ЯГТУ / Профессиональная подготовка специалистов для производства иммунобиологических лекарственных препаратов (вакцин). Направление «Biotechnical» / Презентация лекции 3 Выделение и очистка биологически активных субстанций

Ионообменная (IEX)

•Метод основан на обратимом взаимодействии заряженного белка с

противоположно заряженным сорбентом

•Типичная схема включает этапы: нанесение образца / связывание,

отмывка, элюирование, регенерация

•Элюирование осуществляется буферами с большей ионной силой

•Для планирования разделения необходима информация о pI

белковой молекулы

•Суммарный заряд белковой молекулы зависит от pH буфера

•pH буфера является дополнительным фактором селективности

Ионообменная (IEX)

Элюция в градиенте ионной силы раствора – при использовании на финальных стадиях можно получить чистый препарат белка.

Ступенчатая элюция – при использовании на начальных стадиях можно получить фракцию близких по заряду белков, содержащую целевую молекулу.

Ионообменная (IEX)

Основные характеристики:

•Наиболее распространенная методика, может использоваться на разных этапах

•Низкая специфичность

•Высокая емкость, разрешение, скорость

•При очистке происходит концентрирование образца

•Элюирование проводится в градиенте –повышающейся концентрации соли

•CF –Хроматофокусировка редко используемая разновидность IEX , иногда дает очень

хорошие результаты

Гидрофобная (HIC)

•Метод основан на обратимом взаимодействии белков с

гидрофобными лигандами, иммобилизованными на поверхности сорбента

•Типичная схема включает этапы: нанесение образца / связывание,

отмывка, элюирование, регенерация

•Связывание происходит в буферах с высокой концентрацией соли

•Элюирование осуществляется буферами с меньшей ионной силой

•Другие способы элюирования: изменение полярности буфера, pH,

добавление хаотропных агентов и детергентов

Гидрофобная (HIC)

В случае с гидрофобной хроматографии элюция происходит в обратном градиенте ионной силы – при использовании на финальных стадиях можно получить чистый препарат белка в низко солевом буфере, что удобно для формулирования инъекционных или лиофилизованных форм.

Групповое фракционирование – аналогично ионообменной хроматографии, но происходит при снижении ионной силы раствора.

Гидрофобная (HIC)

Ряд Гофмейстера показывает влияние ионов на растворимость белка

Влияние солей на селективность

Гидрофобная (HIC)

Основные характеристики:

•Методика может использоваться на всех стадиях очистки

•Этап после ионообменной или преципитации сульфатом аммония

•Низкая специфичность

•Средняя емкость, разрешение, скорость

•При очистке происходит концентрирование образца

•Связывание происходит в высокой концентрации соли