28. Методы создания анаэробных условий для культивирования микроорганизмов в лаборатории.

Для создания анаэробных условий при культивировании микроорганизмов используют физические, химические, биологические и комбинированные методы.

Физические методы

—Удаление кислорода из питательных сред. Это достигается путём кипячения сред в течение 15–20 минут на водяной бане, затем среды быстро охлаждают до 45–50 °C. После посева поверхность жидкой питательной среды заливают стерильным вазелиновым маслом или парафином, чтобы предотвратить проникновение кислорода.

—Посев в высокий столбик питательной среды. Кислород воздуха диффундирует обычно на расстояние 1,5–2 см от поверхности, а в глубине создаются благоприятные условия для роста анаэробов.

—Использование анаэростатов. Это вакуумные металлические или стеклянные эксикаторы, которые сохраняют высокое разрежение в течение продолжительного времени.

Химические методы

—Применение веществ-редуцентов. Их используют для связывания остатков кислорода в питательных средах. К редуцентам относятся тиогликолевая кислота, аскорбиновая кислота, различные сахара, цистин и цистеин, муравьинокислый натрий и другие.

—Использование щелочных растворов пирогаллола для поглощения кислорода в замкнутой воздушной среде.

Биологические методы

—Совместное выращивание анаэробов и аэробов (метод Фортнера). На одну половину чашки Петри с плотной питательной средой засевают исследуемый материал, а на другую — культуру аэробного или факультативно-анаэробного микроорганизма, способного энергично поглощать кислород. После посева чашку закрывают крышкой, края которой для герметизации заливают парафином или заклеивают пластилином.

Комбинированные методы

—В большинстве практических лабораторий применяют смешанные методы создания анаэробных условий. Например, для работы с наиболее чувствительными к молекулярному кислороду анаэробами используют строгую анаэробную технику (метод Хангейта). Метод основан на создании лишённых кислорода питательных сред, воздух над которыми удаляется и замещается бескислородным газом. Для предотвращения попадания кислорода сосуды с питательными средами закрывают резиновыми пробками. Во время инокуляции анаэробиоз поддерживается за счёт постоянного омывания сред потоком бескислородного газа.

29. Культуральные признаки микроорганизмов, определяемые на жидких и плотных питательных средах.

Культуральные признаки микроорганизмов — это характерные особенности их роста на плотных и жидких питательных средах. Эти признаки используются для идентификации видов микроорганизмов. 

Культуральные признаки микроорганизмов, определяемые на плотных питательных средах, включают макроскопические и микроскопические характер

Макроскопические признаки

Форма — округлая, амебовидная, ризоидная, неправильная и т. д..

Размер (диаметр) — точечные, мелкие (до 2 мм), средних размеров (до 4 мм) и крупные (более 4 мм в диаметре).

Интенсивность роста

Поверхность — гладкая, шероховатая, складчатая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная.

Профиль — плоский, выпуклый, конусовидный, кратерообразный и т. д..

Прозрачность — тусклая, матовая, блестящая, прозрачная, мучнистая.

Цвет — бесцветный или пигментированный (белая, жёлтая, золотистая, красная, чёрная).

Край — ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и т. д..

Структура — однородная, мелко- или крупнозернистая, струйчатая.

Поверхность колоний — плотная, мягкая, гладкая блестящая, широховатая, слизистая (тянется за петлёй), хрупкая (легко ломается при соприкосновении с петлёй).

 Микроскопические признаки

Смотрят края прималом увеличении

Край и структура — их определяют с помощью лупы или на малом увеличении микроскопа, поместив чашку Петри с посевом на столик микроскопа крышкой вниз.

Отметили конструкцию

Форму бактерий

(Кокки, спиральные, палочки, вибрионы, спирохеты)

Взаимное расположение

(Поодиночке, парно, цепочками)

Окраска по Граму

Грамположительные бактерии окрашиваются в тёмно-фиолетовый цвет, так как сохраняют краситель, оставшийся внутри их толстых клеточных стенок

Грамотрицательные бактерии (Грам-) обесцвечиваются под действием спирта, но при добавлении контрастного красителя вновь окрашиваются в красный или розовый цвет. Это связано с тонкой клеточной стенкой грамотрицательных бактерий, которая препятствует проникновению красителя внутрь клетки.

Подвижность культуры

Идентичность с исходной культурой

Тип колонии — различают гладкие (S-тип) с круглой и выпуклой формой, гладкой поверхностью, влажной консистенцией и шероховатые (R-тип) с шероховатой поверхностью, неправильными краями, сухой консистенцией. 

Культуральные признаки на жидких средах

Рост микроорганизмов в жидких питательных средах сопровождается помутнением среды, образованием плёнки или осадка. Некоторые признаки, которые отмечают при описании роста в жидкой среде:

Характер помутнения — слабая, умеренная или сильная.

Наличие плёнки — тонкая, плотная или рыхлая, гладкая или складчатая.

Наличие пристеночного кольца

Осадок — скудный или обильный, плотный, рыхлый, слизистый, хлопьевидный.

Нередко рост микроорганизмов сопровождается — появлением запаха, пигментацией среды, выделением газа (обнаруживают по образованию пены, пузырьков).