24. Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.

Выявления степени чувствительности бактерий к антибиотикам проводится такими методами:

1 Метод дисков. Специальные диски фильтровальной бумаги, которые пропитанные различными растворами антибиотиков, помещаются поверх колоний микроорганизмов на питательной среде.

2 Е-тесты. Используется специальная градуированная полоска с различной концентрацией антибиотика. С помощью такой шакалы можно определить минимальную концентрацию антибиотика, способную воздействовать на микроорганизм.

3 Метод разведения. В питательную среду, чаще жидкую вносят различные разведения антибиотика от максимальных доз до парно разведенных минимальных концентраций.

Материал для исследования

Биологическим материалом для данного исследования может служить кровь, моча, слюна, мокрота и любое отделяемое из ран. Тип материала, который должен быть взят для исследования, определяется врачом с учетом предварительного диагноза пациента и вида протекающей инфекции.

Ход анализа

Анализ выполняют по этапам, четко соблюдая предписания. Подбирают разные антимикробные химиотерапевтические препараты диско-диффузным методом.

1 Подготовка инструментов. На столе у лаборанта должна располагаться Чашка Петри, содержащая питательный агар с желеобразной структурой. В ней колонии патогенных микроорганизмов будут созревать намного быстрее, поэтому сроки исследования сократятся. Для быстрого получения результата дополнительно подготавливают прибор для инкубирования, где можно увеличить температуру до 37°. Это оптимальный показатель для активного размножения бактерий без порчи материала.

2 Посев. Биологический материал из ткани человека распределяют равномерно по всей поверхности питательной среды газоном. Недопустимо точечное расположение, так как это создаст неудобство в применении разных антибиотиков.

3 Ожидание роста. На это может уйти 1-2 дня. Для сокращения сроков образец с чашкой Петри размещают в приборе для инкубации, поднимая температуру до 37°. Эти действия выполняют не более 1 суток.

4 Просмотр результатов. О наличии роста бактерий свидетельствует диффузный рост по всей поверхности питательной среды. Это означает, что инфекция есть, поэтому для нее требуется подобрать правильный антибиотик.

5 Подбор антибиотиков. По разным участкам поверхности агара с выросшими колониями бактерий распределяют небольшие диски, пропитанные антибиотиком. Выжидают, пока начнется реакция. Она может быть обильной, средней или полностью отсутствующей. Данные для каждого вида антибиотика заносят в лабораторный бланк, который выглядит в виде таблицы.

Таким методом можно выявлять разную степень чувствительности к большому спектру антибиотиков. Врач сможет назначить антимикробные химиотерапевтические препараты, не боясь за отсутствие эффекта. Результат лечения возникнет быстро.

Результаты исследования

В результате, после термостатирования (нахождении питательной среды с колониями микроорганизмов при температуре 36-37 С), через определенный промежуток времени (чаще через 12-24 часа) оцениваются результаты. Проводится измерение зоны отсутствия роста бактерий вокруг дисков (Е-полоски) или выявления отсутствия роста микроорганизмов при определенной концентрации антибиотик в случае метода разведения. 

После оценки результатов можно выделить три группы бактерий по отношению к конкретному антибиотику:

• Чувствительный микроорганизм. Данный антибиотик может быть успешно применен для терапии заболевания вызванных этим возбудителем.

• С относительной резистентностью. Терапия таким лекарственным средством будет успешна только при определенных условиях (высокая доза препарата, большая концентрация микроорганизмов и т.д.).

• Резистентный. Применение антибиотика против данного возбудителя не дает угнетения его роста, а значит и эффективного лечения заболевания.

Определенная в результате исследования МПК (минимальная подавляющая концентрация) позволяет врачу подобрать оптимальную дозировку препарата для эффективного лечения.

Диффузионные методы:

• Метод дисков: На питательную среду с бактериями накладываются бумажные диски, пропитанные антибиотиками. После инкубации измеряется зона ингибирования роста вокруг дисков, что указывает на чувствительность или устойчивость бактерий к антибиотикам.

• Е-тест: Используется полоска, содержащая антибиотик в различных концентрациях. На полоске определяется минимальная концентрация, подавляющая рост бактерий. 

Методы разведения:

• Метод разведения в жидкой среде: В разные концентрации антибиотика вносят бактериальную суспензию, и после инкубации определяется минимальная подавляющая концентрация (МПК) антибиотика.

• Метод разведения в плотной среде: Подобно методу разведения в жидкой среде, но антибиотик разводится в питательной среде перед ее посевкой бактериями. 

Дополнительная информация:

• Метод дисков и Е-тесты широко используются из-за своей простоты и доступности. 

• При определении чувствительности учитывается не только минимальная подавляющая концентрация, но и другие факторы, такие как минимальная бактерицидная концентрация (МБК).