Микробиология. Лекции / Zanyatie_11_Stafilokokki_i_Printsipy_Diagnostiki_2022
.pdf
А теперь – «невозможности» бактериоскопического метода – он никогда не ответит на вопросы:
1.Видовая принадлежность возбудителя ...?
2.Чувствительность этого штамма к антибиотикам ...?
3.Источник, из которого появился этот штамм ...?
Почему?!
Очень мало информации – изучаются чисто внешние (конкретно
– какие ?!? ) характеристики! А это значит, что...
Ответы на эти вопросы может дать бактериологический метод → выделение чистой культуры возбудителя и изучение ее свойств идет вслед за микроскопией!
Для решения поставленных диагностических задач бактериологический метод должен:
•среди всех бактерий, присутствующих в исследуемом материале, в том числе, среди видовдвойников, найти один вид – возбудителя
•определить концентрацию возбудителя в материале, чтобы отличить текущую инфекцию от бактерионосительства или транзиторного присутствия (концентрация будет выше в каком случае?! ... ...? ...)
Каким образом бактериологический метод решает поставленные задачи:
•Для выявления возбудителя среди всей присутствующей в первичном материале микрофлоры используют питательные среды, способные:
1. |
выявлять межродовые различия – это |
|
дифференциально-диагностические среды; |
|
|
2. |
угнетать сопутствующую микрофлору – |
≥ 10 5 |
это элективные среды. |
КОЕ/мл |
|
• Определить концентрацию возбудителя в
материале, чтобы подтвердить текущую инфекцию, позволяют посевы, проведенные количественными методами (например, по Голду).
Догадываетесь, что еще должно быть в памяти для раскрытия подтемы «Бактериологический метод»?
РИФ как экспресс- |
ИФА (иммуноферментный |
диагностика бактериальных |
анализ) – экспресс-определение |
инфекций: |
антигенов возбудителей |
РИФ (РНИФ) с мечеными иммунными |
ПЦР, направленная на выявление ДНК либо |
||
сыворотками дает возможность выявить |
РНК возбудителя может применяться для |
||
возбудителя в исследуемом материале |
изучения различных материалов |
||
по его антигенам и морфологии. |
(клинических, санитарно-микробиологи- |
||
Исследование занимает ≈ 2 час. |
ческих...). Исследование занимает ≈ 2 час. |
||
|
|
|
|
Какой недостаток экспресс-диагностики |
|
узнаём лишь вид |
|
можно сразу увидеть?! |
|
|
возбудителя! |
|
|
|
|
→ бактериологический метод пока остается незаменимым!
ПЦР (полимеразная цепная реакция): молекулярно-биологический метод, основанный на репликации ДНК и позволяющий амплифицировать (англ. amplify - многократно увеличивать) малые количества искомых фрагментов ДНК в миллионы раз в течение нескольких часов.
●В реакционную смесь вносят: исследуемый материал, праймер (фрагмент ДНК искомого возбудителя), ДНК-полимеразу и субстраты для реакции.
●Праймер находит родственную ДНК → ДНК-полимераза удваивает этот фрагмент → нагрев расщепляет копии → Цикл многократно повторяется...
●Обнаружение продукта репликации = это положительный результат.
●Если праймер не найдет «свою» ДНК – реакции нет → продукта нет!
ПЦР-анализ оптимален, если: - инфекционного агента мало; - он не культивируется; - он вариабелен с точки зрения
морфологии и иммунологии; - его концентрация в клиническом материале намного ниже, чем других микроорганизмов. Чувствительность ПЦР позволяет выявить ДНК микроорганизмов при их концентрации 100 –1000 геномэквивалент/мл. Специфичность ПЦР тестсистем, достигает 99-100%. Можно искать гены антибиотикорезистентности!
Биологический метод – заражение клиническим материалом лабораторных животных для индикации возбудителя
Высокочувствителен, быстр, ЕСЛИ: есть высокочувствительный вид животных (морская свинка → быстро гибнет от туберкулеза)
Реальное значение метод сохраняет в диагностике особо опасных природно-очаговых инфекций: чума, туляремия...
Самый опасный (контагиозный) метод, т.к. животные тоже болеют! [пример с ГЛПС]
Самый дорогой метод, ибо для его реализации необходимы:
-виварий – комплекс(!) помещений, где постоянно содержат животных;
- квалифицированный и вакцинированный персонал для ухода.
Необходим в работе ПЧС и НИПЧИ
Каждый принцип имеет свои достоинства /недостатки →
Они определяют его место в общей схеме диагностики
Выявление возбудителя или его компонентов + это методы прямой диагностики (это что?!)
+ Выявить возбудитель можно, начиная с 1-го дня заболевания
–Для поиска возбудителя надо иметь дело с заразным материалом от больного
–Для работы с ПБА (патогенными биологическими агентами) надо иметь микробиологическую лабораторию: специальное подразделение + персонал
Выявление специфического иммунного ответа – это косвенный подход к диагностике (это что?!)
– Обнаружить продукты иммунного ответа (антитела или Т-лимфоциты) можно с конца 1-й – начала 2-й недели заболевания
+Исследуется сыворотка крови или ставится аллергическая проба
+Требований по биологической
безопасности гораздо меньше
Как Вы думаете: а какова «цена
вопроса» в каждом случае?!
Исходя из данной информации, продумайте достоинства и недостатки каждого из методов →
Ведь именно лечащий врач намечает ход диагностики у пациента
Бактериоскопический метод |
Серологический метод |
Бактериологический метод
Биологический метод
Экспресс-диагностика
ПЦР-диагностика
Аллергические пробы
Снова есть о чем подумать:
-чувствительность и специфичность;
-информативность;
-возможность их применения в практической российской медицине;
-«цена вопроса» каждого метода (!)
Т.к. бактериологический метод – основной, надо знать общие требования к отбору биоматериала для микробиологического исследования:
Пробы необходимо собирать:
- до начала антибактериальной терапии
(либо - перед повторным введением препаратов);
- в количестве, необходимом для анализа
(недостаточное количество биоматериала приведет к ложным результатам!);
- с минимальным загрязнением нормофлорой
(ее наличие приводит к ошибочной трактовке результатов, например, при исследовании мокроты, проб из носа, глотки, гениталий и др).