Конспект - микробиология полости рта

среду N 9 (для определения синегнойной палочки по наличию пигмента пиоцианина). Колонии, подозрительные на синегнойную палочку (колонии с ровными или слегка волнистыми краями, гладкой блестящей поверхностью с характерным запахом и пигментом, однако, следует учесть, что запах и пигмент могут сильно варьировать или вообще отсутствовать), пересевают на скошенный агар. Для идентификации P.аeruginosa используют следующие тесты:

подвижность;

ОФ-тест;

оксидазный тест;

наличие пиоционина (сине-зеленого пигмента);

способность к росту при 420С;

наличие фермента лезиндекарбоксилазы.

P.aeruginosa - грамотрицательная, подвижная, оксидазоположительная палочка, окисляющая, но не ферментирующая глюкозу, дающая рост при 42 °С.

Дезинфекцию считают эффективной, если через 48 часов на чашках не вырастают колонии указанных выше микроорганизмов.

4.6.2. Контроль качества предстерилизационной обработки

Контроль качества предстерилизационной обработки (очистки) проводят центры гигиены и эпидемиологии и дезинфекционные станции (не реже 1 раза в квартал), а в качестве самоконтроля – централизованные стерилизационные (не реже 1 раза в неделю). При этом проверяют не менее 1% изделий (3-5 единиц), обработанных за смену.

Качество оценивают путем постановки проб на остаточные количества крови и моющих средств.

Бензидиновая проба может быть выполнена в двух модификациях:

а) с сернокислым бензидином: 0,025 г. сернокислого бензидина растворяют в 5 мл 50% уксусной кислоты; перед исследованием добавляют 5 мл 3% перекиси водорода. 3 капли приготовленного раствора наносят на изделие. Раствор готовят ежедневно.

108

б) с солянокислым бензидином: готовят 1% раствор солянокислого бензидина в дистиллированной воде. На изделие наносят 3 капли раствора и 3 капли 3% раствора перекиси водорода. 1% раствор бензидина в темной склянке с притертой пробкой сохраняет чувствительность в течение 2-х недель.

Появление сине-зеленого окрашивания на вымытых изделиях указывает на наличие крови.

Амидопириновая (азопирамовая) проба: смешивают равные количества 5% спиртового раствора амидопирина с 3% раствором Н2О2 и добавляют несколько капель 30% уксусной кислоты. В присутствии крови появляется синефиолетовое окрашивание.

Ортотолидиновая проба: к 1% раствору ортотолидина на дистиллированной воде добавляют равное количество 3% раствора Н2О2. При наличии крови появляется синезеленое окрашивание.

Фенолфталеиновая проба: на вымытое изделие наносят 3 капли 1% спиртового раствора фенолфталеина. Появление розового окрашивания свидетельствует о присутствии остаточных количеств моющих средств.

При положительном результате той или иной пробы всю группу изделий подвергают повторной очистке до получения отрицательного результата.

Таблица 3

Микробиологические показатели безопасности материалов и изделий медицинского назначения (требования распространяются на нестерильные изделия)

терий (МАФАнМ), КОЕ в 1 г (см) продукции

КОЕ - колониеобразующих единиц в 1 г или 1 см продукции.

109

Дрожжи, дрожжеподобные, плесневые Отсутствие грибки, КОЕ в 1 г (см) продукции КОЕ - колониеобразуюших единиц в 1 г или 1 см продукции.

4.6.3.Контроль эффективности стерилизации

К методам контроля эффективности стерилизации можно отнести:

1.Показания приборов;

2.Физико-химические тесты;

3.Биологические тесты;

4.Молекулярно-генетические методы контроля – геноиндикация

– используются в случае оценки стерилизации в отношении труднокультивируемых бактерий (анаэробной группы) или некультивируемых (вирусов). С этой целью применяют ПЦР.

Микробиологический контроль стерильности изделий медицинского назначения

Объектами бактериологического контроля стерильности являются:

хирургические инструменты;

шприцы, иглы;

зонды, катетеры, резиновые перчатки и др.;

шовный материал;

перевязочный материал;

операционное белье;

различная аппаратура.

Исследование проводят с соблюдением правил асептики с целью исключения возможности вторичной контаминации изделий микроорганизмами, в боксированных помещениях с приточно-вытяжной вентиляцией и подачей воздуха через бактериальные фильтры. Перед

110

входом в бокс сотрудники лаборатории тщательно моют руки, надевают в предбокснике стерильную спецодежду. Ежедневно до проведения работ бокс обрабатывают следующим образом:

-стены, пол, поверхность инвентаря протирают 3% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства, в случае обнаружения в воздухе грибов или споровых форм микроорганизмов – 6% раствором перекиси водорода с 0,6% моющего средства. Через 45-60 минут после обработки в бокс вносят необходимые для работы материалы и инструменты;

-за 1,5- 2 часа до начала работы включают бактерицидные лампы;

-инструменты, посуду, спецодежду, используемые в процессе работы стерилизуют в паровом стерилизаторе.

В процессе посева в боксе проверяют обсемененность воздуха: 2 чашки с питательным агаром открывают на рабочем столе на 15 минут с последующей инкубацией при 370С, 48 часов. Допускается рост не более 3 колоний неспорообразующих сапрофитов. При обнаружении более 3-х колоний работа в боксе должна быть запрещена, проводится дополнительная обработка.

Для контроля стерильности изделий в ЛПУ используют питательные среды:

-тиогликолевая среда;

-бульон Сабуро.

Обязателен одновременный посев на 2 вышеуказанных среды по 2 пробирки (флакона) каждой. Количество среды должно быть достаточным для полного погружения объекта (мелкие или детали разъемных изделий, стоматологические инструменты, от шовного или перевязочного материала берут отрезанные фрагменты). При проверке стерильности более крупных изделий проводят отбор проб методом смывов с различных участков поверхности изделий: с помощью стерильного пинцета (корнцанга) каждый участок тщательно протирают марлевой салфеткой (размер салфетки 5 х 5 см), увлажненной стерильной питьевой водой. Каждую салфетку помещают в отдельную пробирку (колбу, флакон) с питательной средой.

У изделий, имеющих функциональные каналы, рабочий конец

111

опускают в пробирку с питательной средой и с помощью стерильного шприца или пипетки 1 - 2 раза промывают канал этой средой.

Перед посевом в предбокснике пакеты, биксы с исследуемым материалом протирают снаружи стерильной салфеткой, смоченной 6% раствором перекиси водорода и оставляют на 30 минут, затем переносят в бокс.

Посевы в тиогликолевой среде выдерживают при 320С, в среде Сабуро – при 220С; инкубируют 14 суток при контроле изделий, простерилизованных радиационным или газовым методом, 7 суток – паровым методом.

При прорастании посевов (помутнение питательной среды, образование пленки, осадка) готовят мазки для бактериоскопического подтверждения роста микробов.

При контроле на стерильность изделий, стерилизованных газовым или паровым методом, рост в единичных пробирках вегетативной микрофлоры не учитывают, его относят за счет внесения этой микрофлоры в процессе посева, материал подлежит повторному исследованию.

После окончания исследования в журнале отмечают результат: «Стерильно» или «Нестерильно».

Контролю на стерильность подлежат не менее 1% от общего количества простерилизованного инструментария, но не менее 3-5 единиц одного наименования.

4.7. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха

Особенностями воздушной среды как объекта санитарномикробиологического исследования являются:

отсутствие питательных веществ и, как следствие, невозможность размножения микроорганизмов;

кратковременное нахождение микробов в воздушной фазе и их самопроизвольная седиментация;

невысокие концентрации микробов в воздухе (по сравнению с другими объектами окружающей среды);

относительно небольшое число видов микробов, обнаруживаемых в воздухе.

112

Микроорганизмы находятся в воздухе в форме аэрозоля.

Микробный аэрозоль - это взвесь в воздухе живых или убитых микроорганизмов, адсорбированных на пылевых частицах или заключенных в “капельные ядра”

Микробный аэрозоль оказывает влияние на здоровье и жизнедеятельность человека, которое состоит в следующем:

распространение ряда инфекционных заболеваний с аэрозольным механизмом передачи;

развитие аллергий (при наличии в воздухе живых или погибших плесневых грибов, термофильных актиномицетов);

развитие интоксикаций, связанных с ингаляцией эндотоксинов Грамбактерий, ацетилмурамовой кислоты Грам+ бактерий и микотоксинов плесневых грибов;

причина нарушения технологического процесса.

Фазы микробного аэрозоля: капельная, пылевая, капельноядерная.

Размер частиц определяет 2 важных параметра аэрозоля:

Скорость оседания (седиментацию) – частицы размером 10-100 мкм оседают на поверхность за 5-20 мин., частицы менее 5 мкм формируют практически не седементирующий аэрозоль постоянно взвешенных в воздухе частиц;

Проникающую способность – частицы 0,05-5 мкм задерживаются в бронхиолах и альвеолах, а частицы более 10 мкм задерживаются в верхних дыхательных путях и выводятся из них.

Наибольшую эпидопасность представляет «капельно-ядерная» фаза. Размер частиц этой фазы 0,05 - 0,5 мкм, что обусловливает низкую скорость их оседания (формируют практически неседиментирующий аэрозоль постоянно взвешенных в воздухе частиц) и высокую проникающую способность (могут задерживаться в нижних отделах дыхательных путей - бронхах, альвеолах).

113

Для обеззараживания воздуха в помещениях с асептическим режимом с целью снижения обсемененности воздуха до безопасного уровня применяются следующие технологии:

-воздействие ультрафиолетовым излучением с помощью открытых и комбинированных бактерицидных облучателей, применяемых в отсутствии людей, и закрытых облучателей, в том числе рециркуляторов, позволяющих проводить обеззараживание воздуха в присутствии людей, необходимое число облучателей для каждого помещения определяют расчетным путем согласно действующим нормам;

-воздействие аэрозолями дезинфицирующих средств в отсутствие людей с помощью специальной распыливающей аппаратуры (генераторы аэрозолей) при проведении дезинфекции по типу заключительной и при проведении генеральных уборок;

-применение бактериальных фильтров, в том числе электрофиль-

тров.

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха ЛПУ проводится:

-при плановых обследованиях с целью оценки санитарного состояния помещений, проверки качества вентиляции в медицинских и других сооружениях;

-при расшифровке вспышек респираторных заболеваний по эпидемическим показаниям.

В плановом порядке в воздухе определяют следующие показатели:

ОМЧ;

S.aureus;

грибы (дрожжеподобные и плесневые).

По эпидемиологическим показаниям в воздухе лечебно-

профилактических учреждений определяют патогенную флору: сальмонеллы, микобактерии, энтеровирусы и др.

Отпроб воздуха

114

Пробы отбирают только аспирационным методом с помощью прибо- ров-импакторов, преимущественно ПУ-1Б (пробоотборное устройство), принцип действия которых основан на принудительном осаждении микробов из прокачиваемого воздуха на поверхность плотной питательной среды.

Схема санитарно-микробиологического исследования воздуха помещений учреждений, осуществляющих медицинскую деятельность

1 этап исследования: При отборе проб воздуха используют аспирационный метод. Определяют следующие показатели: ОМЧ, количество S.aureus, а также дрожжеподобных и плесневых грибов в 1м3.

Для этого с помощью пробоотборного устройства ПУ-1Б пропускают:

а. 100л воздуха на пластинку МПА (для определения ОМЧ), б. 250л воздуха на пластинку МЖСА (определение S.aureus),

в. 250л воздуха на пластинку среды Сабуро (определение дрожжеподобных и плесневых грибов).

МПА и МЖСА инкубируют сутки при 370С, дополнительно МЖСА оставляют еще на сутки при комнатной температуре; Сабуро – 4 дня при температуре 22-280С.

2 этап исследования:

а. Определяют ОМЧ: для этого подсчитывают количество выросших на пластинке МПА колоний и умножают на 10 (т.к. пропускали 100л воздуха). Результат выражают в КОЕ/м3.

б. При определении S.aureus производят подсчет характерных колоний с зонами опалесценции, выросших на МЖСА. Делают пересчет количества стафилококков в 1 м 3 путем умножения количества колоний на 4 (так как пропускали 250 л воздуха). Для подтверждения принадлежности микроорганизмов из подсчитанных колоний к стафилококкам готовят мазки, окрашивают по Граму. В случае обнаружения Грам+ кокков, расположенных гроздьями, делают пересев на скошенный МПА для накопления чистой культуры с последующей ее идентификацией по стандартной схеме.

в. подсчитывают количество выросших на сред Сабуро колоний плес-

115

невых и дрожжевых грибов, пересчитывают их содержание на 1м3 воздуха. Сравнивают полученные результаты с предельно допустимыми уровнями (табл.4) и дают заключение о чистоте воздуха.

Таблица 4 Допустимые уровни бактериальной обсемененности воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их функциональ-

ного назначения и класса чистоты

116

Тестовые задания для самоподготовки

1.Назовите основных представителей специфической микрофлоры полости рта здорового человека:

а. стрептококки б. энтерококки

в. пептострептококки г. вейлонеллы д. дифтероиды

е. энтеробактерии

1.если верно а, б, е

2.если верно а, в, г, д

3.если верно все Ответ: 2

2. Антагонистами кариесогенной микрофлоры являются:

1.оральные стрептококки

2.пептострептококки

3.вейлонеллы

4.фузобактерии

5.бактероиды Ответ: 3

3.В десневой жидкости среди анаэробов встречаются следующие микроорганизмы, кроме:

1.фузобактерий

2.лептотрихий

3.вибрионов

4.кампилобактероидов

5.стрептококков

117