МУ Микробиология Лабораторные

Иммунитет обусловлен наличием антитоксинов, действующих против ток-

сических веществ, выделяемых пневмококками. Иммунитет нестерильный, сопро-

вождающийся скрытым диплококконосительством.

Специфическая терапия и профилактика. Вакцину против диплококковой септицемии телят, ягнят и поросят готовят из штаммов Str. pneumoniae, выделен-

ных из указанных видов животных. Культуры выращивают на полужидком агаре,

инактивируют 0,4 % раствором формалина, проверяют на стерильность, безвред-

ность (на морских свинках), активность (на белых мышах).

Ассоциированная (поливалентная) вакцина против паратифа, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят включает в себя, кроме Pasteurellamultocida и Salmonellacholerasuis, бактериальную массу Str. pneumoniae.

Сыворотку против диплококковой септицемии телят, ягнят и поросят полу-

чают гипериммунизацией волов убитыми и живыми культурами возбудителя. Ан-

тиген для гипериммунизации волов – продуцентов сыворотки готовят из трех им-

муногенных штаммов, выделенных от телят, ягнят и поросят, путем выращивания их на питательной среде в реакторах с последующим обезвреживанием формали-

ном.

ВОЗБУДИТЕЛЬ ИНФЕКЦИОННОГО МАСТИТА КОРОВ

Streptococcusagalactiae

Мастит у коров вызывают микробы более 80 видов, но основными возбуди-

телями являются маститный стрептококк и патогенные стафилококки.

Морфология. Маститные стрептококки – мелкие чуть сплющенные или овальные кокки (1 мкм), располагающиеся в патологическом материале или с жидких питательных сред длинными цепочками и короткими цепочками в мазках из культур с плотных питательных сред. Грамположительный, хорошо окрашива-

ется всеми анилиновыми красителями, спор и капсул не образуют, неподвижны.

Культуральные свойства.Аэроб. На обычных питательных средах растет слабо, добавляют дефибринированную кровь или сыворотку. На сывороточном МПБ - мелкозернистый осадок, при этом среда прозрачная. На кровяном МПА -

121

мелкие (точечные) блестящие сероватые колонии, окруженные зоной гемолиза.

МПЖ – не разжижает.

Биохимические свойства.Ферментирует с образованием кислоты глюкозу,

лактозу, сахарозу, мальтозу, салицин; не ферментирует сорбит и дульцит. МПЖ и свернутую сыворотку не разжижает, не обесцвечивает метиленовое молоко, лак-

мусовое молоко изменяет частично.

Патогенность. Вирулентность маститного стрептококка непостоянна.

Наиболее вирулентные стрептококки содержаться в гнойном экссудате из вымени коров, больных острым маститом. Выращенные на питательных средах, особенно не содержащих крови, культуры этого микроорганизма слабовирулентны. Культу-

ры, 2-3 раза пересеянные на простые питательные среды, авирулентны.

Патогенез. Обусловлен воздействием на ткани вымени и всего организма стрептококковых токсинов и ферментов. Стрептококки, размножаясь на слизи-

стых оболочках, вызывают катарально-гнойное воспаление. Проникая вглубь тка-

ней, обуславливают нагноительные процессы.

Устойчивость.В высушенном гнойном экссудате – 2-3 мес. 85 °С - 30 мин.

Чувствителен к окситетрациклину, полимиксину. Замораживание консервирует.

Дезсредства: 3 % гидроксид натрия, 1 % формалин.

Лабораторная диагностика.Патологический материал: молоко - первые струйки сдаивают в отдельную посуду и уничтожают. Бактериологическое иссле-

дование проводят не позднее 2 часов после взятия пробы.

Микробиологическими исследованиями при мастите выявляют этиологию болезни и свойства возбудителя. Диагноз субклинического мастита ставят на ос-

новании результатов комплексного исследования: клинического осмотра всех жи-

вотных; физико-химических анализов молока (проба с мастидином); иммунологи-

ческих показателей молока (повышенное фагоцитарное число, положительная кольцевая РА с молоком, повышенное число лейкоцитов); бактериологического исследования.

Проводят микроскопию мазков, для чего готовят тонкие мазки-отпечатки и окрашивают азурэозином (краска Гимза) или синькой Леффлера. В результате

122

можно обнаружить не только стрептококки, но и клеточные элементы в препара-

ты, определить фагоцитарное число. Обнаружение в мазках стрептококков и по-

вышенного количества лейкоцитов указывает на воспаление молочной железы.

Чистую культуру маститного стрептококка получают путем посева секрета на кровяной МПА в чашках Петри, суточного инкубирования при 37 °С и последую-

щего пересева типичной для данного микроба колонии на сывороточный МПБ и кровяной агар. Полученную культуру идентифицируют с учетом морфологиче-

ских, культуральных, биохимических, гемолитических свойств и по антигенной структуре (РДП, МФА со специфическими сыворотками).

Штаммы, обладающие скрытой гемолитической способностью, видимой зо-

ны гемолиза не образуют. Для выявления их потенциальной гемолитической ак-

тивности используют САМР (КАМП-метод), получивший свое название по пер-

воначальным буквам фамилий австралийских исследователей – Кристи, Аткинс и Мунх-Петерсон. Метод заключается в том, что на пластинчатый кровяной агар в чашке Петри по диаметру петлей высевают в виде прямой полоски β-

гемолитический стафилококк. Отступив от нее 2-3 мм и перпендикулярно к ней,

высевают исследуемые штаммы стрептококков (по 3-4). Выдерживают в течение суток при 37 °С. Агалактийный стрептококк проявляет гемолиз в зоне, близкой к полоске выросшего стафилококка.

Биопробу ставят на двух молодых мышах или морских свинках внутрибрю-

шинно в дозе 0,5 мл, после гибели их вскрывают и из крови сердца делают высевы на МПА (для выделения чистой культуры маститного стрептококка).

Иммунитет. Непродолжительный и слабый.

Специфическая терапия отсутствует.

Контрольные вопросы:

1.Что является исследуемым материалом при диагностике стафило- и

стрептококкозов.

2.Что является фактором вирулентности стафилококков.

3.Что относится к культуральным свойствам патогенных стафилококков.

4.Как определить патогенность стафилококков.

123

5.Что является фактором вирулентности стрептококков.

6.Перечислить схему лабораторной диагностики стафилококкозов.

7.Перечислить схему лабораторной диагностики стрептококкозов.

Тема 3.2. Микробиологическая диагностика рожи свиней и листериоза Цель занятия: ознакомить студентов с возбудителями рожи свиней и листе-

риоза, изучить их морфологические особенности, распространение возбудителей в природе и значение патологии сельскохозяйственных животных; методы микро-

биологической диагностики заболеваний, вызванных возбудителями рожи свиней и листериоза.

Содержание:

1.Патологический материал.

2.Микроскопия мазков.

3.Культуральные и биохимические свойства возбудителя.

4.Биологическая проба.

5.Специфическая терапия и профилактика болезни.

6.Некоторые особенности заболевания.

ВОЗБУДИТЕЛЬ РОЖИ СВИНЕЙ Род Erysipelothrix

Вид Erysipelothrixrhusiopathiae

(Erytres - красный, pelor - кожа, thrix – волос; rhusio – красный, patiae – страдание)

Инфекционная болезнь, характеризующаяся при остром течении септицемией и воспалительной эритемой кожи (крапивницей) - на коже спины, боков и живота появляются пятна неправильной ромбовидной формы, от бледно-розового до тем-

но-красного цвета, исчезающие при надавливании; при хроническом течении - эн-

докардитом и артритами. Болеют свиньи преимущественно в возрасте 3-12 мес.

Бактерию открыли Л. Пастер и Л. Тюилье в 1882 г.

124

Рисунок 89 - Возбудитель рожи свиней:

Слева: гладкие S-формы (колонии возбудителя на питательной среде и мазок под микроскопом);

Справа: шероховатые R-формы (колонии возбудителя на питательной среде и мазок под микроскопом).

Морфология. Старое название возбудителя Erysipelothrix insidiosa (опасный,

коварный). Тонкая слегка изогнутая мелкая полиморфная палочка длиной 2-2,5

мкм. В мазках из патологического материала и культур палочки располагаются одиночно, в виде больших скоплений, парами. В мазках из бородавчатых разра-

щений возбудитель располагается в виде тонких переплетающихся, но не ветвя-

щихся нитей. Нитевидные формы могут быть и в старых культурах (т.е. возбуди-

125

тель проявляет полиморфизм). Грамположительный, спор и капсул не образует,

неподвижен.

Культуральные свойства. Аэробы или факультативные анаэробы, мик-

течении. Для патогенных штаммов характернаS-форма колоний. МПЖ – в виде ершика без разжижения среды (рисунки 89, 90).

Биохимические свойства выражены слабо. Ферментирует лактозу, молоко свертывает, образует сероводород, не изменяет салицин. Гемолиза не дает. Ката-

лазу не образует. Не обесцвечивает индикаторные среды с красками: нейтраль-

рот, конго-рот, метил-рот.

Антигенная структура. Рожистая бактерия содержит два антигена: термо-

лабильный групповой и термостабильный видовой. Два серовара: серовар А более вирулентен для свиней, выделяется в культурах от больных свиней в 95 % случа-

ев, а серовар В – менее вирулентен. Общим видовым антигеном является антиген

N.

Устойчивость высокая.Запаянная бульонная культура – до 35 лет.В трупах –

3-4 мес. В засоленной свинине - до 6 мес., в копченых продуктах - до 3 мес. Жаре-

ние и тушение не стерилизует мясо от рожистой бактерии. Прямые солнечные лу-

126

чи – 2 недели, 50 °C - 15 мин, 70 °С – 5 мин. Дезсредства: 2-3 % гидроксид натрия, 20 % взвесь свежегашеной извести, 2 % формальдегид, 5 % кальцинированная со-

да.

Патогенность.Восприимчивы свиньи, особенно в возрасте 3 – 12 мес. Спо-

радические (единичные) случаи болезни отмечены у лошадей, КРС, МРС, оленей,

собак. Восприимчивы дельфины, человек, многие виды грызунов и птицы. Носи-

телями являются морские и пресноводные рыбы. У человека это заболевание называется эризипелоид, поражения в основном на ладонях. Также у человека встречается рожистое воспаление кожи, но здесь возбудителем являются гемоли-

тические стрептококки. Через поврежденную кожу они могут также проникнуть в кровь и инфицировать любой орган или же вызвать генерализованную инфекцию

– сепсис. Самые чувствительные лабораторные животные: белые мыши, голуби.

Сроки гибели от 2-х до 4-х суток. Морские свинки не чувствительны!

Рисунок 91 - Клинические признаки рожи свиней.

127

Патогенез.Заражение в основном алиментарно, возможно трансмиссивно и через поврежденную кожу. Бактерии, размножаясь в месте первичной локализа-

ции (миндалины и солитарные фолликулы), выделяют токсины, обусловливающие сенсибилизацию организма, которая проявляется в виде различных поражений кожи. Через несколько дней микробы преодолевают защитные барьеры, проника-

ют в кровь и лимфу, размножаются в ней и разносятся по организму. Возникает сепсис, лихорадка, дистрофические и некротические изменения в паренхиматоз-

ных органах и сердечно-сосудистой системе, появляются тромбы, отеки, животное гибнет.

При хорошо выраженной реактивности животного организм оказывает дей-

ственную защиту против возбудителя, действие токсинов блокируется, но лизиса бактерий полностью не происходит (незавершенный фагоцитоз). Проявляется ал-

лергическая реакция в виде эритем.

Факторами вирулентности являются эндотоксины и агрессины.

Клинические признаки. Инкубационный период 2-5 дней, иногда 2 недели.

Болезнь может протекать в острой и хронической формах. При острой форме отмечают лихорадку,

угнетение, слабость задних конечностей, свиньи много лежат, стараются зарыться в подстилку.

Конъюнктивит, гастроэнтерит, на коже эритемы,

позднее они приобретают темно-багровый цвет.

грудка, конечностей цианотична. При отсутствии отложения на клапанах серд-

ца при роже свиней.

лечебной помощи через 2-4 дня животное поги-

бает. При хронической форме – бородавчатый эндокардит (на клапанах сердца бо-

родавчатые разращения в виде цветной капусты), артриты. Иногда некротизиру-

ются небольшие участки кожи (рисунки 91,92).

Лабораторная диагностика. Патологический материал: труп целиком, па-

ренхиматозные органы, трубчатая кость, кусочки кожи; при подозрении на хрони-

ческую форму - обязательно сердце с кровью, при наличии артритов - суставную

128

жидкость. Материал консервируют 30-40 % глицерином на стерильным физиоло-

гическом растворе или в насыщенном растворе поваренной соли. Трубчатую кость, очищенную от мягких тканей, обертывают марлей, пропитанной 2-3 % рас-

твором фенола.

Проводят микроскопию мазков-отпечатков по Граму; ставят МФА (из парен-

химатозных органов готовят суспензию тканей на солевом растворе и окрашивают флуоресцирующей сывороткой).

Делают посевы на простые питательные среды и инкубируют при 37 °С сут-

ки. Выросшую бульонную культуру идентифицируют по биохимическим свой-

ствам. Смыв агаровой культуры применяют в качестве антигена для РА. Ставят РДП и МФА, для чего биологическая промышленность выпускает сухие рожистые люминесцентные сыворотки для прямого РИФ.

Биопробу проводят на белых мышах (подкожно 0,1-0,2 мл) и голубях (внут-

римышечно в грудную мышцу 0,2-0,3 мл). Заражают суспензией из тканей орга-

нов. Наблюдение ведут до 7 дней. Мыши и голуби погибают через 2-4 дней. Их вскрывают и из органов делают посевы для выделения чистой культуры возбуди-

теля. При заражении белых мышей следует исключить Erysipelothrix murisepticum

– возбудителя септицемии мышей, по морфо-культуральным свойствам сходного с бактериями рожи свиней. E. murisepticum непатогенна для голубей.

При бактериологических исследованиях на рожу свиней следует учитывать возможность обнаружения возбудителя листериоза, схожего по тинкториальным,

морфо-культурально- и биохимическим свойствам с бактерией рожи свиней.

Иммунитет стойкий и длительный.

Специфическая профилактика и терапия. Первую вакцину против рожи-

стой бактерии создали Пастер и Тюилье в 1883 г путем аттенуации рожистой бак-

терии. На основе этой вакцины в России Конев получил собственную вакцину.

Первая вакцин Конева была ослаблена пассированием вирулентной рожистой бак-

терии через семь кроликов. Она не убивала голубей, но была вирулентна для мы-

шей. Вторая вакцина Конева была ослаблена пассированием через четырех кроли-

ков. Она убивала молодых мышей и голубей. Вакцины применялись более 30 лет.

129

Затем они были модифицированы в связи со снижением вирулентности и иммуно-

генности.

1. Депонированная живая вакцина против рожи свиней (матрикс второй вак-

цины Конева). Адъювант стимулирует иммуногенез и создает депо. Используют матриксный штамм 2-ой вакцины Конева.

2. Вакцина живая из слабовирулентного штамма VR-2. Вакцинный штамм

VR-2 был выделен из трупа свиньи в 1931 г румынским исследователем В. Вино-

градником. В процессе многократных пересевов на питательных средах штамм постепенно ослабил свои первоначальные вирулентные свойства, стал авирулент-

ным для свиней и кроликов и слабовирулентным для белых мышей и голубей.

Иммунитет сохраняется до 6 мес.

3.Сухая вакцина ССВР – слабовирулентная культура вакцинного штамма рожистой бактерии VR-2, концентрированная буферной взвесью гидрата окиси алюминия. При разведении опалесцирует.

4.Концентрированная гидроокисьалюминиевая (ГОА) фармолвакцина – ад-

сорбированная на гидроксиде алюминия и инактивированная формалином культу-

ра возбудителя рожи свиней серовара В.

5. Сыворотка против рожи свиней – получают путем гипериммунизации свиней, лошадей, волов или овец культурой возбудителя рожи – применяют с профилактической и лечебной целью. Иммунитет 14-30 дней.

ВОЗБУДИТЕЛЬ ЛИСТЕРИОЗА РодListeria

1.Listeria monocytogenes – основнойвид;

2.Listeria Jvanovi – септицемияуягнят.

Это острое инфекционное заболевание животных и птиц, характеризующиеся поражением центральной нервной системы, сепсисом, абортами, маститами. Бо-

леют грызуны, свиньи, жвачные, лошади, некоторые виды пушных зверей, птицы.

Восприимчив и человек.

130