Микробиология. Лекции / Zanyatie_10_Reaktsii_3-go_pok-ya_Vaktsiny_Syvorotki_2022_v2
.pdf
Иммуноферментный
метод (выявление
антител в сыворотке б-го)
антиген, сорбированный в лунках планшета
специфические антитела в исследуемом образце
Субстрат: Н2О2 + хромоген
учет
результатов
Продвижению метода ИФА способствуют:
Выпуск готовых наборов для постановки любых вариантов ИФА
Механизация отдельных этапов постановки реакции (Вошер – устройство для промывки)
Приборный (объективный!) учет результатов реакции с распечаткой и архивированием базы данных (на фото – планшетный фотометр)
Пара вопросиков на закрепление материала по ИФА:
1. Как достичь максимальной специфичности теста?
Подсказка:
Мы говорили с Вами о получении иммунных сывороток от лабораторных животных, но не обращали внимание на то, что антитела в этих сыворотках неоднородны по уровню своей аффинности и авидности...(см. презентацию на портале!).
А для выпуска тест-систем необходима стабильность всех показателей!
2. Как повысить чувствительность теста?
Подсказка:
Для того, чтобы результат реакции стал видимым, необходима определенная концентрация фермента в лунке → как увеличить количество ферментных меток при одном и том же количестве антител?!
Пара вопросиков на закрепление материала по ИФА:
1. Как достичь максимальной специфичности теста?
Подсказка:
Мы говорили с Вами о получении иммунных сывороток от лабораторных животных, но не обращали внимание на то, что антитела в этих сыворотках неоднородны по уровню своей аффинности и авидности... А для выпуска тест-систем необходима стабильность всех показателей!
Ответ: применение моноклональных антител позволяет выбрать для реакции необходимый вариант и получать его долгое время
2. Как повысить чувствительность теста?
Подсказка:
Для того, чтобы результат реакции стал видимым, необходима определенная концентрация фермента в лунке → как увеличить количество ферментных меток при том же количестве антител?!
Иммуноблотинг сочетает электрофоретическую разгонку и ИФА – расширяет возможности метода
Радиоиммунный метод высокочувствителен, но крайне неудобен с точки зрения проблем утилизации радиоактивных отходов...
Достоинства серологических методов исследования
•Наиболее доступный метод при массовых обследованиях
•Наиболее информативный метод при ретроспективных исследованиях (см.сл.слайд)
•В ряде случаев (при недоступности возбудителя для выделения и культивирования; при сходной клинической картине у ряда заболеваний*) – единственный метод диагностики
* например, при вирусных инфекциях, риккетсиозах
или при Лайм-боррелиозе
Наиболее информативный метод при ретроспективных исследованиях
Интерпретация результатов определения маркеров VZV-инфекции (опоясывающий герпес)
Стадия |
Маркеры острой стадии |
Пастинфекция |
||
|
|
|
||
заболевания |
IgM |
IgE-IgG(остр.) |
IgG(циркул.) |
|
|
||||
|
|
|
|
|
Инкубационный период |
|
|
|
|
или отсутствие инфекции |
— |
— |
— |
|
|
||||
|
|
|
|
|
Очень ранняя первичная |
|
— |
— |
|
инфекция |
+ |
|||
|
|
|||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
Ранняя первичная |
+ |
+ |
+ |
|
инфекция |
||||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
Поздняя первичная |
— |
+ |
+ |
|
инфекция |
||||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
+ |
+ |
+ |
|
Реактивация |
|
|
|
|
— |
+ |
+ |
||
|
||||
|
|
|
|
|
Паст-инфекция |
— |
— |
+ |
|
|
||||
|
|
|
|
|
Достоверность результатов серологической диагностики
•Чаще всего достоверность обеспечивается при изучении парных сывороток крови обследуемых.
1-ю сыворотку забирают в первые дни болезни,
2-ю – через определенный промежуток времени (при каждом заболевании он регламентируется).
В этом случае можно выявить а/ сероконверсию: (-) → (+);
б/ динамику нарастания антител. При этом диагностическое значение имеет лишь 4-кратное и более повышение титра антител во второй сыворотке.
•В диагностике первичного инфекционного процесса можно определить различные классы иммуноглобулинов → показатель свежего контакта с антигеном – присутствие иммуноглобулинов класса М.