сокращённая_методичка_2_модуль_вирусология

сокращённая методичка 2 модуль вирусология

занятие 12. методы титрования вирусов

титр вируса — количественное содержание вируса в единице объёма исследуемого материала. используется для сравнения активности вирусных препаратов и оценки инфекционности.

титрование основано на биологическом действии вируса и выражается в условных единицах.

основные способы титрования

по образованию локальных поражений (БОЕ, ООЕ)

по 50% инфекционному действию (ЭД50 и производные)

по гемагглютинирующей активности (ГАЕ)

титрование в бляшкообразующих единицах (БОЕ)

метод основан на способности вируса вызывать локальное разрушение клеточного слоя. 1 БОЕ соответствует одной вирусной бляшке.

методика:

готовят серию разведений вируса

заражают монослой клеток одинаковым объёмом материала

инкубируют до появления бляшек

подсчитывают количество бляшек (оптимально до 50)

титр рассчитывают как отношение среднего числа бляшек к произведению объёма заражения и разведения вируса.

метод отличается высокой точностью, но применим только к вирусам, образующим бляшки.

титрование по 50% инфекционному действию

основано на определении дозы вируса, вызывающей инфекционный эффект у 50% тест-объектов.

используемые показатели:

ЛД50 — гибель 50% животных

ИД50 — клинические проявления у 50%

ЦПД50 — цитопатический эффект в 50% культур клеток методика:

готовят десятикратные разведения вируса

заражают группы тест-объектов

учитывают наличие или отсутствие эффекта

титр рассчитывают статистически (метод Рида–Менча)

метод универсален, подходит для большинства вирусов, но требует времени и строгого учёта.

титрование по гемагглютинации

некоторые вирусы способны агглютинировать эритроциты.

гемагглютинирующая единица (ГАЕ) — минимальное количество вируса, вызывающее агглютинацию эритроцитов.

методика:

готовят двукратные разведения вируса

добавляют стандартную суспензию эритроцитов

оценивают наличие агглютинации титром считают наибольшее разведение вируса, при котором сохраняется выраженная агглютинация.

метод быстрый и простой, но не отражает инфекционность вируса.

занятие 12 (продолжение). реакции РГА и РЗГА

реакция гемагглютинации (РГА)

основана на взаимодействии вируса с эритроцитами.

при положительной реакции эритроциты равномерно распределяются по дну лунки. при отрицательной — оседают в виде «пуговицы».

применяется для:

индикации вируса

титрования вирусных препаратов

ориентировочной диагностики

реакция задержки гемагглютинации (РЗГА)

основана на способности специфических антител блокировать гемагглютинирующую активность вируса.

при наличии антител агглютинация не происходит.

титром антител считают наибольшее разведение сыворотки, полностью подавляющее РГА.

используется для серологической диагностики и оценки иммунного ответа.

занятие 13. реакции гемадсорбции

реакция гемадсорбции (РГАд)

основана на способности инфицированных клеток адсорбировать эритроциты на своей поверхности.

положительная реакция проявляется прикреплением эритроцитов к клеточному монослою.

реакция выявляется раньше цитопатического эффекта, что делает её ценной для ранней диагностики.

реакция задержки гемадсорбции (РЗГАд)

антитела блокируют вирусные белки на поверхности клеток.

в результате эритроциты не прикрепляются к клеткам и свободно находятся в среде.

используется для идентификации вирусов и обнаружения специфических антител.

занятие 14. реакции преципитации и РНГА

реакция диффузной преципитации (РДП)

основана на диффузии антигена и антител в агаре с образованием видимой линии преципитации.

реакция отличается высокой специфичностью, но сравнительно низкой чувствительностью.

применяется для диагностики ряда вирусных инфекций у животных.

реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

используются эритроциты, сенсибилизированные антигеном или антителом.

при положительной реакции происходит агглютинация эритроцитов.

метод более чувствителен, чем РГА, и широко применяется в серологической диагностике.

занятие 15. иммуноферментный анализ (ИФА)

метод основан на специфическом взаимодействии антигена и антител, меченных ферментом.

после добавления субстрата развивается окраска, интенсивность которой соответствует количеству исследуемого компонента.

используется для:

выявления антигенов

определения антител

массовых диагностических исследований ИФА отличается высокой чувствительностью, специфичностью и возможностью автоматизации.

занятие 16. реакции РСК и РН