ЯГТУ / Профессиональная подготовка специалистов для производства иммунобиологических лекарственных препаратов (вакцин). Направление «Biotechnical» / Презентация лекции 3 Выделение и очистка биологически активных субстанций
.pdf
Хроматография |
61 |
Обращеннофазная (RPC)
•Метод основан на обратимом взаимодействии биомолекул с гидрофобной поверхностью сорбента
•Требует органических растворителей
•Связывание как правило очень сильное, на степень влияют условия и состав буферов
•Элюирование осуществляется как правило в повышающейся концентрации органического растворителя
Хроматография |
62 |
Обращеннофазная (RPC) – ионно-парные агенты
Хроматография |
63 |
Обращеннофазная (RPC)
Основные характеристики:
•Высокоразрешающий метод, в основном применяется на финальных стадиях
(Polishing) или в аналитике (контроль)
•Органические растворители могут приводить к потере активности и денатурации
•Очень высокое разрешение
•При очистке происходит концентрирование образца
•Связывание может быть очень сильным – сложности элюирования
Хроматография |
63 |
Обращеннофазная (RPC)
•Обращено фазная хроматография
•Ионообменная хроматография
•Гель фильтрационная, эксклюзивная хроматография
•Аффинная хроматография
•Хроматография гидрофобного взаимодействия
Хроматография |
65 |
+ Число этапов очистки зависит от необходимой чистоты
-Увеличение числа этапов приводи к потере целевого компонента
-Большое количество этапов и длительность процессов может повлиять на свойства и активность белка
Хроматография |
66 |
Комбинирование методик
Захват
Промежуточная
очистка
Финальная
очистка
Хроматография |
67 |
Примеры готовых протоколов
Трех стадийная очистка плазмид. Первый этап гель-хроматография, второй этап – аффинная хроматография и конечная очистка на сильном анионообменном сорбенте
Хроматография |
68 |
Примеры готовых протоколов
Хроматограммы друхстадийной очистки адновирусов с использованием сорбентов
Capto Q ImpRes и Capto Core 700
Хроматография |
69 |
Влияние размера сорбента
Мембранная хроматография |
70 |