Специфическая профилактика для сельскохозяйственных животных не раз-

работана. Для человека применяют накожную сухую живую вакцину, предложен-

ную в 1946 г Гайским и Эльбертом.

Контрольные вопросы:

1.Как происходит заражение возбудителями бруцеллеза.

2.Перечислить возбудителей бруцеллеза.

3.Какие методы используют для диагностики бруцеллеза.

4.Назовите источник инфекции туляремии.

5.Каким путем происходит заражение туляремии.

6.Почему аллергический метод диагностики туляремии может быть исполь-

зован для ранней и ретроспективной диагностики.

Тема 3.10. Микробиологическая диагностика пастереллеза и гемофилезов

свиней.

Цель занятия: ознакомить студентов с возбудителями пастереллеза, морфо-

логическими особенностями, ознакомить с методами диагностики и с особенно-

стями биопробы. Ознакомить с возбудителями гемофилезов свиней, изучить осо-

бенности культивирования возбудителей и лабораторной диагностики.

Содержание:

1.Патологический материал.

2.Микроскопия мазков, культуральные, биохимические свойства.

3.Биологическая проба.

4.Специфическая терапия и профилактика болезни.

5.Некоторые особенности заболевания.

ПАСТЕРЕЛЛЕЗ Род Pasteurella

Pasteurella multocida – основной возбудитель

P. haemolyticaуягнят

Геморрагическая септицемия. Инфекционная болезнь сельскохозяйствен-

ных и диких животных, в том числе птиц, характеризующаяся явлениями септи-

199

цемии и воспалительно-геморрагическими процессами во внутренних органах, на серозных и слизистых оболочках, кератоконъюнктивитами, поражениями суста-

вов, матки и молочной железы. Болеет КРС, овцы, буйволы, крупный рогатый скот, кролики, птицы и человек. Смертность - 90 %. Впервые возбудителя холеры кур в чистой культуре выделил Л. Пастер в 1880 г. Название Pasteurella возбудите-

лю присвоено в честь ученого в 1910 г.

Варианты пастерелл, вызывающие пастереллез у многих животных, по мор-

фологическим, культурным свойствам практически неотличимы. Их основное от-

личие заключается в различной степени вирулентности по отношению к опреде-

ленным видам животных, в том числе и лабораторных (мышь, голубь, кролик).

Пастереллы широко распространены у животных, их обнаруживают везде у здоровых животных. Особенно широко распространено пастереллоносительство у кур. Часто пастереллы играют роль секундарных возбудителей септицемии, пнев-

монии, плевропневмонии при простуде, истощении, неправильном содержании.

Морфология. Грамотрицательная, неподвижная короткая палочка формы овоида с закругленными концами до 1,5 мкм, средняя часть бактерии разбухшая и окрашивается бледнее, чем концы клетки.

Образуют капсулы, спор не образуют (ри-

сунок 121). Хорошо окрашивается по Рома-

новскому-Гимзе (имеют вид биполяров -

интенсивно окрашиваются по полюсам и слабо в центре) и обычными анилиновыми красками, но лучше метиленовой синькой.

В мазках из культур располагаются одиноч-

тивный анаэроб. Рост в течение 2 суток. На МПБ - спустя 2-4 суток слизистый оса-

док, поднимающийся при встряхивании пробирки в виде косички. В старых куль-

турах иногда нежная пленка. На сывороточном бульоне в косопроходящем свете колонии флюоресцируют, что связано с капсулообразованием. На МПА - через 1-2

200

дня слабое равномерное помутнение и мелкие округлые просвечивающие коло-

нии, затем они становятся серовато-белыми и врастают в агар. S-формы - гладкие прозрачные, более вирулентны и выделяются при остром течении болезни. МПЖ -

не разжижают.

Биохимические свойства. Углеводы ферментируют без образования газа.

Однако ферментация углеводов непостоянна, и видовым признаком считается способность ферментировать глюкозу, сахарозу, маннозу и галактозу. Лактозу не ферментируют. Образуют индол, каталазу. Молоко не свертывают. Гемолиза не дают. Пастереллы не растут в бычьей желчи - используют при выделении первич-

ных культур и дифференциации их от кишечных бактерий.

Устойчивость невысокая, в естественных условиях быстро погибают. В на-

возе, крови, холодной воде - 3 недели, в трупах - до 4 мес., в замороженных туш-

ках птиц - в течение года. Прямые солнечные лучи - несколько минут, 70 - 90 °С –

5-10 мин.

Антигенная структура. Два антигена: капсульный (К-антиген) и соматиче-

ский (О-антиген). К-антигены состоят из белка и полисахаридов. О-антигены представляют собой липополисахариднобелковый комплекс, а по биологическим свойствам являются эндотоксинами. Кроме К- и О-антигенов P. multocida содер-

жит многие другие, из них только растворимых обнаружено 18.

Патогенность. В лабораторных условиях пастереллы утрачивают или резко снижают свою вирулентность. Штаммы, образующие капсулу, высоковирулентны для мышей (капсулу рассматривают как фактор вирулентности). К числу важных свойств относится образование токсинов (эндотоксинов).

Патогенез. Заражение респираторно и алиментарно. Переход пастереллоно-

сительства в клинически выраженную стадию болезни происходит при ослабле-

нии защитных свойств макроорганизма под действием различных предраспола-

гающих факторов. В местах внедрения пастереллы размножаются, проникают в лимфу и кровь, вызывая септицемию и смерть животного через 12 - 36 ч. Генера-

лизации процесса способствуют подавление пастереллами фагоцитоза (неполный фагоцитоз), образование токсинов, повреждающих капилляры. В результате раз-

201

виваются обширные отеки в подкожной и межмышечной клетчатке и геморраги-

ческий диатез. Септицемия наступает тем скорее, чем вирулентнее возбудитель.

У устойчивых к болезни животных и при проникновении в организм слабо-

вирулентных пастерелл септицемия не развивается. Болезнь у них принимает по-

дострое или хроническое течение с локализацией возбудителя в отдельных орга-

нах, чаще в легких, где развивается крупозное или серозно-катаральное воспале-

ние. При сверхостром и остром течении крупозная пневмония не успевает раз-

виться, и в легких находят лишь явления отека и гиперемии.

В развитии патологических процессов важную роль играют токсические про-

дукты пастерелл (эндотоксины), а также высокая степень агрессивности возбуди-

теля, вероятно, связанная с капсулообразованием.

Клинические признаки. Инкубационный период - до 3 дней. При остром те-

чении (отечная, грудная, кишечная формы) - угнетение, повышение температуры до 42 °С, отсутствие аппетита, слизисто-гнойные истечения из носа, конъюнкти-

вит, кашель, геморрагический энтерит, отеки в межчелюстном пространстве, ги-

бель на 2-5 сутки; при отечной форме: поражение языка, груди, крупа, конечно-

стей, гибель на 1-2 сутки. У молодняка - поражение кишечника; у свиней - по-

краснение кожи на нижней стенке живота, симптомы фарингита, лихорадка, на-

рушение сердечной деятельности, асфиксия, иногда исхудание, слабость, кашель,

экзема. У животных возбудитель находится в моче, крови, фекалиях.

Лабораторная диагностика. Патологический материал: кровь, печень, селе-

зенка, легкие, трубчатая кость, головной мозг, лимфатические узлы, отечная ткань.

Для выделения культур пригоден только свежий патологический материал -

используют обогащенные питательные среды с 5-10 % крови барана или лошади или сывороточный МПБ. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 1-

2 дней. Готовят мазки и окрашивают по Граму, Романовскому-Гимзе или синькой Леффлера.

Биопроба. Кровь и эмульсии органов павших от пастереллеза животных бо-

лее вирулентны, чем культуры пастерелл, что объясняют наличием в первых аг-

202

рессинов. Выделенные из организма пастереллы без пассажа через восприимчи-

стве. Этих кроликов не используют в опыте (рисунок 122).

На ухе кролика надрезают кожу в виде кармана и в него вкладывают растер-

тую в стерильных условиях селезеночную или мышечную ткань павшего живот-

ного, после чего раневую поверхность уха заливают коллодием. У погибших от геморрагической септицемии кроликов обнаруживают характерный геморрагиче-

ский трахеит, а из их крови выделяют чистую культуру возбудителя.

При пастереллезе птиц для биопробы используют голубя, белую мышь, кро-

лика. Этих животных заражают: голубя в грудную мышцу (при достаточной виру-

лентности мате-

риала для этого иногда можно ограничиться даже царапиной иглы, смоченной

Иммунитет нестерильный, животные остаются пастереллоносителями.

Специфическая терапия.

1. Гипериммунная сыворотка против пастереллеза крупного рогатого скота,

буйволов, овец и коз, свиней - готовят путем гипериммунизации волов культурами из многих штаммов пастерелл, выделенных от соответствующих животных. Ак-

тивность сыворотки крови, полученной от волов, проверяют на кроликах: им под-

кожно вводят сыворотку, а затем через 24 ч заражают культурой пастерелл. Пас-

сивный иммунитет при введении сыворотки животным сохраняется до недели.

2. Сыворотка против пастереллеза, сальмонеллеза, парагриппа-3 и инфекци-

онного ринотрахеита крупного рогатого скота.

Специфическая профилактика. В настоящее время для профилактики пас-

тереллеза у животных применяют убитые и живые вакцины.

1. Преципитированная фармолвакцина против пастереллеза крупного рога-

того скота, овец, свиней.

2.Полужидкая формолгидроокисьалюминевая вакцина против пастереллеза крупного рогатого скота и буйволов.

3.Концентрированная поливалентная вакцина против паратифа, пастерел-

леза и энтерококковой инфекции поросят.

4. Эмульгированная вакцина против пастереллеза крупного рогатого скота,

буйволов, овец.

5.Эмульгированная вакцина против пастереллеза свиней.

6.Экстрактфармоловая вакцина против пастереллеза кроликов.

7.Эмульгированная вакцина против пастереллеза норок.

8.Эмульгированная вакцина против пастереллеза нутрий.

9.Ассоциированная вакцина против ботулизма и пастереллеза норок.

10.Фармолвакцина против пастереллеза жвачных и свиней – масляная.

В птицеводстве применяют живые вакцины:

1.Из французских (пастеровских) штаммов.

2.Из отечественных штаммов, слабовирулентные штаммы АВ и К.

3.Эмульсин вакцины против пастереллеза птиц.

204

ВОЗБУДИТЕЛИ ГЕМОФИЛЕЗОВ Род Haemophilus

Возбудители этих болезней являются постоянными обитателями слизистых оболочек верхних дыхательных путей животных многих видов. Их относят к группе потенциально патогенных микроорганизмов, проявляющих болезнетвор-

ные свойства при определенных условиях, чаще при ослаблении резистентности организма или на фоне некоторых инфекций (парагрипп-3, грипп и др.).

Пассируясь через организмы животных с низкой устойчивостью к болезням,

гемофильные бактерии усиливают потенциальную патогенность и, распространя-

ясь воздушно-капельным путем, приобретают способность вызывать заболевание у больших групп животных.

В настоящее время наибольшую экономическую значимость приобрели гемо-

филезы свиней и птиц. Среди свиней, главным образом отъемного возраста, во многих странах мира известны две болезни, вызываемые микроорганизмами рода

Haemophilus, - гемофилезный полисерозит (болезнь Глессера) и гемофилезная плевропневмония, а среди птиц - гемофилез кур.

Морфология. Гемофильные бакте-

рии - это полиморфные, короткие палоч-

ки или коккобактерии размером до 0,3

мкм, спор не образуют, неподвижные,

факультативные анаэробы, грамотрица-

тельные, некоторые виды имеют капсулу

(рисунок 124). В мазках из патологиче-

ского материала имеет вид коротких це-

почек, нитей. Они постоянно обитают на

слизистых оболочках дыхательных путей

Рисунок 124 - Haemophilus parasuis.

и половых органов.

205

Особенности культивирования. Гемофильные бактерии - это группа мик-

роорганизмов, которые в ходе эволюции паразитизма утратили способность само-

стоятельно синтезировать некоторые коферменты, играющие у бактерий важную

роль в процессах био-

логического окисления.

В естественных усло-

виях источником необ-

ходимых БАВ для ге-

мофильных бактерий являются ткани макро-

организма. В лабора-

торных условиях для их культивирования нуж-

ны специальные пита-

Гемофильные бактерии относятся к факультативным анаэробам; для роста

некоторых из них необходимо повышенное содержание С02 в атмосфере. Темпе-

ратурный оптимум – 37-38 °С. Их отличительной особенностью является потреб-

ность в специфических ростовых факторах. В качестве универсальных питатель-

ных сред чаще применяют шоколадный агар (к расплавленному 2 % МПА при температуре 45-50 °С добавляют 10 % по объему стерильной дефибринированной крови барана) и среду Левинталя, а также агар Хоттингера. После посева патоло-

гического материала или пересева культуры чашки выдерживают в термостате 30

мин, затем делают крестообразный посев культур негемолитического штамма ки-

шечной палочки и методом штриха по диаметру чашки. Гемофильные бактерии образуют рост в зоне 1-2 см от штриха, т.к. при росте кишечная палочка продуци-

рует в агар ростовые факторы, стимулирующие развитие гемофилезной бактерии.

Чашки инкубируют в термостате при 38 °С 24 ч, после чего просматривают куль-

206

туры. На кровяном МПА - мелкие, выпуклые, с блестящей поверхностью колонии слизистой консистенции, без зоны гемолиза. На жидких средах умеренная опа-

лесценция и продукция эндотоксина.

Биохимические свойства. Проводят определение потребности в ростовых факторах, определение редукции нитратов до нитритов, наличие индола, оксидазы, ката-

лизы.

ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕМОФИЛЕЗНОГО ПОЛИСЕРОЗИТА

Haemophilus parasuis

Инфекционное, септическое заболевание поросят после отъемного периода,

характеризующееся серозно-фибринозным воспалением плевры, перикарда, брю-

шины и суставов.

Устойчивость. Во внешней среде малоустойчивы.

Патогенность. Восприимчивы поросята через 8-15 дней после отъема. За-

болеваемость около 70 %, а летальность – 50 %.

Патогенез. Возбудитель заносится кровью на серозные оболочки, размно-

жается, вызывая воспаление. Под влиянием протеаз микроб разрушается, освобо-

ждаются эндотоксины, усугубляющие патологические процессы.

Клинические признаки. Инкубационный период - от нескольких часов до одних суток. Температура тела повышается до 41,5 °С. Поросята отказываются от корма, шерсть взъерошена, передвигаются они осторожно. Для облегчения работы сердца и легких часто принимают позу сидячей собаки. Иногда наблюдается ка-

шель, чихание, рвота и симптомы поражения центральной системы и артриты.

Лабораторная диагностика. Патологический материал: экссудат из пери-

тональной, плевральной и перикардиальной полостей, соскобы с пораженных се-

розных оболочек. Проводят микроскопию, посевы. Определяют патогенность вы -

деленной культуры на морских свинках. Колонии, выросшие на шоколадном ага-

ре, суспендируют и 1 мл вводят внутрибрюшинно трем морским свинкам, наблю-

дают 5 дней. Культуру признают патогенной в случае гибели одной морской свин-

ки или более и выделения от них исходной культуры.

Иммунитет не изучен.

207

Специфическая терапия. Не разработана.

Специфическая профилактика. Инактивированная вакцина для иммуниза-

ции супоросных свиноматок и молодняка.

ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕМОФИЛЕЗНОЙ ПЛЕВРОПНЕВМОНИИ

Haemophilus pleuropneumoniae

Инфекционная контагиозная болезнь свиней, характеризующаяся при ост-

ром течении геморрагическим воспалением легких и фибринозным плевритом.

Патогенность. Восприимчивы свиньи всех возрастов. Заболеваемость до

80 %, а при остром течении - до 100 %. Источником болезни служат больные и бактерионосители. Заражение происходит респираторно. Распространению болез-

ней способствуют неблагоприятные факторы внешней среды, неудовлетворитель-

ный микроклимат в помещениях, неполноценное кормление животных.

Антигенная структура. Установлено десять серологических вариантов возбудителя, отличающихся друг от друга только по капсульному антигену.

Клинические признаки. Температура тела повышается до 41-42 °С, дыха-

ние затруднено, цианоз. При явлениях выраженного отека легких смерть может наступить через 6-12 ч. При более длительном течении наблюдают одышку, ка-

шель, серозно-слизистое, иногда кровянистое истечение из носа. Гибель - через 2-

5 дней. При хроническом течении животные отстают в росте, часть из них погиба-

ет при обострении процесса, а некоторые свиньи выздоравливают.

Лабораторная диагностика. Патологический материал: кусочки поражен-

ных легких, средостенные и бронхиальные лимфатические узлы. Микроскопия по Граму. Параллельно делают посев на предварительно подсушенный кровяной МПА в чашках, выдерживают в термостате 24 ч, затем изучают характер роста.

Патогенность выделенной культуры определяют на белых мышах при внут-

рибрюшинном заражении.

Иммунитет. Изучен слабо.

Специфическая терапия. Больных животных не лечат - убивают.

Специфическая профилактика. Гидроокисьалюминиевая фармолвакцина для супоросных свиноматок (колостральный иммунитет).

208