4. Схемы выделения возбудителей оппортунистических инфекций

Схема бактериологического исследования на носительство золотистого стафилококка

Обследованию на носительство S.aureus (мазки из носа и зева) подлежат:

-работники пищевой промышленности, раздаточных пунктов, на базах и складах продовольственных товаров, где имеется контакт с пищевыми продуктами в процессе их производства, хранения, транспортировки, реализации - при приеме на работу (далее по эпидпоказаниям, но не реже 1 раза в год);

-работники организаций общественного питания, торговли, буфетов, на пищеблоках - при приеме на работу (далее по эпидпоказаниям, но не реже 1 раза в год);

-медицинский персонал ЛПУ, родильных домов - при приеме на работу (далее 1 раз в 6 мес.).

1 этап исследования (1-й день исследования)

Слизь передних отделов носа собирают одним стерильным зондом-тампоном, специально вмонтированным в стерильную пробирку или одноразовую пробирку (тубсер). Исследование слизи из зева проводят только по показаниям, прежде всего при наличии воспалительных процессов в нём.

Извлекают тампон из пробирки, вводят сначала в одну ноздрю и вращательным движением собирают материал с крыльев носа и верхнего угла носового отверстия; повторяют манипуляцию для другой ноздри. Помещают тампон обратно в пробирку и доставляют в лабораторию. Посев материала производят не позднее, чем через 2 часа после его забора.

Для первичного посева используют одну из питательных сред: желточно-солевой агар (ЖСА) или молочно-желточно-солевой агар (МЖСА). Посев производят либо непосредственно тампоном, которым забирали материал (многократно поворачивая его, чтобы перенести на среду максимальное количество взятого материала), либо тампон помещают в 5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl, 10 мин встряхивают, жидкость перемешивают пипеткой и 0,1 мл наносят на среду, растирая шпателем. Чашки помещают в термостат на 24 часа при 370С, затем оставляют еще на одни сутки при комнатной температуре на свету для создания оптимальных условий пигментообразования.

2 этап исследования (2-й и 3-й день исследования)

Просматривают чашки, фиксируют в журнале (протоколе) характер роста микроорганизмов. На ЖСА и МЖСА S.aureus растет в виде круглых, блестящих, выпуклых, мутных, пигментированных (от белого до желтого цвета) колоний среднего размера, которые в 2/3 случаев окружены зонами опалесценции. Подсчитывают количество таких колоний.

Отсевают на скошенный МПА не менее двух колоний, подозрительных на золотистый стафилококк, для накопления чистой культуры. Посевы термостатируют сутки при 370С.

3 этап исследования (4-й день исследования)

10

Проверяют морфологические и тинкториальные свойства накопленной культуры в мазках по Граму: при микроскопии стафилококки имеют вид фиолетово-синих кокков, располагающихся гроздьями или небольшими группами в виде «кружева».

С целью выявления хлопьеобразующего фактора выполняют реакцию хлопьеобразования: на предметное стекло нанося каплю цитратной кроличьей плазмы (ЦКП) и суспендируют в ней исследуемую культуру, параллельно для контроля культуру растирают в капле изотонического раствора NaCl; при наличии в контроле гомогенного помутнения, а в плазме

— хлопьев по типу агглютината реакцию считают положительной; Оценивают наличие плазмокоагулирующей активности (основной дифференциальный тест): в

стерильную пробирку с 0,5 мл ЦКП вносят одну петлю культуры стафилококка, выдерживают при 370С. Реакцию учитывают через 2 часа, а при необходимости — через 3,18 и 24 часа по наличию свертывания плазмы (образования желеобразного сгустка).

4 этап исследования

Если культура обладает типичными морфологическими и тинкториальными свойствами в мазке, пигментом, плазмокоагулазой и хлопьеобразующим фактором, она относится к виду S.aureus.

Выделенные культуры S.aureus обязательно фаготипируют с целью проведения эпидемиологического анализа.

Исследование завершают и выдают заключение о выделении S.aureus из носа с указанием массивности обсеменения материала стафилококком в КОЕ/мл. Обсемененность рассчитывается следующим образом (в зависимости от способа посева на ЖСА/МЖСА):

-число выросших на чашках однотипных, однородных колоний, идентичных по морфологии и пигменту умножают на 5 и на 10 (учитывается степень изначального разведения материала при суспендировании в физ. растворе и объем засеянной суспензии);

-массивность роста оценивается с использованием таблицы 1.

Таблица 1

Оценка массивности роста стафилококка

11

25)

12