Диагностика трихенелеза
.docxМетодика послеубойной диагностики трихинеллеза.
Применяют различные методы трихинеллоскопии. Свинину подвергают трихинеллоскопин, начиная с 3-х недельного возраста. Также исследованию подлежат туши кабанов, барсуков, медведей, морских млекопитающих.
Для исследования применяются методы компрессионной трихинеллоскопии переваривания в искусственном желудочном соке.
Компрессионная трихинеллоскопия. Для исследования от каждой туши свиней берут две пробы мяса, весом по 60 г (общий вес 120г).
Пробы мяса рекомендуется брать из ножек диафрагмы. При исследовании привозного свиного мяса и при отсутствии в нем ножек диафрагмы, разрешается брать пробы из мышечной и реберной частей диафрагмы, а также из межреберных, шейных, жевательных мышц. Номера проб должны совпадать с номером туши.
Для исследования готовят мышечные срезы, вырезая изогнутыми ножницами (вогнутой стороной к мясу) вдоль мышечных волокон, ближе к их сухожильной ткани, небольшие кусочки мяса величиной с овсяное зерно. Срезы берут из разных мест и раскладывают их в середине клеточки нижнего стекла компрессориума. От каждой туши делают не менее 24 срезов (в настоящий момент рекомендуется исследовать большее количество срезов, в зависимости от состояния эпидемиологической и эпизоотологической ситуации территории - иногда до 48 и даже до 96). При этом учитывается заболеваемость человека и заболеваемость домашних свиней за 5 и 10 лет.
Затем срезы раздавливают в такой мере, чтобы через них можно было легко читать печатный текст. Просмотр раздавленных срезов производят при малом увеличении микроскопа или с помощью проекционного трихинеллоскопа с увеличением в 50-100 раз. При наличии личинок визуализируются капсулы лимоновидной, овальной или округлой форму со спирально изогнутыми трихинеллами.
В смежных мышечных волокнах исчезает поперечная исчерченность. Размеры капсулы варьируют в зависимости от вида животного и длительности инвазии, инкапсулированном виде личинки трихинелл располагаются вдоль мышечных волокон и в не обнаруживаются труднее.
С течением времени (через 3 мес.) капсулы трихинелл могут подвергаться реактивному воспалению и обызвествляться, начиная с полюсов. При полном обызвествлении личинки могут сохранять жизнеспособность до 20 лет и более. При исследовании обызвествленных срезов их обрабатывают 10% раствором соляной кислоты, при этом известь растворяется, а срезы просветляются.
Переваривание в искусственном желудочном соке.
Для этого используют аппараты различных конструкций, которые представляют собой термостатирующую камеру с вмонтированными в нее реакторами (аппарат АВТ восемь, АВТ-Л5М - четыре: аппарат АВТ-У три: АВТ-16 - два реактора; "Гастрос" один реактор), предназначенными для растворения мышечной ткани в переваривающей жидкости. Реактор аппарата имеет мешалку с индивидуальным приводом от электродвигателя, отстойник для сбора осадка и звуковой таймер.
Для исследования туш на трихинеллез отбирают пробы из ножек диафрагмы на границе перехода мышечной ткани в сухожилие. От туш животных из зон, где регистрируется трихинеллез, готовят групповую пробу общей массой до 100 г, состоящую из проб от 20 туш или более, по 5 г каждая (по 2,5 г от каждой из двух ножек диафрагмы одной туши). От свиных туш животных из зон, где трихинеллез не регистрируется в течение последних 8-10 лет, готовят групповую пробу общей массой до 100 г, состоящую из проб от 100 туш или менее, по 1 г каждая (по 0,5 г от каждой из двух ножек диафрагмы одной туши). Отобранную групповую пробу измельчают на мясорубке, а фарш собирают в стакан с порядковым номером, соответствующим номеру реактора. Для получения специальной жидкости в каждый из реакторов заливают 2,5 л теплой (40-42°C) воды, вносят 6 г пищевого пепсина активностью 100.000 ЕД и 30 мл концентрированной соляной кислоты. Смесь перемешивают. Затем в реактор вносят измельченную групповую пробу и включают мешалку. По окончании переваривания групповой пробы жидкость отстаивают, а осадок исследуют на наличие трихинелл под микроскопом, лупой или на микропроекторе.
При выявлении в осадке одной или более личинок трихинелл исследованную группу свиных туш переводят на запасной подвесной путь, разделяют ее на 8 групп по 12-13 туш (первоначальная групповая проба от 100 туш) или по 2-3 туши (первоначальная групповая проба от 20 туш), берут снова пробы и исследуют, как указано выше. Туши из группы, давшей положительные результаты при повторной трихинеллоскопии исследуют индивидуально в аппарате АВТ, выявляя таким образом тушу, пораженную личинками трихинелл.
Исследование мясопродуктов
Дополнительная обработка срезов
При исследовании замороженного и соленого мяса срезы обрабатывают 50% водным раствором глицерина, при этом срезы просветляются.
На каждый срез наносят 1-2 капли глицерина, выдерживают 3 минуты и раздавливают в компрессориуме. Для большей эффективности исследования В.Ю. Вольферц рекомендовал наносить на раздавленные между стеклами срезы 1-2 капли полу децинормального раствора соляной кислоты или 0,5 мл насыщенного раствора метиленовой синьки, разведенного в 10 мл дистиллированной воды. При обработке соляной кислотой мышечные волокна становятся прозрачными, сероватого цвета, капсула набухает и становится хорошо очерченной, жидкость в полости капсулы просветляется.
При обработке срезов раствором метиленовой синьки мышечные волокна окрашиваются в бледно-голубой цвет, жировая ткань не окрашивается или приобретает по периферии слаб- розовую окраску, капсулы трихинелл становятся лилово-розовыми или синими, а паразит не окрашивается и его хорошо видно.
При исследовании замороженного, копченого и вяленого мяса срезы обрабатывают 5%. раствором КОН, при этом срезы размягчаются и легче раздавливаются. Исследуемые мышцы помещают на 1 час в данный раствор при комнатной температуре, или на 10 мин. в раствор с Т 45°С, а затем промывают водой и раздавливают.
Трихинеллоскопия свиного шпика. Трихинеллы могут локализоваться в подкожной жировой ткани, в которой макроскопически не видно мышечных прослоек. Шпик без видимых мышечных прослоек разрезают на всю толщину и срезы берут с внутренней поверхности шпика по линии его расслоения (такие линии образуются в местах атрофированных мышц). Делают не менее пяти срезов толщиной около 0,5 мм и погружают их на 5-8 мин в 1%-ный раствор фуксина на 5%-ном растворе едкого натра. Затем их извлекают из раствора, раскладывают на нижнем стекле компрессорнума, закрывают верхним стеклом, притирая несколько слабее, чем срезы из мышечной ткани, и исследуют под трихинеллоскопом. На фоне неокрашенных жировых клеток резко выделяются трихинеллы в виде светло-красных или желто-красных включений. Оболочка трихинелл бывает ясно выражена.