться с вирусным антигеном и подавлять гемагглютинирующую активность вируса, что проявляется отсутствием агглютинации эритроцитов.
применение РТГА
РТГА используют для:
идентификации и типизации вирусов титрования вируссодержащих материалов серологической диагностики вирусных инфекций оценки напряжённости иммунитета
постановка реакции (кратко)
готовят последовательные разведения исследуемой сыворотки
во все лунки добавляют оттитрованный вирус в дозе, соответствующей 4 гемагглютинирующим единицам
инкубируют 10–15 минут при комнатной температуре для взаимодействия вируса с антителами
затем добавляют 1% взвесь эритроцитов
инкубируют при комнатной температуре
учет реакции
положительная реакция — отсутствие гемагглютинации в опыте при наличии её в контроле
отрицательная реакция — наличие гемагглютинации
титр антител
титром антител считают наибольшее разведение сыворотки, при котором ещё полностью тормозится гемагглютинация.
формула для запоминания
антитела + вирус → гемагглютинация не происходит = РТГА положительная
6. реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)
РНГА — более чувствительная и специфичная серологическая реакция по сравнению с прямой РГА, широко применяемая в диагностике вирусных болезней.
принцип реакции
некоторые вирусы способны адсорбироваться на эритроцитах, но сами по себе не вызывают их агглютинацию.
если такие эритроциты, сенсибилизированные вирусным антигеном, смешать со специфической иммунной сывороткой, антитела вызывают
агглютинацию эритроцитов.
диагностикумы
используют эритроцитарные диагностикумы:
эритроциты предварительно обрабатывают таннином
затем на них адсорбируют вирус (антиген) → для выявления антител
или антитела → для выявления вируса
такие диагностикумы выпускаются промышленно.
применение РНГА
РНГА используют для:
выявления антител в сыворотке крови
выявления вируса в патологическом материале
идентификации и типизации вирусов
диагностики вирусов, не обладающих гемагглютинирующей активностью
постановка реакции (кратко)
в пробирки вносят разведённую исследуемую сыворотку добавляют взвесь сенсибилизированных эритроцитов ставят положительный и отрицательный контроль
инкубируют 40–60 минут при комнатной температуре или в термостате
учет реакции
положительная реакция — агглютинация эритроцитов (наличие антител или вируса)
отрицательная реакция — отсутствие агглютинации
формула для запоминания
эритроцит + адсорбированный вирус → + антитела → агглютинация = РНГА +
7. реакция нейтрализации (РН)
реакция нейтрализации (РН) — одна из основных серологических реакций в вирусологии.
она отличается высокой специфичностью и чувствительностью и считается эталонной при оценке других серологических реакций.
сущность реакции
при вирусных инфекциях в крови образуются вируснейтрализующие антитела, которые при взаимодействии с вирусом способны
обезвреживать его инфекционные свойства.
нейтрализация может происходить:
in vivo — в организме
in vitro — в лабораторных условиях
принцип реакции
вирус смешивают со специфической иммунной сывороткой и вводят:
лабораторным животным куриным эмбрионам в культуру клеток
если в сыворотке есть нейтрализующие антитела, вирус теряет патогенность:
животные не заболевают
эмбрионы не погибают
в культуре клеток отсутствует цитопатический эффект (ЦПД)
биологические модели РН
РН ставят на той биологической системе, которая чувствительна к данному вирусу:
лабораторные животные
куриные эмбрионы
культуры тканей (клеток)
значение и применение РН
РН используют для:
серологической диагностики вирусных инфекций
идентификации и типизации вирусов
определения защитного иммунитета
оценки эффективности вакцинации
формула для запоминания
вирус + специфические антитела → нет болезни / нет ЦПД = РН положительная
8. реакция гемадсорбции (РГАд)
гемадсорбция (гад) — это метод выявления вирусов в культурах клеток, основанный на специфическом соединении эритроцитов с поверхностью инфицированных клеток. взаимодействие происходит за счет родства вирусных рецепторов на клеточной мембране с рецепторами эритроцитов, что приводит к их сцеплению. по сути, реакция аналогична гемагглютинации, но преимущество гемадсорбции в том, что она становится положительной еще до появления выраженных цитопатических изменений в клетках, что позволяет выявлять вирусы на ранних стадиях инфекции.
методика постановки:
1.на 3–4 день после инфицирования культуры клеток удаляют часть культуральной жидкости;
2.вносят 2–3 капли 0,5% суспензии отмытых эритроцитов;
3.выдерживают 5–10 минут, затем промывают физиологическим раствором;
4.под микроскопом оценивают адсорбцию эритроцитов: в контрольной пробирке эритроциты смываются, в зараженной — остаются прикрепленными к поверхности клеток (положительная реакция).
особенности адсорбции:
расположение эритроцитов зависит от вида вируса и типа клеток:
«ожерелье» по периферии клеточной массы (например, вирус африканской чумы свиней);
очагами и скоплениями на слое клеток (вирус гриппа);
диффузно по слою клеток (вирус парагриппа).
при отсутствии реакции на 3–4 день повторяют через каждые 2–3 дня в новых пробирках; культура наблюдается 14–20 дней, при необходимости проводится следующий пассаж.
эритроциты для реакции:
используют эритроциты различных животных, чувствительные к гемагглютинирующему действию вируса: морской свинки, обезьян, человека (группа
0) и др.
каждый вирус способен адсорбировать эритроциты определенного вида, что позволяет использовать гад для специфичной идентификации.
применение:
метод применяется преимущественно для индикации респираторных вирусов и некоторых других вирусов в патологическом материале;
позволяет количественно определять содержание вирусов;
незаменим для раннего обнаружения вирусов парагриппа-3 крупного рогатого скота, парагриппа овец, африканской чумы свиней и некоторых других патогенов.
гемадсорбция ценна тем, что дает возможность ранней диагностики вирусных инфекций, сокращая время ожидания цитопатических изменений и позволяя оценить вирусное заражение до выраженной морфологической реакции клеток.
9. реакция задержки гемадсорбции (РЗГАд)
реакция задержки гемадсорбции (рзгад) — это метод серологического выявления вирусов, основанный на взаимодействии специфических противовирусных иммуноглобулинов (антител) с вирусными антигенами, развивающимися в клетках культуры ткани. принцип реакции заключается в том, что антитела гипериммунной сыворотки блокируют антигены вируса, препятствуя адсорбции эритроцитов на поверхности зараженных клеток. таким образом, положительный результат рзгад проявляется свободным плаванием эритроцитов в растворе, а отрицательный — прикреплением эритроцитов к инфицированным клеткам.
применение рзгад:
обнаружение вирусов в культуре клеток;
идентификация и типизация вирусов по их антигенным свойствам;
количественное определение вирусной нагрузки в исследуемом материале.
методика постановки:
1.из пробирок с инфицированными клетками удаляют питательную среду с помощью стерильной пипетки;
2.клетки отмывают 3–5 мл стерильного раствора Хенкса для удаления белковых остатков среды, через 1–2 минуты раствор также удаляют;
3.в опытные пробирки добавляют 0,6 мл раствора Хенкса и 0,2 мл противовирусной сыворотки в разведении 1:10, в контрольную — 0,8 мл раствора Хенкса;
4.пробирки фиксируют в наклонном положении, чтобы клетки оказались внизу и покрыты соответствующими растворами, выдерживают 15–20 минут при комнатной температуре;
5.затем во все пробирки добавляют 0,2 мл 0,4% суспензии эритроцитов и выдерживают в наклонном положении 3–5 минут;
6.пробирки осторожно вращают 5–10 раз вокруг вертикальной оси, чтобы ресуспендировать осевшие, но не адсорбировавшиеся эритроциты;
7.оценивают под микроскопом:
положительная рзгад — эритроциты свободно плавают, не адсорбированы; отрицательная рзгад — эритроциты прочно прикреплены к поверхности инфицированных клеток.
особенности и преимущества метода:
позволяет выявлять вирусы на ранних стадиях инфекции до появления заметных цитопатических изменений;
обеспечивает высокую специфичность за счет использования гипериммунной сыворотки;
применим для вирусов, способных адсорбировать эритроциты определенного вида, что также помогает при их типизации;
метод дает количественные данные о вирусной нагрузке, что полезно для оценки эффективности антигенных реагентов и динамики вирусной инфекции.
рзгад широко используется для диагностики респираторных и некоторых других вирусов, особенно там, где требуется раннее выявление и точная идентификация патогенов, таких как парагрипп крупного рогатого скота, парагрипп овец и африканская чума свиней. этот метод дополняет классическую гемадсорбцию и является ценным инструментом серологической диагностики вирусных инфекций.
10. ПЦР и метод ДНК-зондов в вирусологии
полимеразная цепная реакция (пцр) и метод днк-зондов — это высокочувствительные молекулярные методы обнаружения вирусов, позволяющие идентифицировать возбудителя на уровне нуклеиновой кислоты с высокой специфичностью и скоростью.
преимущества пцр
1.выявление вирусов независимо от фенотипической изменчивости;
2.обнаружение некультивируемых форм вирусов;
3.высокая чувствительность (10³–10 кoe/мл);
4.высокая специфичность (до 100%);
5.быстрое проведение анализа (4–6 часов);
6.возможность полной автоматизации;
7.возможность одновременного выявления нескольких возбудителей.
принцип пцр
днк состоит из двух цепей с азотистыми основаниями, соединенными водородными связями (A–T, G–C).
при нагревании до 92–100°С происходит денатурация — разделение цепей; при снижении температуры — ренатурация.
метод основан на многократном избирательном копировании определённого участка ДНК in vitro, амплифицируя короткие фрагменты (обычно ≤3000 п.н., при специальных условиях 20–40 тыс. п.н.).
компоненты реакционной смеси
1.праймеры — синтетические олигонуклеотиды (15–30 п.н.), комплементарные началу и концу амплифицируемого участка, задают специфичность реакции.
2.термостабильная полимераза (Taq, Pfu, Pwo) — фермент, синтезирующий комплементарную цепь ДНК с 3'-конца праймера.
3.дезоксинуклеотидтрифосфаты (дНТФ: дАТФ, дГТФ, дЦТФ, дТТФ) — «строительный материал» для синтеза ДНК, концентрация ~0,2 мМ.
4.анализируемый образец — источник ДНК или РНК, содержащей искомый участок.
5.буфер с ионами Mg² (1,5–2 мМ) — оптимальные условия работы полимеразы, стабилизация pH; содержит соли, альбумин, ПЭГ, глицерин.
6.вазелиновое масло — предотвращает испарение, если нет амплификатора с подогревающейся крышкой.
этапы пцр
1.денатурация — расплетение двухцепочечной ДНК (92–95°С).
2.отжиг — присоединение праймеров к одноцепочечной матрице, строго по принципу комплементарности.
3.элонгация (синтез) — достраивание второй цепи полимеразой при оптимальной температуре.
для рнк-содержащих вирусов предварительно выполняют обратную транскрипцию с ревертазой для получения кДНК.
учет результатов: ампликоны анализируют электрофорезом (сравнение с контрольной днк) или по флуоресцентной метке на праймерах; фрагменты распределяются по размеру в агарозном геле.
метод днк-зондов
основан на свойстве одноцепочечной нуклеиновой кислоты комплементарно связываться с мишенью вируса и формировать двухцепочечную молекулу. зонд предварительно мечен радиоактивной или цветовой меткой.
этапы метода:
1.получение одноцепочечного днк-зонда — фрагмент вирусной днк или рнк выделяют, внедряют в плазмиду, клонируют, метят и денатурируют для получения одноцепочечной формы.
2.выделение нуклеиновой кислоты из материала — гомогенизация, центрифугирование, разрушение белков (протеиназа, фенол/ хлороформ), осаждение, промывка спиртом, денатурация.
3.гибридизация — контакт зонда с одноцепочечной нуклеиновой кислотой на микропористой мембране; если последовательности комплементарны
— образуется двухцепочечная молекула.
4.обнаружение по метке — авторадиография или визуальная фиксация по изменению цвета; интенсивность сигнала сравнивают с положительным и отрицательным контролем.
метод позволяет выявлять вирусные нуклеиновые кислоты в свежих, замороженных и даже частично разложившихся образцах, обеспечивая высокую специфичность и чувствительность молекулярной диагностики.
11. иммуноферментный анализ (ИФА)
иммуноферментный анализ (ифа) — это группа методов, основанных на использовании ферментов в качестве меток на антигенах или антителах, позволяющая выявлять вирусы и антитела к ним с высокой специфичностью и чувствительностью. ифа применяется для ранней диагностики инфекционных болезней, массовых эпидемиологических и эпизоотологических исследований, контроля качества продукции и соблюдения санитарных норм на предприятиях.
направления применения ифа
1.выявление и идентификация вируса в материале от животных;
2.определение антител у реконвалесцентов;
3.оценка уровня поствакцинальных антител;
4.массовое обследование большого числа образцов с использованием автоматизированных систем.
гистохимический вариант — иммунопероксидазная реакция
аналогична иммунофлуоресценции, но метка — фермент (пероксидаза), а учет проводят под обычным световым микроскопом.
преимущества пероксидазы: малая молекулярная масса (40 кДа) улучшает проникновение через клеточную мембрану, высокая устойчивость при гистологической обработке.
материал для исследования: мазки-отпечатки органов, парафиновые срезы, культура клеток, мазки крови.
носоглоточные смывы используют ограниченно из-за эндогенной пероксидазы; для инактивации применяют азид натрия, перекись водорода и фенилгидразин.
методика прямого метода:
1.фиксация клеток на стеклах ацетоном (-10–-20°С, 10 мин);
2.высушивание и нанесение иммунопероксидазного конъюгата (0,2–0,3 мл);
3.инкубация 1–2 ч (при необходимости до 6 ч) при 37°С во влажной камере;
4.промывка физиологическим раствором и дистиллированной водой, высушивание;
5.нанесение субстрата (диаминобензидинтетрахлорид), инкубация 5–10 мин, промывка;
6.учет под световым микроскопом: положительный результат — образование цветного продукта (желто-коричневого или гранул коричнево-черного цвета).
непрямой метод:
используется для повышения чувствительности;
после инкубации с первичными антителами добавляют антивидовой конъюгат, образуя комплекс: антиген — антитело — вторичное антитело — фермент;
далее добавляют субстрат, который под действием фермента окрашивается, и оценивают результат.
применение: выявление вирусов бешенства, ящура, герпесвирусов, энтеровирусов и других.
твердофазный ифа
основан на фиксации антител или антигенов на нерастворимых носителях (полистироловые микропанели, стеклянные или керамические пробирки).
автоматизация процесса (пипетки, промывочные устройства, считывающие приборы) позволяет исследовать большое число образцов за короткое время.
визуальный учет возможен при использовании цветных субстратов:
ОФД — оранжево-коричневая окраска;
5-аминосалициловая кислота — интенсивно-коричневый цвет;
щелочная фосфатаза — желтая окраска.
положительный результат: оптическая плотность опытных образцов превышает контрольные в 5–10 раз.
особенности:
автоматизированный учет с помощью спектрофотометрии;
визуальная оценка позволяет проводить массовые исследования даже вне стационарных лабораторий.
иммуноферментный анализ сочетает высокую чувствительность и специфичность с возможностью массового обследования, делая его незаменимым инструментом в ветеринарной вирусологии и эпидемиологии.
12. классификация противовирусных вакцин
вакцина — это биологический препарат, содержащий возбудителей инфекции, лишенных патогенности, но сохраняющих иммуногенные свойства. она предназначена для формирования иммунитета у животных или человека.
источники вируссодержащего материала
живые биологические системы: животные, куриные эмбрионы, культуры клеток.
в зависимости от системы различают:
тканевые вакцины — содержат животные ткани с размноженным вирусом (например, мозговая ткань овец для вакцины против бешенства);
авинизированные вакцины — получены из эмбриональных тканей и жидкостей кур, уток, перепелов (например, для вакцин против птичьего гриппа, болезни Ньюкасла);
культуральные вакцины — из зараженных клеточных культур или переживающих тканей, используют роллерный или суспензионный методы культивирования (например, вакцины против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, ящура).
по видовой принадлежности вируса
гомологические — из того вида вируса, против которого создают иммунитет (например, вакцины против вирусной диареи, чумы крупного рогатого скота, бешенства);
гетерологические — из вирусов другого вида с перекрестной иммуногенностью (например, оспа голубей для защиты кур, вирус герпеса индеек для болезни Марека у кур).
по составу
моновалентные — антигены одного типа или вида вируса;
поливалентные — несколько типов одного вируса (например, трехвалентная противоящурная вакцина — типы А, O, C);
ассоциированные — антигены разных видов (например, вакцина «Бивак» — против инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3);
смешанные — смесь вирусных и бактериальных антигенов (например, вакцина против чумы плотоядных, ботулизма и вирусного энтерита собак).
по жизнеспособности вируса
живые вакцины — содержат ослабленные (аттенуированные) штаммы вирусов;
инактивированные вакцины — содержат вирусы, обезвреженные физическими или химическими методами.
по типу вакцинного препарата
цельновирионные — включают живые и инактивированные вакцины;
компонентные — сплит-вакцины, субъединичные, синтетические и генно-инженерные вакцины, содержащие отдельные фрагменты вируса, а не цельный вирион.
такая классификация позволяет выбирать оптимальные вакцины для профилактики конкретных вирусных заболеваний, учитывая вид вируса, форму выпуска, иммуногенность и способ применения.
13. аденовирусы. аденовирусная инфекция КРС
аденовирус – днк-содержащий вирус семейства adenoviridae, вызывающий широкий спектр заболеваний у человека и животных. чаще всего поражает дыхательные пути (ринит, фарингит, бронхит), глаза (конъюнктивит), кишечник и лимфоидные ткани. передается воздушно-капельным, контактнобытовым и фекально-оральным путями, устойчив во внешней среде, но легко инактивируется антисептиками и нагреванием. известно более 50 серотипов с различными клиническими проявлениями.
вирусологические особенности
структура: безоболочечный, ДНК-содержащий, 252 капсомера кубической укладки, размер 70–90 нм.
серотипы: >50 серотипов, объединены в 7 групп (A–G), патогенны многие для человека (например, 3, 4, 7, 14, 41).
устойчивость: сохраняется при низких температурах, высушивании, стойкий к трипсину, эфиру и хлороформу; разрушается при нагревании >56– 60 °C, воздействии спиртов, фенола, хлорамина, перекиси водорода и ультрафиолетовых лучей.
репликация: поражает слизистые оболочки дыхательных путей, конъюнктиву, кишечник, лимфоидную ткань.
аденовирусная инфекция крупного рогатого скота
болезнь: аденовирусная пневмония телят, аденовирусный пневмоэнтерит; острое течение с поражением дыхательных путей, пищеварительного тракта и глаз.
возбудитель: днк-вирус, устойчивый к физико-химическим воздействиям; инактивируется при 56 °C за 30 мин (серотипы 1–3) и при более высокой температуре для других штаммов; сохраняется при минус 30 °C длительно, при 4 °C — более полугода.
культивирование: культуры клеток почек эмбрионов коров и тестикул быков.
антигенные свойства: 9 серологических типов, три растворимых антигена (А — группоспецифичный, В — белковый токсический, С — типоспецифичный).
патогенез
вирус проникает в клетки слизистых оболочек, репродуцируется, вызывает воспаление; разносится с кровью, вызывая бронхопневмонии, энтериты, конъюнктивиты; некоторые штаммы могут участвовать в опухолевом процессе.
эпизоотология
источник: больные животные, вирусоносители.
пути передачи: воздушно-капельный, алиментарный, через конъюнктиву; загрязненные корма, подстилка, навоз.
клиническая картина
инкубационный период: 4–7 суток.
возраст поражаемых: 2 недели–4 месяца.
симптомы: повышение температуры до 41,5 °C, слезотечение, слизистые/гнойные истечения из носа, кашель, одышка, диарея.
смертность: до 60 %, гибель через 1–3 суток.
патологоанатомические изменения
легкие: катаральная, катарально-гнойная пневмония, очаги темно-красного цвета.
кишечник: катарально-геморрагическое воспаление, деструкция эпителия, пропитывание слизистого слоя экссудатом.
печень, почки, сердце: дистрофия (жировая, зернистая, миокард).
лимфатические узлы: гиперплазия, клеточная инфильтрация.
лабораторная диагностика
экспресс-методы: РИФ, РГА, обнаружение телец-включений.
вирусологические исследования: выделение вируса в культурах клеток (тестикул бычка, ПЭК, ЛЭК), идентификация РИФ, РСК, РДП, РН, ИФА.
ретроспективная диагностика: РНГА, РСК, РДП, РТГА.
дифференциальный диагноз: парагрипп-3, вирусная диарея, ИРТ, респираторно-синцитиальная инфекция, хламидиоз.
иммунитет
зависит от титра материнских молозивных антител; пассивный иммунитет сохраняется 1–4 месяца.
профилактика и меры
специфическая профилактика: инактивированные вакцины из штаммов двух серологических групп; поствакцинальный иммунитет — 123–127 суток.
ветеринарно-санитарная оценка: мясо и продукты от больных животных в сыром виде не допускаются; обработка мяса, субпродуктов, шкур, волос дезинфектантами (соль, кислоты, горячие растворы едкого натра, формальдегид, хлорная известь) перед выпуском.
14. вирус парагриппа КРС
парагрипп-3 (пг-3) — острое контагиозное вирусное заболевание крупного рогатого скота, главным образом телят, с поражением верхних дыхательных путей и легких. также называется транспортная лихорадка или параинфлюэнца-3.
возбудитель
тип: рнк-вирус, семейство paramyxoviridae, род parainfluenzavirus-3. размер: 120–150 нм.
антигены: два типа — рибонуклеопротеидный (S) и поверхностный (V); обладает гемагглютинирующими, гемадсорбирующими и гемолитическими свойствами.
устойчивость: быстро разрушается высокой температурой, ультрафиолетом; инактивация при 50–60 °C и обработке формалином.
эпизоотология
возраст поражаемых: телята 10 дней–1 год, взрослые чаще бессимптомные носители.
источник: больные телята, выделяющие вирус с дыханием, слизью, молоком, фекалиями, вагинальными выделениями.
пути передачи: воздушно-капельный, пероральный, возможно половым путем; вертикальный (внутриутробно у стельных коров).
факторы риска: транспортировка, перемещение, стресс, высокая влажность, сквозняки, наличие животных-носителей других инфекций.
заболеваемость: эпизоотические вспышки после поступления новых животных, до 70 %; смертность 2–20 % при смешанных инфекциях.