микробиология лаба 2-3

МИКРОБИОЛОГИЯ ЛАБА 2–3

1. Как правильно подготовить бактериологическую петлю?

Бактериологическую петлю берут в правую руку как карандаш, прогревают над пламенем спиртовки сначала вертикально, затем горизонтально до покраснения.

2. Каким образом нужно держать пробирку, петлю и пробку при взятии материала и приготовлении препарата?

Петлю обеззараживают в пламени горелки. Пробирку держат в левой руке отверстием вверх. Открывают пробирку мизинцем правой руки и держат пробку до конца работы. Отверстие пробирки должно находиться над пламенем горелки. Остуженную петлю вводят в пробирку с физиологическим раствором или культурой бактерии. Пробирку держат в левой руке так же, как карандаш, но отверстием вверх, бактериологическую пробку прижимают мизинцем правой руки и открывают пробирку и так держат пробку во время всей манипуляции. Ни в коем случае нельзя пробку класть на стол или в другое место. Берут небольшое количество физиологического раствора (или культуры бактерии) и переносят на предметное стекло. Обжигают пробирку и пробку над пламенем спиртовки, закрывают пробкой и ставят в штатив, затем готовят мазки-препараты. Петлю вновь обжигают в пламени горелки и ставят в штатив.

3. Каковы правила работы с культурами микроорганизмов?

В лабораторных условиях микроорганизмы обычно выращивают в пробирках, колбах, чашках Петри на жидких и плотных питательных средах. Посуду и питательные среды предварительно стерилизуют. Чистые культуры хранят преимущественно в пробирках, которые закрывают ватными пробками, предохраняющими содержимое пробирок от попадания посторонних микроорганизмов из окружающего воздуха.

При посеве (внесение микроорганизмов в стерильную среду) микроорганизмов с данной среды на другую или приготовлении препарата необходимо соблюдать условия, предохраняющие культуру от загрязнения другими микроорганизмами. Все работы с культурами микроорганизмов проводятся в зоне пламени горелки. Для приготовления препарата из выросших на поверхности твердой питательной среды микроорганизмов или для пересева культуры с одной среды на другую пользуются

бактериологической петлей, а если в жидких средах — используют стерильную пипетку.

Бактериологическую петлю (иглу) перед взятием клеток микроорганизмов

стерилизуют. Для этого проволоку накаливают докрасна в пламени горелки и одновременно обжигают примыкающую к петле часть держателя, которую будут вводить внутрь сосуда, содержащего микроорганизмы. Сразу же после стерилизации петлю (иглу) вводят в

сосуд с микроорганизмами. Чтобы не повредить клетки микроорганизмов,

петлю (иглу) вначале охлаждают, прикасаясь ею к внутренней поверхности сосуда или к питательной среде, свободной от клеток микроорганизмов, и только после этого захватывают небольшое количество микробной массы.

4. Перечислите основные красители красного, синего, фиолетового и коричневого цвета, которые применяются в микробиологии.

…..Красные красители — фуксин, сафранин, нейтральный красный, конгорот

…..Коричневые красители — везувин, хризоидин.

…..Синие красители — метиленовый синий, толуидиновый синий

…..Фиолетовые красители — генциан фиолетовый, метиловый фиолетовый, кристаллический фиолетовый.

5. Каким образом готовятся рабочие растворы основного фуксина и метиленового синего?

Фуксин основный.

10 грамм кристаллического фуксина растворяют в 100 мл 96%-го этанола. Раствор может храниться долгое время в бутылке из темного стекла с притертой пробкой.

Фуксин основный карболовый (фуксин Циля)

При приготовлении раствора предварительно взвешивают 1 г фуксина основного кристаллического, вносят в фарфоровую ступку и растирают с 5 г карболовой кислоты, добавляя спирт небольшими порциями и дистиллированную воду до полного растворения кристаллов, после чего приливают оставшуюся воду. Приготовленный краситель ставят в термостат при 37 °C на двое суток. Затем отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр. Фуксин основной карболовый устойчив и может храниться долго. Хранить следует в бутылке из темного стекла с притертой пробкой.

Можно готовить так: Делают первый раствор — 1г. фуксина основого кристаллич. с 10мл. этилового спирта(96%) растирают в фарфоровой ступке до полного растворения кристаллов фуксина. Делают второй раствор — 95 мл. дистиллированной воды подогревюат до 50О для лучшего растворения 5г. карболовой кислоты. Второй раствор вливают в первый, хорошо взбалтывают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр.

Фуксин основной, водный (фуксин Пфейффера)

Готовят из карболового фуксина Циля путем разбавления дистиллированной водой (1 : 10). Водный фуксин нестоек, его готовят непосредственно перед употреблением.

Метиленовый синий (насыщенный спиртовой раствор)

3 г метиленового синего растворяют в 100 мл 96%-го этанола. Раствор выдерживают в течение 2—3 сут, периодически взбалтывая. Затем фильтруют через бумажный фильтр. Раствор устойчив.

Метиленовый синий 7:40

1 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего смешивают с

40 мл дистиллированной воды.

Метиленовый синий, щелочной раствор (по Леффлеру)

К 100 мл дистиллированной воды прибавляют 30 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего и 1 мл 1%-го водного раствора гидроксида калия (КОН).

Метиленовый синий по Финку

Готовят три отдельных раствора: 0,9 г гидрофосфата натрия, 13,6 г дигидрофосфата калия 0,1 метиленового синего.

Каждую навеску отдельно растворяют в 500 мл дистиллированной воды. Смешивают 0,25 мл первого раствора с 99,75 мл второго и 100 мл третьего

(pH 4,6).

6. Из каких последовательных этапов складывается приготовление препарата-мазка?

1.Предметное стекло протирают сухим кусочком мыла, затем протирают салфеткой до чистой глянцевой поверхности.

2.Обожженной петлей на середину стекла наносят 1-2 капли физиологического раствора//дистиллированной воды.

3.С косого агара или другого субстрата бактериологической петлей захватывают с маковое зернышко культуры и вносят в каплю физиологического раствора//дистиллированной воды.

4.Размазывают культуру тонким слоем по стеклу овалом не более рублевой монеты.

5.Мазок высушивают высоко над пламенем горелки, где тепло пламени терпимо для кожи.

6.Мазок фиксирут над пламенем горелки в течении 3 с, затем окрашивают красителем капнув 1 каплю на мазок и смывают излишек красителями.

7.Высушивают предметное стелкло с окрашенным мазком между листами фильтровальной бумаги.

8.Капают на сухой мазок каплю иммерсионного масла.

9.Рассматривают в микроскоп через иммерсионный объектив.

7. Для чего необходима фиксация препаратамазка?

Цель фиксации:

—закрепить мазок на стекле, тем самым предохранить мазок от смывания в процессе окраски;

—обезвредить патогенный материал, тем самым обезопасить себя от возможности заражения;

—убитые микроорганизмы лучше окрашиваются

8.Какова техника фиксации препарата-мазка при помощи пламени?

Проведение его нижней стороной через пламя спиртовки 3—4 раза. Фиксация считается хорошей, если стекло, приложенное к тыльной поверхности кисти, дает ощущение лёгкого жжения. При отсутствии такого ощущения препарат может смыться, а при ощущении ожога микроскопическая картина будет искажена

1. В чём заключается принцип окраски по Граму?

На приготовленный и зафиксированный препарат-мазок положить кусочек фильтровальной бумаги, пропитанный карболовым раствором

генцианвиолета, и увлажнить его 2-3 каплями воды. Окрашивание - 2 минуты.

Убрать пинцетом фильтровальную бумагу, на препарат налить на 2 минуты раствор Люголя.

Слив раствор Люголя, налить на препарат несколько капель спирта (96°) на 30 секунд. Обесцвечивание идет при покачивании стекла.

Быстро смыв спирт водой, препарат докрасить в течение 1-2 минут раствором водного фуксина, после чего препарат промыть водой и

высушить