МУ Санитарная микробиология

Ферментативные свойства. Стрептококки не разжижают желатина. Фер-

ментируют глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу и салицин. Гноеродный стрепто-

кокк (Str. pyogenes) сбраживает лактозу, свертывает молоко, редуцирует метиле-

новую синь.

Устойчивость. Стрептококки - относительно резистентные микроорганиз-

мы. В гное, мокроте и других выделениях человека и животных, находящихся в высушенном состоянии, стрептококки могут сохраняться в течение 4-6 мес. Под действием прямых солнечных лучей погибают через 2-3 ч. При 70-75 °С стрепто-

кокки погибают через 1 ч, при кипячении - немедленно либо через несколько се-

кунд. Дезинфицирующие средства губительны.

Санитарно-показательное значение зеленящих и гемолитических стреп-

тококков. У человека основным местом обитания зеленящих и гемолитических стрептококков является полость рта и носоглотки. Так, из микрофлоры миндалин здоровых людей зеленящие стрептококки выделены в 77-100 % случаях, а гемо-

литические стрептококки - только в 24-73 % (из числа исследованных проб).

У здоровых людей носоглоточное носительство патогенных для человека стрептококков колеблется от 10 до 30 %. В осенне-зимний и весенний периоды носительство этих стрептококков возрастает в связи с увеличением количества респираторных заболеваний.

Таким образом, стрептококки являются постоянными обитателями полости рта и верхних дыхательных путей человека. Они выделяются во внешнюю среду в большом количестве, и их можно рассматривать в качестве показателей загрязне-

ния воздуха носоглоточной микрофлорой.

Официальных норм допустимого загрязнения воздуха закрытых помещений санитарно-показательными микроорганизмами пока нет, но есть рекомендации для ориентировочной оценки.

21

Энтерококки

Ввиду того, что энтерококки отличаются от стрептококков рядом морфоло-

гических, культуральных, ферментативных свойств и антигенной структурой, их предложили выделить в самостоятельную группу (род) Enterococcus. В эту группу входят два вида энтерококков: Str. faecalis и Str. faecium. По ряду биологических свойств к энтерококкам близки два вида стрептококков, составляющих нормаль-

ную микрофлору кишечника, крупного рогатого скота (Str. bovis) и лошадей (Str. equinus).

Морфология. Энтерококки представляют собой грамположительные, попар-

но расположенные кокки, несколько вытянутые в длину, наружные концы их за-

острены. В жидких средах встречаются короткие цепочки кокков. Энтерококки не образуют спор и капсул. Им свойствен значительный полиморфизм, т.е. клетки различаются по размерам и по форме (круглые, длинные, иногда вытянутые на-

столько, что напоминают коккобактерии). Величина отдельных кокков колеблется от 0,5 до 1,2 мкм. В отличие от стрептококков среди энтерококков есть штаммы,

обладающие подвижностью. Среди Str. bovis также встречаются подвижные штаммы.

Культуральные свойства. Энтерококки растут на МПА, МПБ, но лучший рост отмечен на средах, содержащих углеводы и факторы роста (дрожжевой экс-

тракт, диализат). В жидких средах наблюдают диффузное помутнение с образова-

нием вначале аморфного, затем ослизняющегося осадка. На плотных средах энте-

рококки растут в виде мелких, прозрачных, голубоватых колоний. При обильном посеве образуют сплошной рост в отличие от стрептококков, которые и при гус-

том посеве дают изолированные колонии.

Ферментативные свойства. Энтерококки ферментируют лактозу, маннит,

глицерин, а сорбит, арабинозу, сахарозу не постоянно и не все штаммы энтеро-

кокков.

Устойчивость. Энтерококки выдерживают температуру 60 – 65 °С в течение

30 мин, способны расти в присутствии 6,5 % хлористого натрия, 40 % желчи, в

22

средах с рН 9,6 - 10. Устойчивость энтерококков к вышеназванным воздействиям называется «тесты Шермена».

Санитарно-показательное значение энтерококков. Энтерококки наряду с бактериями группы кишечных палочек являются постоянными обитателями ки-

шечника человека и животных, в большом количестве выделяются во внешнюю среду, и обнаружение их в почве, воде, пищевых продуктах свидетельствует о фе-

кальном загрязнении этих объектов, продуктов.

При изучении вопроса о санитарно-показательном значении отдельных видов энтерококков было установлено, что в кишечнике человека преобладают Str. faecalis и его варианты, в меньшем количестве обнаруживают Str. faecium.

Следовательно, обнаружение во внешней среде Str. faecalis и его вариантов имеет определенное санитарное и эпидемиологическое значение как показатель загрязнения объекта фекалиями человека; обнаружение Str, bovis и Str, equinus -

показатель загрязнения фекалиями животных.

Наряду с бактериями группы кишечных палочек энтерококк используют в качестве санитарно-показательного микроорганизма при санитарной оценке воды открытых водоемов.

В международном и европейском стандарте по исследованию питьевой воды энтерококк введен как дополнительный показатель фекального загрязнения воды.

Энтерококки как санитарно-показательные микроорганизмы имеют значи-

тельные преимущества перед бактериями группы кишечных палочек. Энтерокок-

ки не подвергаются столь глубоким изменениям и не размножаются (за исключе-

нием пищевых продуктов) в объектах внешней среды. Их легче идентифициро-

вать и дифференцировать от сходных видов, а также выявить из загрязненных другими микробами объектов благодаря наличию избирательных сред. Энтеро-

кокки более устойчивы, чем кишечные палочки, к физическим и химическим воз-

действиям, в частности к повышенным концентрациям солей, нагреванию, хлори-

рованию. В связи с этим их рекомендуют использовать в качестве санитарно-

показательных микроорганизмов при оценке качества хлорирования питьевой во-

23

ды, при исследовании минеральных источников, а также пищевых продуктов с повышенной концентрацией соли.

Дифференциация. Чтобы отличить группу энтерококков от других видов ро-

да Streptococcus, используют ряд признаков (тесты Шермена). В основу диффе-

ренциации положена более высокая устойчивость энтерококков по сравнению со стрептококками к воздействию физических и химических факторов.

Внутри группы, между собой, энтерококки различаются способностью реду-

цировать трифенилтетразолхлорид (ТТХ), теллурит калия, ферментировать сор-

бит и маннит, пептонизировать молоко, вызывать гемолиз на средах с добавлени-

ем крови.

Сходные по культуральным и биохимическим свойствам штаммы энтерокок-

ков и стрептококков идентифицируют серологическим методом, с помощью РП и РА.

Перечень контрольных вопросов:

1.Виды стафилококков, стрептококков и энтерококков.

2.Элективные питательные среды для стафилококков.

3.Устойчивость микробов.

4.Санитарно-показательное значение стафилококков, стрептококков и эн-

терококков.

Тема 1.3. Изучение биологических свойств СПМ – БГКП и Proteus

Цель: изучить биологические свойства бактерий группы кишечных палочек,

бактерий рода Proteus.

Содержание:

изучить морфологию микроорганизмов;

изучить культуральные свойства микробов;

изучить устойчивость;

изучить санитарно-показательное значение отдельных видов микробов и вирусов.

24

Бактерии группы кишечной палочки (БГКП)

В 1885 г. Эшерих открыл микроорганизм, который получил название

Escherichia coli (кишечная палочка). Этот микроорганизм является постоянным обитателем толстого отдела кишечника человека и животных. Кроме Е. coli в

группу кишечных бактерий входят эпифитные и фитопатогенные виды, а также виды, экология (происхождение) которых пока не установлена.

К бактериям группы кишечных палочек относят роды Escherichia (типичный пред-

ставитель Е. coli), Citrobacter (типичный представитель Citr. colicitrovorum), Enterobacter (типичный представитель Ent. aerogenes), которые объединены в одно се-

мейство Enterobacteriaceae благодаря общно-

сти морфологических и культуральных свойств. Они характеризуются различными ферментативными свойствами и антигенной структурой.

Морфология. Бактерии группы кишеч-

ных палочек - это мелкие короткие (длина 1-

3 мкм, ширина 0,5 - 0,8 мкм) полиморфные подвижные и неподвижные грамотрицатель-

ные палочки, не образующие спор (рисунок

4).

Культуральные свойства. Бактерии хорошо растут на простых питательных сре-

дах: МПБ, МПА; На МПБ дают обильный рост при значительном помутнении среды;

осадок небольшой, сероватого цвета, легко-

разбивающийся, образуют пристеночное кольцо, пленка на поверхности бульона

25

обычно отсутствует. На МПА колонии прозрачные с серовато-голубым отливом,

легко сливающиеся между собой (рисунок 5).

На среде Эндо в результате расщепления лактозы, входящей в состав этой среды, происходит восстановление цвета индикатора основного фуксина, в ре-

зультате чего выросшие колонии микробов окрашиваются в красный цвет бакте-

рии образуют плоские красные колонии средней величины (рисунок 6). Красные колонии могут быть с темным металлическим блеском (Е. coli) или без блеска

(Ent. aerogenes). Аналогично учитывают результаты на средах Левина (рисунок 7)

и Плоскирева (рисунок 8). Лактозоположительные колонии окрашиваются на этих средах в цвет индикатора: в фиолетовый или черный на среде Левина, в розовый на среде Плоскирева. Лактозоотрицательные не окрашиваются.

Также для индикации БГКП применяют следующие среды:

1. Среда Хейфеца – розоловая кислота, раствор метиленового синего, вода,

пептон, маннит, хлорид натрия. Готовая среда красно-фиолетового цвета, при росте кишечной палочки рН сдвигается в кислую сторону, и среда приобретает зеленоватую окраску.

2. ХБ – вода, пептон, маннит, хлорид натрия, дрожжевой гидролизат, желчь.

26

3. Среда Кесслера – вода, пептон, бычья желчь, лактоза, водный раствор ген-

цианвиолета. Готовая смесь имеет темно-

фиолетовый цвет (рисунок 9).

Ферментативные свойства. Боль-

шинство бактерий группы кишечных пало-

чек не разжижают желатин, свертывают мо-

локо, расщепляют пептоны с образованием аминов, аммиака, сероводорода, обладают

высокой ферментативной активностью в от-

Рисунок 9 – Среда Кесслера.

ношении лактозы, глюкозы и других саха-

ров, а также спиртов.

Устойчивость. Бактерии группы кишечных палочек обезвреживаются обычными методами пастеризации (63-75 °С). При 60 °С кишечная палочка поги-

бает через 15 мин. В почве – до 6 мес., в жидком навозе – до 7 мес., в воде – до 5

мес. Эшерихии чувствительны ко многим антибиотикам, но быстро приобретают резистентность к ним.

В 1925 г. в культуре кишечной палочки обнаружили антибиотическое веще-

ство белковой природы, подавляющее рост других гомологичных штаммов. По-

добные вещества выявлены у многих штаммов эшерихий, дизентерийных и дру-

гих бактерий и названы колицинами. Эшерихии продуцируют до 24 типов коли-

цинов. Специфичность действия колицинов объясняют наличием на поверхности клеток рецепторов, на которых они могут адсорбироваться.

Санитарно-показательное значение отдельных родов бактерий группы кишечных палочек. Бактерии рода Escherichia являются постоянными обитателя-

ми кишечника человека и животных, и обнаружение их в воде, почве, на пищевых продуктах свидетельствует о свежем фекальном загрязнении этих объектов. Это имеет большое санитарное и эпидемиологическое значение.

Бактерии родов Citrobacter и Enterobacter чаще обнаруживают в почве, на растениях, реже в кишечнике. Считают, что бактерии этих родов представляют

27

собой результат изменения эшерихий после пребывания их во внешней среде.

Следовательно, Citrobacter и Enterobacter являются показателями более давнего фекального загрязнения и поэтому они имеют меньшее санитарно-показательное значение по сравнению с бактериями рода Escherichia.

Бактерии рода Proteus

Род Proteus относится к семейству Enterobacteriaceae и включает следующие виды: Pr. vulgaris, Pr. mirabilis, Pr. morganii, Pr. rettgeri.

Морфология. Бактерии рода Proteus -

полиморфные палочки размером 0,5-0,6Х1,2-

3 мкм, подвижные (перетрихи) грамотрица-

тельные, не образующие спор и капсул. Фа-

культативные анаэробы.

Культуральные свойства. Микроб хо-

рошо культивируется на питательных сре-

дах. Индикация протея в Н-форме проводит-

ся внесением исследуемого продукта в кон-

денсат свежескошенного МПА (метод Шу-

кевича). Посевы помещают в термостат на Рисунок 10 – «Ползучий рост»

Proteus vulgaris.

сутки при 37 °С. При наличии в исследуе-

мом продукте протея подвижная палочка поднимается вверх по скошенной по-

верхности агара, образуя вуалеобразный прозрачный тонкий голубоватый налет

(рисунок 10). Культура издает характерный гнилостный запах. Посев по методу Шукевича широко применяют в диагностических лабораториях при выделении палочки протея из объектов внешней среды и продуктов.

На плотных углеводных средах (Эндо, Плоcкирева) Pr. morganii дает про-

зрачные, округлые, «нероящиеся» О-формы колонии. На среде Плоскирева вокруг прозрачных колоний, обладающих характерным запахом, среда окрашивается в желтоватый цвет. Более старого возраста колонии нередко мутнеют, а их центр окрашивается в бурый цвет.

28

Ферментативные свойства. Бактерии рода Proteus сбраживают глюкозу с выделением кислоты и газа, не ферментируют лактозу и маннит, расщепляют мо-

чевину. Pr. vulgaris и Pr. mirabilis обладают протеолитической способностью, раз-

жижают желатин; выделяют H2S. Pr. vulgaris в отличие от Pr. mirabilis образует индол, сбраживает мальтозу.

Устойчивость. Погибают при 60°С в течение 1 ч, при 80°С - за 5 мин. Proteus устойчивы к низким температурам, переносят трехкратное попеременное замораживание и оттаивание.

Санитарно-показательное значение бактерий рода Proteus. Микроорга-

низмы этой группы, в частности вид Pr. vulgaris, в небольшом количестве встре-

чается как в кишечнике человека и животного, так и во внешней среде. Он явля-

ется возбудителем гнилостных процессов в природе. Вид Pr. mirabilis - обитатель кишечника человека и животных. Палочки Proteus встречаются в кишечнике че-

ловека сравнительно в небольшом количестве (в 5-10% случаев); в кишечнике лошадей, крупного рогатого скота и других животных их обнаруживают чаще,

особенно летом. Из вышеизложенного следует, что бактерии рода Proteus не име-

ют самостоятельного значения как показатели фекального загрязнения. Они не удовлетворяют основным требованиям санитарно-показательных микроорганиз-

мов. Тем не менее, бактерии рода Proteus имеют определенное санитарно-

показательное значение, так как обнаружение большого количества Pr. vulgaris в

почве, воде свидетельствует о содержании в них и разрушении органических ве-

ществ животного происхождения. При загрязнении объектов внешней среды фе-

кальными стоками, как правило, выявляют Pr. mirabilis.

Как санитарно-показательные микроорганизмы бактерии рода Proteus вместе с Е. coli, энтерококком, Cl. perfringens и бактериофагом применяют для санитар-

но-гигиенической оценки почвы, воды открытых водоемов.

Обнаружение протея в пищевых продуктах свидетельствует о гнилостном процессе. Степень обсеменения мясных продуктов (мяса, колбас и др.) бактерия-

ми рода Proteus устанавливают по титру протея. Для этого в конденсационную воду свежескошенного агара вносят по 0,1 мл десятичных разведений исследуе-

29

мого материала. Посевы выращивают при 37 °С в течение 18-48 ч. Титр опреде-

ляют по наименьшему количеству засеянного продукта, в котором обнаружен рост палочки протея в виде Н-формы.

Доброкачественные продукты: колбасные изделия, студни, жареная птица,

кулинарные изделия из рубленого мяса - не должны содержать бактерий рода

Proteus.

Перечень контрольных вопросов:

1.Систематика бактерий группы кишечных палочек.

2.Морфологические свойства микробов.

3.Дифференциально-диагностические питательные среды для культивиро-

вания бактерий группы кишечных палочек.

4.Устойчивость микроорганизмов.

5.Посев по методу Шукевича.

6.Санитарно-показательное значение бактерий группы кишечных парочек,

бактерий рода Proteus.

Тема 1.4. Изучение биологических свойств СПМ – Cl. perfringens, кишеч-

ные бактериофаги

Цель: изучить биологические свойства кишечных бактериофагов и Clostridi-

um perfringens.

Содержание:

изучить морфологию микроорганизмов.

изучить культуральные свойства микробов.

изучить устойчивость.

изучить санитарно-показательное значение отдельных видов микробов.

Кишечные бактериофаги

В 1917 г. Д’Эрелль выделил из испражнений больных дизентерией людей особый агент, обладающий способностью просветлять (лизировать) молодые бульонные культуры возбудителя дизентерии. Агент, растворяющий бактерии,

30