Микробиология. Лекции / Zanyatie_5_VChK_3_den_Antibiotiki_2022_st
.pdf
3. Изучение свойств чистой культуры с целью ее идентификации – уточняем базовые позиции
1.Насколько важна видовая идентификация микробавозбудителя?
2.Насколько стандартен (одинаков) набор признаков, по которым идентифицируют чистые культуры? Поясните
3.Изучение антибиотикочувствительности – это часть работы по видовой идентификации возбудителя?
4.Для выявления источника заражения изучают некие признаки – какими они будут у культур (штаммов), которые реально попали из одного источника к разным больным?
Биохимические свойства = = ферментативная активность
изучаются на средах «пестрого ряда»
Смысл
термина
вполне очевиден!
Что это за среды (по назначению)? И почему такое разноцветье?
Ферментативная активность
Сахаролитическая
активность
Выделение Выделение кислот(ы) газа(ов)
Для этого созданы среды Гисса:
-пептонная вода;
-1% углевода;
-индикатор Андреде (фуксин, обесцвеченный щелочью).
Протеолитическая активность
Выделение
индола,
H2S и др. ...
М.б. разные среды: МПБ,
пептонная вода, желатин...
М.б. разные индикаторы:
щавелевая кислота, ацетат
свинца и проч. ... ...
Среды Гисса могут быть разными:
На кафедре мы с Вами говорим о жидких средах:
в этом случае для индикации газообразных продуктов используют т.н. «поплавки»
На практике используют полужидкие среды Гисса, посев в которые проводят уколом → пузырьки газа остаются в столбике среды
Биохимические свойства бактерий – это гораздо более широкое понятие
Каталаза – фермент, |
Оксидаза (или |
расщепляющий перекись |
цитохромоксидаза) – это |
водорода |
терминальная оксидаза |
|
аэробной дыхательной цепи |
|
переноса электронов |
Антигенные свойства чистой культуры – это ее способность взаимодействовать со специфическими иммуноглобулинами (антителами)
Работает принцип уравнения с одним неизвестным: имея чистую культуру неизвестного вида, можно поставить иммунную реакцию между ней и известной (иммунной, диагностической) сывороткой, содержащей антитела против конкретного вида бактерий → возможны 2 варианта реакции:
1. Если известные антитела в сыворотке дают реакцию с выделенной культурой → рез-т (+) → вид определен
2. Если антитела иммунной сыворотки не реагируют с выделенной культурой → результат (-) → исследование надо продолжить (с сыворотками против иных видов)
Для идентификации чистых культур на 3-й день работы обычно используют реакцию агглютинации на стекле
•На предметное стекло наносят каплю иммунной антивидовой сыворотки (О) и каплю физраствора (К)
•Вносят в обе капли небольшое количество чистой культуры, суспендируют ее
•Набираются терпения на 1-2 минуты
•Учитывают результат: если в опытной капле образуются хлопья, а в контроле их нет
– а/тела нашли антиген!
Чувствительность к видовому бактериофагу
– еще один высокоспецифичный тест для идентификации чистой культуры
Бактериофаги – это вирусы, способные проникать в бактерию и размножаться в ней, вызывая лизис (разрушение).
Взаимодействие бактериофага и бактерии – очень специфичное: бактериофаг сначала распознает своими рецепторами клетку, в которой может размножаться, и лишь потом внедряется в нее.
Эту специфичность используют для идентификации чистых культур бактерий.
Чувствительность к чистой культуры к видовому бактериофагу чаще
определяют на плотных средах (агарах):
1. Засевают «газоном» исследуемую культуру на поверхность питательного агара:
а/ наносят взвесь культуры петлей;
б/ распределяют взвесь шпателем по всей площади чашки (агара).
2.В центр чашки наносят 1 каплю препарата бактериофага (петлей или пипеткой) и помещают чашку в термостат.
3.Инкубация при 37°С в течение 24 часов (учет – на 4-й день).
NB! Можно ставить тест в жидкой среде!
Антибиотикочувствительность чистой культуры можно определять различными методами
Самый массовый в практике – дискодиффузионный метод:
1.Исследуемую культуру засевают «газоном» на поверхность агара
(шпателем или тампоном по всей
площади чашки / агара).
2.На поверхность агара наносят диски, пропитанные антибиотиками.
3.Инкубируют чашки в термостате при 37°С в течение 24 часов (учет – на 4-й день).